Overzicht
Host cell residual DNA is een procesgerelateerde onzuiverheid die betrokken is bij de productie van biologische producten, die niet alleen de effectiviteit van biologische producten vermindert, maar ook veiligheidsrisico's kan opleveren, zoals besmettelijkheid of tumorigeniciteit. Daarom hebben regelgevende instanties in verschillende landen limieten opgelegd aan de hoeveelheid residueel DNA in biologische producten.
De huidige richtlijnen van de WHO en FDA bevelen aan dat rest-DNA in eindproducten niet meer dan 10 ng/dosis bedraagt, en de FDA stelt ook dat rest-DNA in gastheercel-DNA van biologische geneesmiddelen niet meer dan 100 pg/dosis mag bedragen. De algemene beginselen van de Europese Farmacopee bepalen dat de meeste rest-DNA-limieten van biologische producten niet meer dan 10 ng/dosis mogen bedragen, maar de rest-DNA-limieten van individuele vaccins zijn strenger, bijvoorbeeld dat het rest-DNA in het geïnactiveerde vaccin tegen hepatitis A niet meer dan 100 pg/dosis mag bedragen, en dat het rest-DNA in het vaccin tegen hepatitis B niet meer dan 10 pg/dosis mag bedragen. De editie 2020 van de Chinese Farmacopee, Deel III, bepaalt dat het DNA-residu in biologische preparaten die op een cellulaire matrix worden geproduceerd, niet meer dan 100 pg/dosis mag bedragen, en dat het DNA-residu in vaccins die op een bacteriële of schimmelmatrix worden geproduceerd, niet meer dan 10 ng/dosis mag bedragen.
Bovendien geven nationale farmacopees ook richtlijnen voor de methoden voor het bepalen van exogene DNA-residuen. De editie 2017 van USP40-NF35 Algemene bepaling 1130 van de Amerikaanse farmacopee beschrijft 3 methoden voor het bepalen van exogene DNA-residuen, namelijk DNA-probehybridisatie, drempelmethode en real-time kwantitatieve PCR-methode. De Europese farmacopee stelt real-time kwantitatieve PCR en immuno-enzymatische methoden voor, wat 2 gevoelige analytische methoden zijn voor het kwantificeren van rest-DNA in gastheercellen. De Chinese farmacopee 2020-versie van de drie algemene regels 3407 bepaalt ook dat de methoden voor het detecteren van DNA-residuen in gastheercellen DNA-probehybridisatie, fluorescentiekleuring en kwantitatieve PCR zijn.
De qPCR-methode heeft een zeer hoge gevoeligheid, sequentiespecificiteit en nauwkeurigheid, wat een betrouwbaar detectiemiddel kan zijn voor de biofarmaceutische industrie bij procesonderzoek en kwaliteitscontrole van eindproducten. Tegenwoordig is de qPCR-methode de voorkeursdetectiemethode geworden voor elke fabrikant van biologische producten.
Yeasen Biotechnologie Detectiekits voor resterend DNA
Gebaseerd op het principe van fluorescerende probe qPCR,
Functie
Hoge gevoeligheid: ontwikkeld op basis van de fluorescerende probe qPCR-methode met een LLOD van slechts 0.0,5 fg/µL;
Hoge nauwkeurigheid: monster-spiking-herstel in het bereik van 70%~130%;
Hoge specificiteit: geen kruisreactiviteit met irrelevant DNA, waardoor het aantal vals-positieve resultaten bij detectie wordt verminderd;
Naleving van regelgeving: volledig gevalideerd in overeenstemming met Chp, USP, ICHQ2(R1) en andere vereisten, prestaties in overeenstemming met Chinese en buitenlandse regelgevende normen;
Medewerking verlenen aan de audit: productproductie voldoet aan de ISO13485-kwaliteitssysteemnormen, met perfecte auditdocumenten.
Kwaliteit garanderen: De grondstoffen van de kits worden allemaal onafhankelijk ontwikkeld en de qPCR Mix en andere enzymproducten worden geproduceerd in een ultraschone enzymfabriek.
Sollicitatie
AntilichaamgeneesmiddelenDetectie van resterende onzuiverheden in gastheercellenVaccinsDetectie van resterende onzuiverheden in gastcellen
Detectie van restverontreinigingen in gastheercellen
Specificatie
| Test- en validatieprogramma | Referentienormen of -vereisten | Nopmerking | |
| 1. Kitstandaarden (referentiestandaarden) | Benchmarking naar nationale normen of voorbereide normen |
| |
| 2. Ikinear Rengel | Omvang van de standaardcurve | Raadpleeg de handleiding of de actuele situatie (bijv. 30fg/μL~300pg/μL) |
|
| R2 | ≥0,98 (Ps | Vereisten voor HCD in Chinese Farmacopee 2020 Editie 3407 Algemene bepalingen | |
| Helling | -3,1~-3,8 (Ps | Vereisten voor HCD in Chinese Farmacopee 2020 Editie 3407 Algemene bepalingen | |
| Versterkingsrendement | 90%~110%（（PsOvereenkomstige helling -3.1~-3.6, Vereisten binnen de industrie) |
| |
| 3. Anauwkeurigheid | Afwijking van nationale standaard DNA | ＜15% |
|
| Herstelsnelheid van monster-spiking | 50%~150% (vereisten binnen de industrie) 70~130%) | Vereisten voor HCD in Chinese Farmacopee 2020 Editie 3407 Algemene bepalingen | |
| 4. Precidieven | Herhaalbaar | CV＜15% |
|
| Tussenliggende precisie | CV＜15% |
| |
| 5. Sspecialiteit | Geen inmenging met exogeen DNA |
| |
| 6. Ikimitatie van kwantificering | fg/μL-niveau |
| |
| 7. Stafelbaarheid | Herhaaldelijk invriezen en ontdooien | 10 keer |
|
| Versnelling stabiliteit | 2~8℃ 30 dagen, 37℃ 14 dagen |
| |
| Geldigheidsduur | -20°C opslag gedurende 2 jaar |
| |
Cijfers
Hoge gevoeligheid: LLOQ zo laag als 0,3 fg/µL, LLOD zo laag als 0,05 fg/µL.
1. Het lineaire bereik van de CHO Host Cell Residual DNA Detection Kit (3G) was 3fg/μL~300pg/μL, R2=1, de amplificatie-efficiëntie was 99,29% en de CV van de detectiewaarde van elke concentratie was <15%.
Figuur 1. CHO DNA (3G) kalibratiegrafiek (links) en lineaire mapping van de amplificatiecurve (rechts)
2. Detecteer CHO DNA (3G) op het laagste concentratiepunt van het gestandaardiseerde lied bij 3fg/uL en lagere concentraties, 10 replicaties per concentratie. De resultaten toonden aan dat bij concentraties van 0,3 fg/uL en hoger, de CV <20% was, d.w.z. de kwantificeringslimiet van de CHO Host Cell DNA Residue Assay Kit (3G) was 0,3 fg/uL.
Figuur 3. Resultaten van de 0,05 fg/μL CHO DNA (3G) qPCR-test
Hoge specificiteit: geen kruisreactiviteit met DNA van andere gastheercellen.
Bij het beoordelen van de interferentie van genomisch DNA van muizensoorten met een hoge affiniteit voor CHO-DNA (3G) en genomisch DNA van cellen die gewoonlijk worden gebruikt bij de productie van biologische producten met het CHO-DNA-detectiereagens, overlappten de amplificatiecurven van de interferentiegroep en de controlegroep elkaar en werd er geen interferentie waargenomen (de volgende grafieken tonen, in volgorde, de interferentiegegevens van muis-, HEK293- en E. coli-genomisch DNA met het CHO-DNA-detectiereagens).
Figuur. 4.Resultaten van interferentie-experimenten met CHO DNA (3G) kit
Productinformatie
| Categorisatie | Artikelnr. | Productnaam | Specificatie |
| Monstervoorbehandeling | 18461ES | 25T/100T | |
| 18467ES | MolPure® Mag48 Monstervoorbereidingskit FN | 3×16T/6×16T | |
| Nucleïnezuur-extractie-instrument | 80511ES | 48-kanaals geautomatiseerde extractor voor nucleïnezuur | 48 Fluxen |
| Detectie van resterend DNA | 41307ES | 50T/100T | |
| 41308ES | 50T/100T | ||
| 41310ES | SV40LTA&E1A Residu DNA Detectiekit | 50T/100T | |
| 41317ES | Hansenula polymorpha Host Cell DNA Residu Detectie Kit | 50T/100T | |
| 41319ES | MDCK Host Cell DNA Residu Detectie Kit | 50T/100T | |
| 41323ES | Plasmide DNA-residudetectiekit | 50T/100T | |
| 41324ES | S. cerevisiae Host Cell DNA Residu Detectie Kit | 50T/100T | |
| 41325ES | Detectiekit voor DNA-residuen van menselijke gastheercellen | 50T/100T | |
| 41328ES | Pichia pastoris Host Cell DNA Residu Detectie Kit | 50T/100T | |
| 41330ES | Sf9 en Baculovirus DNA-residudetectiekit | 50T/100T | |
| 41331ES | 50T/100T | ||
| 41332ES | 50T/100T |