O que é um anticorpo secundário?
Um anticorpo secundário é um anticorpo que pode se ligar a um anticorpo primário. Ele é usado principalmente para detectar a presença do anticorpo primário. O anticorpo primário se liga especificamente ao antígeno, e o anticorpo secundário se liga especificamente ao anticorpo primário. Em outras palavras, a região Fc ou fragmento Fab do anticorpo primário pode atuar como um antígeno para estimular o corpo a produzir anticorpos. Ou seja, o anticorpo primário é principalmente imunoglobulinas da classe IgG, então o anticorpo secundário é um anticorpo anti-IgG.
O papel dos anticorpos secundários
O anticorpo primário se liga especificamente à proteína alvo, e o anticorpo primário precisa ser marcado com uma substância luminescente ou um grupo cromogênico. Não é possível ver a olho nu se o anticorpo primário vincular a proteína. No entanto, o anticorpo primário é relativamente específico, e cada um é rotulado a um alto custo. É comum usar um anticorpo secundário rotulado que pode se ligar ao anticorpo primário e tem um rótulo detectável (como um grupo fluorescente, radioativo, quimioluminescente ou cromogênico). Portanto, o design atual geralmente tem o anticorpo secundário com um rótulo detectável para detectar o anticorpo primário, enquanto o anticorpo primário reconhece o substrato. Dessa forma, quando o anticorpo primário se liga ao substrato, ele pode ser detectado por meio do anticorpo secundário.
Por exemplo, o princípio de luminescência ECL: No substrato ECL, existem H2O2 e luminol (e seus derivados), que emitem fluorescência sob a ação da HRP (peroxidase de rábano).
Pontos-chave para usar anticorpos secundários
O anticorpo secundário é um anticorpo produzido pela imunização de mamíferos (geralmente imunizando cabras, cavalos, burros, mulas e porquinhos-da-índia, etc.) com a imunoglobulina IgG de um certo subtipo da espécie do anticorpo primário (como coelhos, camundongos), então o anticorpo secundário se liga somente a uma espécie e subtipo específicos do anticorpo primário. Por exemplo, o anticorpo anti-camundongo de ovelha (anticorpo secundário) se ligará especificamente ao monoclonal de camundongo (anticorpo primário) e não se ligará ao policlonal de coelho ou monoclonal de rato.
Marcas de acoplamento de anticorpos secundários
Diferentes métodos experimentais resultarão em diferentes grupos de acoplamento para anticorpos secundários, que são principalmente enzimas (peroxidase de raiz-forte/HRP e fosfatase alcalina/AP), grupos fluorescentes (FITC, Rodamina, PE, Dylight, Alexa Fluor, cy3, etc.), biotina, partículas de ouro, etc. Geralmente, anticorpos secundários marcados com HRP são recomendados para experimentos como WB, ELISA, IHC, e anticorpos secundários marcados com biotina são recomendados para IHC, enquanto marcadores fluorescentes como Alexa Fluor 488, FITC, PE são usados para IF, FC, etc.
Como escolher o anticorpo secundário certo
a. Imunoblotting (WB)
Selecione um anticorpo secundário marcado com peroxidase de rábano ou fosfatase alcalina para Western blotting tradicional; escolha um anticorpo secundário marcado com o fluoróforo correspondente para Western blotting fluorescente.
b.Imuno-histoquímica (IHC/ICC)
B. Para ICC (Imunocitoquímica), selecione um anticorpo secundário marcado com Biotina.
C. Imunofluorescência (IHF/ICF)
A imunoprecipitação frequentemente permite a escolha de usar um anticorpo secundário que seja específico para Fc ou Fab. Tais anticorpos secundários podem evitar a interferência da cadeia pesada (peso molecular 55 kDa) ou da cadeia leve (peso molecular 25 kDa).
Informações do produto recomendado
| Grupo de rótulos | Número do produto | Nome do produto |
| Não marcado | 34850ES | IgG(H+L) de cabra anti-coelho |
| 34851ES | IgG(H+L) anti-rato de cabra | |
| 34847ES | Burro Anti-IgG Humano(H+L) | |
| PRH | 33101ES | Peroxidase AffiniPure IgG Anti-Coelho de Cabra (H+L) |
| 33201ES | Peroxidase AffiniPure IgG Anti-Camundongo de Cabra (H+L) | |
| 33301ES | Peroxidase AffiniPure IgG Anti-Rato de Cabra (H+L) | |
| 33401ES | Peroxidase AffiniPure IgG Anti-Cobaia (H+L) de Cabra | |
| 33501ES | Peroxidase de rábano cabra anti-IgG humana (H+L) | |
| 33701ES | Peroxidase AffiniPure Coelho Anti-IgG de Cabra (H+L) | |
| 33801ES | Peroxidase AffiniPure Coelho Anti-Ovelha IgG (H+L) | |
| 34201ES | Peroxidase AffiniPure Donkey Anti-IgG de coelho (H+L) | |
| 34101ES | Peroxidase AffiniPure Donkey Anti-Mouse IgG (H+L) | |
| 34301ES | Peroxidase AffiniPure Burro Anti-IgG de cabra (H+L) | |
| 33101ES | Peroxidase AffiniPure IgG Anti-Coelho de Cabra (H+L) | |
| Fluorescência verde | 33106ES | YSFluor™ 488 IgG Anti-Coelho de Cabra (H+L) |
| 33126ES | YSFluor™ 488 IgG anti-humano de cabra (H+L) | |
| 33206ES | YSFluor™488 IgG Anti-Camundongo de Cabra (H+L) | |
| 33306ES | YSFluor™ 488 Anti-IgG Bovino de Cabra (H+L) | |
| 33406ES | YSFluor™ 488 IgG anti-cobaia de cabra (H+L) | |
| 33706ES | YSFluor™488 IgG de coelho anti-cabra (H+L) | |
| 33906ES | YSFluor™ 488 IgG anti-camundongo de coelho (H+L) | |
| 34906ES | YSFluor™488 IgG Anti-Ovino de Burro (H+L) | |
| 34106ES | YSFluor™488 Burro Anti-IgG de Camundongo (H+L) | |
| 34206ES | YSFluor™488 IgG anti-coelho de burro (H+L) | |
| 34306ES | YSFluor™ 488 IgG Anti-Cabra de Burro (H+L) | |
| 34406ES | YSFluor™ 488 Burro Anti-Rato IgG (H+L) | |
| 34506ES | YSFluor™488 Burro IgG anti-cobaia (H+L) | |
| 34606ES | YSFluor™488 Burro Anti-IgG de galinha (H+L) | |
| 34706ES | YSFluor™488 IgY anti-frango de coelho (H+L) | |
| 34806ES | YSFluor™488 Burro Anti-IgG Humano (H+L) | |
| 34856ES | FITC AffiniPure cabra anti-humano IgG(H+L) | |
| 33107ES | FITC-AffiniPure IgG Anti-Coelho de Cabra (H+L) | |
| 33207ES | FITC-AffiniPure IgG Anti-Camundongo de Cabra (H+L) | |
| 33307ES | FITC-AffiniPure IgG Anti-Rato de Cabra (H+L) | |
| 33707ES | FITC-AffiniPure Coelho Anti-IgG de Cabra (H+L) | |
| 33807ES | FITC-AffiniPure Coelho Anti-Ovelha IgG (H+L) | |
| Rodamina | 33109ES | Rodamina (TRITC) IgG anti-coelho de cabra (H+L) |
| 33209ES | Rodamina (TRITC) IgG anti-camundongo de cabra (H+L) | |
| 33709ES | Rodamina (TRITC) AffiniPure Coelho Anti-IgG de cabra (H+L) | |
| 33210ES | Vermelho de Rodamina-X (RRX) IgG Anti-Camundongo de Cabra (H+L) | |
| Fluorescência Laranja | 33112ES | YSFluor™594 AffiniPure IgG Anti-Coelho de Cabra (H+L) |
| 33212ES | YSFluor™ 594 IgG Anti-Camundongo de Cabra (H+L) | |
| 33222ES | YSFluor™ 594 IgG Anti-Humano de Cabra (H+L) | |
| 33412ES | YSFluor™594 IgG anti-cobaia de cabra (H+L) | |
| 33312ES | YSFluor™ 594 Anti-IgG Bovino de Cabra (H+L) | |
| 33712ES | YSFluor™594 IgG de coelho anti-cabra (H+L) | |
| 33812ES | YSFluor™ 594 IgG anti-ovelha de coelho (H+L) | |
| 33912ES | YSFluor™594 IgG de coelho anti-camundongo (H+L) | |
| 34712ES | YSFluor™594 IgY anti-frango de coelho (H+L) | |
| 34112ES | YSFluor™ 594 Burro Anti-IgG de Camundongo (H+L) | |
| 34212ES | YSFluor™594 IgG anti-coelho de burro (H+L) | |
| 34312ES | YSFluor™ 594 IgG Anti-Cabra de Burro (H+L) | |
| 34412ES | YSFluor™ 594 Burro Anti-Rato IgG (H+L) | |
| 34512ES | YSFluor™594 Burro IgG anti-cobaia (H+L) | |
| 34612ES | YSFluor™594 Burro Anti-IgG de galinha (H+L) | |
| 34812ES | YSFluor™594 Burro Anti-IgG Humano (H+L) | |
| 34912ES | YSFluor™594 IgG Anti-Ovino de Burro (H+L) | |
| 33208ES | Cy3-AffiniPure cabra anti-rato IgG (H+L) | |
| 33308ES | Cy3-AffiniPure IgG Anti-Rato de Cabra (H+L) | |
| 33708ES | Cy3-AffiniPure Coelho Anti-IgG de Cabra (H+L) | |
| 33808ES | Cy3-AffiniPure Coelho Anti-Ovelha IgG (H+L) | |
| 34855ES | Cy3-AffiniPure Burro Anti-IgG de cabra (H+L) | |
| Fluorescência vermelha | 33113ES | YSFluor™647 IgG de cabra anti-coelho (H+L) |
| 33213ES | YSFluor™ 647 IgG Anti-Camundongo de Cabra (H+L) | |
| 33223ES | YSFluor™647 IgG anti-humano de cabra (H+L) | |
| 33313ES | YSFluor™ 647 Anti-IgG Bovino de Cabra (H+L) | |
| 33413ES | YSFluor™ 647 IgG anti-cobaia de cabra (H+L) | |
| 33713ES | YSFluor™ 647 IgG de coelho anti-cabra (H+L) | |
| 33813ES | YSFluor™647 IgG anti-ovelha de coelho (H+L) | |
| 33913ES | YSFluor™ 647 IgG de coelho anti-camundongo (H+L) | |
| 34713ES | YSFluor™647 IgY anti-frango de coelho (H+L) | |
| 34113ES | YSFluor™ 647 Burro Anti-IgG de Camundongo (H+L) | |
| 34213ES | YSFluor™ 647 Burro Anti-IgG de coelho (H+L) | |
| 34413ES | YSFluor™ 647 Burro Anti-IgG de Rato (H+L) | |
| 34813ES | YSFluor™647 Burro Anti-IgG Humano (H+L) | |
| 34913ES | YSFluor™647 IgG anti-ovelha de burro (H+L) |
Referências
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