Introdução
Os kits de ensaio de gene repórter de luciferase, como uma ferramenta essencial indispensável no desenvolvimento de medicamentos, desempenham um papel crucial em processos-chave, como triagem de alto rendimento, avaliação de eficácia e validação de alvos, devido à sua capacidade de monitorar a expressão genética e a transdução de sinal em tempo real. A aplicação desta tecnologia melhorou significativamente a eficiência da triagem e avaliação de medicamentos, acelerando a descoberta e o desenvolvimento de novos medicamentos.
Princípio de detecção do gene repórter da luciferase
A tecnologia de detecção do gene repórter da luciferase permite a análise quantitativa da atividade da luciferase do vaga-lume catalisando a oxidação da luciferina em oxiluciferina e gerando bioluminescência. Essa tecnologia tem valor de aplicação significativo nos campos de validação do gene alvo de miRNA e regulação da atividade transcricional do promotor. Ao inserir elementos reguladores do gene alvo a montante e a jusante do gene da luciferase para construir um plasmídeo repórter da luciferase, as células podem ser transfetadas e submetidas à estimulação ou tratamento correspondente. Posteriormente, ao lisar células e medir a atividade da luciferase, as mudanças de atividade dos elementos reguladores sob diferentes condições de estimulação podem ser avaliadas, obtendo assim uma compreensão mais profunda dos mecanismos reguladores do gene expressão.
As diferenças entre aplicações de detecção de luciferase simples e dupla
Os ensaios de gene repórter são divididos principalmente em ensaios de gene repórter de luciferase simples e ensaios de gene repórter de luciferase dupla. Em aplicações específicas, como você pode determinar se o experimento usa um sistema de detecção de luciferase simples ou dupla? Vamos dar uma olhada nas diferenças.
Sistema de ensaio de repórter de luciferase única
Número de genes repórteres: Um único gene repórter da luciferase do vaga-lume;
Tipo de transfecção: Um plasmídeo de gene repórter único, após a transfecção, a seleção do fármaco é usada para construir uma linha celular de gene repórter estável expressando luciferase;
Processo de detecção: Somente o sinal da luciferase do vaga-lume precisa ser detectado, operação simples, período de detecção curto, adequado para triagem de medicamentos de alto rendimento;
Análise de cenário de aplicação: Geralmente é por meio da construção de uma linhagem celular monoclonal estável superexpressora, pois o nível de expressão dessas linhagens celulares é relativamente estável e uniforme, sem a influência de variações experimentais devido à eficiência de transfecção e viabilidade celular. A operação é simples e, como apenas o sinal da luciferase do vaga-lume é detectado, a análise de dados é mais conveniente. Juntamente com as vantagens do tempo de detecção curto, é particularmente adequado para triagem de medicamentos de alto rendimento e atende às necessidades de detecção de amostras em larga escala.
Sistema de detecção de gene repórter de luciferase dupla
Quantidade de genes relatada: Genes repórteres duplos da luciferase do vaga-lume e da luciferase da Renilla;
Tipo de transfecção: Co-transfecção de dois plasmídeos de genes repórteres, principalmente por meio de transfecção transitória;
Processo de detecção: É necessário primeiro detectar o sinal do vaga-lume e depois o sinal do Renilla, e a razão dos dois (Vaga-lume/Renilla) é usada para o cálculo final dos dados;
Análise de cenário de aplicação: Geralmente é por meio de transfecção transitória, com a cotransfecção de um plasmídeo contendo o gene da luciferase Renilla como referência interna, fornecendo um benchmark para o experimento, reduzindo assim a interferência de fatores externos, como viabilidade celular e eficiência de transfecção. Por meio do cálculo de razão, é possível corrigir variações no número de células, eficiência de transfecção e atividade celular, melhorando a precisão dos resultados experimentais. É uma ferramenta importante nos campos de regulação da expressão gênica, vias de transdução de sinal e triagem de drogas.
série de produtos
| nome do produto | Bio-Um Passo | Passo firme e único | Passo Brilhante-Um |
| Código do produto | |||
| Cenários de aplicação e Características | Este kit atinge um equilíbrio relativo entre intensidade de sinal e estabilidade. Ele mantém uma intensidade de sinal relativamente alta, ao mesmo tempo em que mantém a intensidade do sinal relativamente estável durante um certo período de tempo. | A meia-vida pode durar mais de 5 horas. Especialmente nas primeiras 2 horas, as mudanças no valor de luminescência são mínimas. É adequado para ensaios de ultra-alto rendimento ou de placas de 384 poços. | Alta sensibilidade e alta intensidade de sinal. Adequado para experimentos que exigem alta sensibilidade. |
| Meia-vida do sinal | 60 minutos | 5 horas | 30 minutos |
| Características operacionais | Um passo | Um passo | Um passo |
Vantagens do produto
Meia-vida longa do sinal: A meia-vida do sinal pode chegar a até 5 horas, atendendo às necessidades de experimentos de alto rendimento e evitando diferenças de sinal causadas pela diferença de tempo entre o primeiro e o último poço devido a um grande número de amostras, garantindo resultados mais estáveis e confiáveis.
Sinal de fluorescência forte: O valor do sinal pode atingir 8 ordens de magnitude, fornecendo uma grande janela de detecção e forte suporte de dados para triagem precoce de medicamentos e avaliação de eficácia.
Fácil operação: A operação de uma etapa evita procedimentos experimentais complicados. Simplesmente adicione o reagente de detecção e espere 5 minutos antes de iniciar a máquina para detecção.
Múltiplas escolhas: De acordo com diferentes cenários de aplicação, há 3 produtos diferentes disponíveis, que podem ser selecionados com base nos requisitos experimentais de valor e estabilidade do sinal.
Dados do produto
01 Comparação de desempenho para
A verificação de três tipos de kits de ensaio foi conduzido em linhas celulares que expressam de forma estável a luciferase do vaga-lume, e os resultados mostraram que o produto Bright-One Step tem valores de sinal mais altos; o produto Steady-One Step tem uma meia-vida de sinal mais longa e sinais mais estáveis; o produto Bio-One Step não só tem altos valores de sinal, mas também mantém uma meia-vida de sinal mais longa.
Figura 1. Comparação de desempenho para diferentes kits de ensaio de gene repórter
02 Comparação do reagente de detecção do gene repórter
Ao usar
Figura 2. Comparação do reagente de detecção do gene repórter
03 Teste de estabilidade de congelamento e descongelamento do reagente de detecção de gene repórter de luciferase
O reagente de detecção do gene repórter de luciferase
Figura 3.Teste de congelamento e descongelamento repetido do reagente de detecção do gene repórter da luciferase
Procedimento operacional
01 Transfecção Celular
Adicione o reagente diretamente à suspensão de células, depois pipete para cima e para baixo 5 vezes para garantir uma mistura completa e aguarde 5 minutos para permitir a lise celular completa.
02 Carregamento de amostra
Pipete 100 μL da mistura (reagente de detecção + meio de cultura celular) em cada poço da placa de detecção.
03 Detecção de Fluorescência
Defina os parâmetros no leitor de placas. Coloque a placa de detecção no leitor de placas, vibre-a por alguns segundos e então prossiga com a detecção.
Lista de produtos
| Categoria do produto
| Nome do produto | Código do produto | Especificações do produto |
| Kit de ensaio do gene repórter da luciferase | 11411ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | |
| 11413ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | ||
| 11412ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | ||
| Kit de ensaio de gene repórter de luciferase dupla
| 11402ES60/80 | 100T/1000T | |
| 11405ES60/80 | 100T/1000T |