1 O Mecanismo de Ação da Blasticidina S
Blasticidina S é um antibiótico nucleosídeo extraído de Streptomyces griseochromogenes, que inibe especificamente a síntese de proteínas em células procarióticas e eucarióticas ao interferir na formação de ligações peptídicas no ribossomo. Seu mecanismo de ação inclui o bloqueio da hidrólise do peptidil-tRNA induzida por fatores de liberação e o aumento da ligação do tRNA à grande subunidade ribossômica, inibindo assim a formação de ligações peptídicas até certo ponto.
Blasticidina S tem um modo de ação rápido e potente, e concentrações muito baixas de antibióticos podem levar à morte celular rápida. Ela não só tem uma inibição significativa da síntese de proteínas em bactérias e eucariotos, mas também atividade contra fungos, nematoides e células tumorais. A pltocidina S é frequentemente usada para rastrear células transfectadas que carregam genes bsr ou BSD.
2 Aplicação de Blasticidina S
2.1 Cultura e triagem de células
- Células de mamíferos: blast S é frequentemente usado para rastrear células transfectadas carregando genes bsr ou BSD. Esses genes de resistência, respectivamente de B. cereus e Aspergillus, foram capazes de converter murancidina em derivados avirulentos, permitindo assim a morte seletiva de células sem carregar genes de resistência, com concentrações de trabalho de Blasticidina S em células de mamíferos variando de 1 a 50 μg/mL.
| Cele | Genus | Oorganização | Cmeio cultural | A concentração de Blasticidina S (μg/mL) |
| Ele La | Humano | Útero | DMEM | 3-10 |
| HEK293 | Humano | Rim | DMEM | 3-10 |
| B16 | Rato | Melanoma | RPMI | 3-10 |
| PC1.0 | Hamster | Adenocarcinoma | RPMI | 10-30 |
| CHO | Hamster | Ovário | DMEM | 5-15 |
- Seleção bacteriana: Na cultura bacteriana, a concentração recomendada de 25-100 µg/mL pode causar rapidamente a morte de células sem genes de resistência.
E. coli é ligeiramente menos sensível à Blasticidina S, mas os transformantes são tolerantes à Blasticidina S e podem ser rastreados com meio LB com baixo teor de sal (pH 8) em uma faixa de concentração de 50-100 μg/mL de Blasticidina S, e o pH alto melhora a atividade da Blasticidina S.
- Células vegetais: também aplicáveis a experimentos de transferência de genes em células vegetais, BSR e BSD são comumente usados como marcadores de triagem.
2.2 Pesquisa sobre Síntese de Proteínas
- Blasticidina foi usada para estudar o processo de síntese de proteínas no nível de formação de ligações peptídicas, especialmente em células HEK293-T e células HEK-D5 de construções TLR-2.
2.3 Propriedades antifúngicas
- Ele também tem uma certa atividade antifúngica, que pode ser usada para a prevenção e tratamento da brusone do arroz. Seu efeito bactericida é principalmente afetar a síntese de proteínas, e pode inibir a germinação de esporos, o desenvolvimento de hifas e a formação de esporos.
2.4 Outras aplicações
- Blasticidina também tem sido usada para estudar o efeito inibitório de células tumorais.
- Ele também atua como um agente de seleção para células transformadas contendo o gene de resistência bls, bsr ou BSD.
3 Procedimentos Experimentais Relacionados à Blasticidina S (Triagem de Transfectantes Estáveis em Mamíferos)
1) Blasticidina S é normalmente usada em uma concentração de 10 μg/mL. As células são transfetadas com plasmídeos carregando o gene bsr ou BSD e incubadas em meio de crescimento normal contendo Blasticidina S para selecionar transfetantes estáveis.
2) Após 48 horas da transfecção, passe as células em meio fresco contendo uma concentração apropriada de Blasticidina S (Nota: Os antibióticos funcionam melhor quando as células estão em uma fase de divisão ativa. A eficiência dos antibióticos diminui se a densidade celular for muito alta. Ao dividir as células, a confluência não deve exceder 25%).
3) A cada 3-4 dias, remova o meio usado e adicione meio novo contendo o antibiótico.
4) Após 7 dias, verifique a formação de colônias de células. Dependendo do tipo de célula hospedeira e da eficiência de transfecção/seleção, a formação de colônias pode exigir uma semana adicional ou mais.
5) Transfira 5-10 clones resistentes para placas de cultura de células de 35 mm e mantenha em meio seletivo por 7 dias. Subsequentemente, realize ensaios de citotoxicidade para teste.
4 Recomendação de produto
Biotecnologia da
| Nome do produto | Gato# | Especificação | Aparência |
| Blasticidina S CAS：3513-03-9 | 60218ES10 | 10 mg | Solução (10 mg/mL) em HEPES Tampão, pH 7,5) |
| 60218ES50 | 5×10 mg | ||
| 60218ES60 | 10×10 mg | ||
| 60218ES80 | 1 g | Pó（Prepare uma solução estoque de 5-10 mg/mL com água estéril ou tampão ao usar） |
5 Artigos publicados com nossos reagentes
[1] Mo J, Tan K, Dong Y, Lu W, Liu F, Mei Y, Huang H, Zhao K, Lv Z, Ye Y, Tang Y. Terapêutico visando o driver oncogênico EWSR1::FLI1 no sarcoma de Ewing por meio da inibição do complexo FACT. Oncogene. 2023 Jan;42(1):11-25. doi: 10.1038/s41388-022-02533-1. Epub 2022 Nov 10. PMID: 36357572. (SE:8.0)
[2] Tan K, Mo J, Li M, Dong Y, Han Y, Sun X, Ma Y, Zhu K, Wu W, Lu L, Liu J, Zhao K, Zhang L, Tang Y, Lv Z. O loop de feedback positivo SMAD9-MYCN representa uma dependência única para o neuroblastoma amplificado por MYCN. J Exp Clin Cancer Res. 2022 Dez 20;41(1):352. doi: 10.1186/s13046-022-02563-3. PMID: 36539767; PMCID: PMC9764568.(SE:11.3)
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