De afgelopen jaren, met de snelle ontwikkeling van biofarmaceutica en de opkomst van cel- en gentherapieën en mRNA-vaccins tijdens de pandemie, is het waarborgen van de veiligheid en betrouwbaarheid van biologische producten een belangrijke focus en regelgevende prioriteit geworden voor overheden en regelgevende instanties wereldwijd. Mycoplasma is een veelvoorkomend, maar vaak moeilijk te elimineren type contaminatie. Voor bioprocessen waarbij celkweek betrokken is, vereisen de voorschriften dat 'er geen mycoplasma-contaminatie mag zijn.
Punten voor Mycoplasma-testen vereist door regelgevende instanties
2.1 Kruisreactiviteit:
DNA van 14 stammen van niet-flexibacteriële phyla en 6 gemanipuleerde cellen die veel worden gebruikt in de biomedische sector werden geselecteerd. Geen van de doelkanalen bereikte een piek en de interne referentie werd normaal versterkt.
| Tzijn Sdiertjes | |
| Staphylococcus epidermidis | Pseudohyfen |
| Clostridium perfringens | Salmonella enterica Enteritidis subsp. enterica |
| Clostridium acetobutylicum | Bacillus subtilis (bacillus subtilis) |
| Acinetobacter baumannii (immobiele bacteriën) | Bacillus cereus |
| Lactobacillus acidophilus | HEK293 |
| Enterobacter aerogenes (taxonomische klasse van bacteriën) | Vero |
| Micrococcus garciniae | CHO |
| streptokokken mutans | E. coli |
| Pseudomonas aeruginosa | HEK293T |
| Streptokokken pneumoniae | SF9 |
2.2 Enkele van de gegevens zijn als volgt:
- Detectie Iknabootsen
Nucleïnezuurextractie en detectie van 10CFU/mL Mycoplasma-standaardstammen werden uitgevoerd volgens de instructies van de standaardstammen en de extractie- en detectiekits.
De NCS- en NTC-monsters werden in elk experiment tegelijkertijd getest en de resultaten van 24 replicaatputjes met 10CFU/ml-monsters van elke stam voldeden aan de vereiste dat ≥23 van de 24 tests positief waren wanneer de NCS- en NTC-resultaten bevredigend waren.
Tabel 1 Informatie over gevalideerde stammen
| Serienummer. | Mycoplasma-naam | Concentratie van bacteriële vloeistof |
| 1 | Mycoplasma arginine | 10 KVE/ml |
| 2 | Mycoplasma orale | 10 KVE/ml |
| 3 | Mycoplasma gallisepticum | 10 KVE/ml |
| 4 | Mycoplasma pneumonie | 10 KVE/ml |
| 5 | Mycoplasma-synoviae | 10 KVE/ml |
| 6 | Mycoplasma fermentans | 10 KVE/ml |
| 7 | Mycoplasma hyorhinis | 10 KVE/ml |
| 8 | Acholeplasma laidlawii | 10 KVE/ml |
| 9 | Spiroplasma citroen | 10 KVE/ml |
| 10 | Mycoplasma speekselklieren | 10 KVE/ml |
Tabel 2 Resultaten van de detectielimiet
| 10 KVE/ml | Experiment 1 | Experiment 2 | Experiment 3 |
| Detectiepercentage | 8/8 | 8/8 | 8/8 |
| Totaal | 24/24 | ||
Productinformatie
| Product | Catalogusnummer | Productnaam | productspecificatie |
| Voorbeeld voorbehandelingskit | 18461ES | 25T/100T | |
| 18467ES | MolPure® Mag48 Monstervoorbereidingskit FN | 3×16T/ 6×16T | |
| Nucleair zuur extractie-instrument | 80511ES | 48-kanaals geautomatiseerde extractor voor nucleïnezuur | 48 Kanaal |
| Mycoplasma-detectiekit | 40619ES | 25T/100T |