Isothermische nucleïnezuuramplificatietechnologie kan worden onderverdeeld in vele categorieën volgens verschillende amplificatieprincipes. Momenteel is de meest voorkomende en meest gebruikte de loop-mediated isothermal amplification technology (LAMP), ontwikkeld door de Japanse wetenschapper Notomi et al. in 2000. Bst DNA polymerase is het kernenzym van isothermal amplification technology. Wat is de functie en prestatie van Bst DNA polymerase in LAMP?

1. Welke rol speelt Bst DNA-polymerase in LAMP?
2. Wat is gevriesdroogde Bst Plus DNA-polymerase?
3. Wat is de producteigenschap van Gevriesdroogd Beste Plus DNA Polymerase (14405ES)?
4. Wat is de productprestatie van gevriesdroogd Beste Plus DNA Polymerase(14405ES)?
5. Gerelateerde producten
6. Over het lezen

1. Welke rol speelt Bst DNA-polymerase in LAMP?

De technische eigenschap van LAMP is om vier primers te ontwerpen voor zes regio's van het doelgen en de amplificatiereactie uit te voeren met behulp van BST DNA-polymerase onder de constante temperatuurconditie van 60~65 ℃, waarmee 109-1010 keer amplificatie wordt bereikt binnen 15-60 minuten. Bst DNA-polymerase heeft een sterke thermische stabiliteit, strengverplaatsingsactiviteit en polymerase-activiteit. Het kan een snelle, efficiënte en specifieke amplificatietemplate zijn onder constante temperatuurcondities zonder PCR thermische denaturatie amplificatiecyclus, en het hele LAMP-experiment binnen 1 uur voltooien.

2. Wat is gevriesdroogde Bst Plus DNA-polymerase?

Gevriesdroogde Bst Plus DNA Polymerase wordt gebruikt om glycerolvrije Bst Plus DNA Polymerase te bevriezen, wat het probleem van glycerolvrije Bst enzyminstabiliteit oplost. Tegelijkertijd heeft dit product een sterke 5 '- 3' DNA polymerase activiteit, strengverplaatsingsactiviteit en dUTP tolerantie, wat geschikter is voor de anti-vervuiling isotherme amplificatiereactie, het is handig voor klanten om te gebruiken bij de productie van gevriesdroogde producten.

Figuur 1: 14405ES-Lyophilized Bst Plus DNA Polymerase (60 U/μL, Glycerolvrij)

3. Wat is de producteigenschap van gevriesdroogd Beste Plus DNA Polymerase(14405ES)?

• Het glycerolvrije enzym, geschikt voor lyofilisatie
• Transport bij normale temperatuur om kosten te verlagen
• Sterke strengverplaatsingsactiviteit, gevoelig en stabiel
• Snelle heroplossing en comfortabele bediening

4. Wat is de productprestatie van gevriesdroogd Beste Plus DNA Polymerase(14405ES)?

4.1 Vorm van gevriesdroogd poeder: vergeleken met het T0-moment blijft de vorm van het poeder onveranderd na 15 DAGEN vriesdrogen bij 45 ℃.

Figuur 2. Vorm van gevriesdroogd poeder

4.2 stabiliteit

De prestaties van gevriesdroogd poeder na thermische versnelling kunnen nog steeds consistent zijn met die van vloeibaar reagens, en gevriesdroogd poeder (14405ES) is
universeel en kan worden gebruikt voor de fluorescerende kleurstofmethode en de pH-indicatormethode.

4.2.1 Fluorescerende kleurstofmethode - stabiliteit

In het RT-LAMP fluorescentiekleurstofversterkingssysteem zijn de prestaties van glycerolvrij Bst-vriesgedroogd poeder na T0, 45℃-7 dagen en 45℃-15 dagen thermische versnelling consistent met die van de vloeibare versie van glycerolvrij Bst-enzym, en NTC bereikt geen piek.

Experimentele omstandigheden:

Let op: De controlegroep is een vloeibare versie zonder glycerol-Bst-enzym van dezelfde concentratie.

Figuur 3. Stabiliteitsresultaten

4.2.2 Fluorescerende kleurstofmethode - Prestaties van Bst-enzym na vriesdrogen van RT-LAMP-systeem

In het RT-LAMP fluorescentiekleurstofversterkingssysteem was de productprestatie van glycerolvrij Bst gevriesdroogd poeder gevriesdroogd in het RT-LAMP-systeem na 45 ℃ - 15 dagen consistent met die van de vloeibare versie van glycerolvrij Bst-enzym. De detectiegraad van het product in de controlegroep en het RT-LAMP-systeem na gevriesdroogd was respectievelijk 100% (16/16) en 94% (15/16).

Experimentele omstandigheden:

Let op: De controlegroep is een vloeibare versie zonder glycerol-Bst-enzym van dezelfde concentratie.

Figuur 4. Prestaties van Bst-enzym na vriesdrogen van RT-LAMP-systeem

4.2.3 PH-indicatormethode ——Stabiliteit

In het RT-LAMP pH-indicatorversterkingssysteem bedroeg de detectiegraad van Bst-vriesgedroogd poeder, vergeleken met de T0-tijd, 88% (7/8) na 45 ℃ - 15 dagen thermische versnelling.

Experimentele omstandigheden:

Let op: De controlegroep is een vloeibare versie zonder glycerol-Bst-enzym van dezelfde concentratie.

Figuur 5. Stabiliteitsresultaten

4.2.4 PH-indicatormethode - Vriesstabiliteit

In het RT-LAMP pH-indicatorversterkingssysteem is de prestatie na 45 ℃ - 7 dagen opnieuw invriezen stabiel. De controlegroep is vloeibaar Bst-enzym. Vergeleken met de controlegroep is de detectiegraad van 14405ES na thermische versnelling 94% (30/32).

Experimentele omstandigheden:

Let op: De controlegroep is een vloeibare versie zonder glycerol-Bst-enzym van dezelfde concentratie.

Figuur 6. Resultaten van de hervriesstabiliteit

4.3 Specificiteit

In het RT-LAMP fluorescentiekleurstofversterkingssysteem bereikte de 48-wells NTC geen piek en bedroeg de specificiteit van 14405ES 100%.

Experimentele omstandigheden:

Let op: De controlegroep is een vloeibare versie zonder glycerol-Bst-enzym van dezelfde concentratie.

Figuur 7. Specifieke resultaten

5. Gerelateerde producten

De gerelateerde producten die Yeasen kunnen leveren, staan ​​weergegeven in Tabel 1.

Tabel 1.Gerelateerde producten

6. Over het lezen

De juiste sleutelenzymgrondstoffen kiezen om LAMP/RT-LAMP gevoeliger en sneller te maken!

De richtlijn voor reverse transcriptaseselectie

Yeasen UDG: De "anti-fouling expert" in PCR-reacties