Introdução ao produto
A colagenase é uma classe de endonucleases que pode reconhecer especificamente a sequência Pro-X-Gly-Pro (que ocorre frequentemente no colágeno e raramente é encontrada em outras proteínas) e clivar a ligação peptídica entre o aminoácido neutro (X) e a glicina (Gly) nessa sequência, e pode hidrolisar o colágeno no tecido conjuntivo.
Muitas proteases são capazes de hidrolisar peptídeos de colágeno de fita simples e desnaturados, mas a colagenase é a única protease que pode degradar fibras de colágeno naturais com uma estrutura superenrolada de três fitas, e é amplamente encontrada em tecidos conjuntivos, a mais potente das quais é a colagenase "bruta" secretada pela bactéria anaeróbica Clostridium histolyticum.
A colagenase de levedura é derivada de Clostridium histolyticum, que é um extrato enzimático "grosso", que não só contém colagenase que pode degradar o colágeno natural e as fibras reticulares, mas também contém algumas outras proteases, como polissacaridases, lipases, etc., que podem efetivamente hidrolisar outras proteínas, polissacarídeos e lipídios na matriz extracelular do tecido conjuntivo e tecido epitelial, por isso é mais adequada para a digestão do tecido.
Atualmente, a colagenase bacteriana no mercado é dividida principalmente em cinco tipos, de acordo com a diferença na atividade da colagenase: colagenase tipo I, tipo II, tipo III, tipo IV e tipo V.
Escolha da colagenase
| Nome do produto | Aparência | Atividade enzimática | Âmbito de aplicação |
| Tipo I Colagenase） | Pó cristalino marrom ou bege | ≥250 U/mg sólido | Contém atividade (colagenase, caseinase, clostrídios e tripsina) para isolamento de células de tecido epitelial, pulmonar, adiposo e adrenal. |
| Tipo II Colagenase） | Pó cristalino marrom ou bege | ≥125 U/mg sólido | Contém mais atividade de clostridase e é adequado para o isolamento de células do tecido do fígado, osso, tireoide, coração e glândula salivar |
| Tipo III Colagenase） | Pó cristalino marrom ou bege | ≥100 U/mg sólido | Contém baixa atividade proteolítica, que é eficaz para a parte de junção do tecido digestivo e é frequentemente usado para a dissociação de células de tecidos de mamíferos |
| Tipo IV Colagenase） | Pó cristalino marrom ou bege | ≥125 CDU/mg sólido* | Contém baixa atividade de tripsina e é comumente usado na preparação de células para integridade de ilhotas e receptores |
| Tipo V Colagenase） | Pó cristalino marrom ou bege | ≥125 CDU/mg sólido* | Contém pelo menos 7 componentes de protease, que podem ser usados para o isolamento do tecido das ilhotas pancreáticas e a separação do tecido conjuntivo em células únicas |
*CDU = unidades de digestão de colágeno
Características do produto
- Alta eficiência de digestão: o extrato enzimático bruto de Clostridium histolyticum tem alta eficiência de digestão para tecidos.
- Dependente de ativadores: a colagenase precisa depender da atividade de enzimas ativadoras, como cátions divalentes como o Ca2+e Zn2+.
- Afetados por inibidores: os inibidores da colagenase incluem EDTA, EGTA, etc.; o segundo são os íons de metais pesados (Hg2+, Pb2+, Cd2+); Existem também alguns agentes químicos, como cisteína, histidina, DTT, 2-mercaptoetanol, o-fenantrolina, etc., que também têm efeitos inibitórios sobre a colagenase.
- Forte resistência à interferência: o colágeno não será afetado pelo soro usado para cultivar células.
Precauções de uso
- Uso: Dissolva em soluções salinas balanceadas de Hank, Earle ou outras, a concentração de trabalho recomendada é de 0,05% ~0,5% (p/v)
- Temperatura de armazenamento: 2-8°C
- Sugestões de uso:
(1) Para o estudo da estrutura e biossíntese do colágeno, preparações de colagenase de maior pureza são frequentemente utilizadas, e nenhuma outra atividade proteolítica é usada.
(2) Para dissociação de tecidos, preparações brutas de colagenase, como elastase, tripsina ou papaína, são frequentemente utilizadas.
Perguntas frequentes
- Má digestão durante o experimento
(1) Se for causado por atividade enzimática fraca ou íons de cálcio insuficientes, a colagenase deve ser armazenada em baixa temperatura e condições secas, e a solução de colagenase deve ser congelada após a aliquotagem.
(2) Se for causada por íons de cálcio insuficientes, a concentração de íons de cálcio na solução de colagenase deve ser de 5 mM
- A morte celular ocorre durante o uso
(1) Se houver excesso de protease, o tempo de contato com a protease deve ser reduzido ou deve-se adicionar albumina ou soro inativado
(2) Se o pH mudar, um tampão (por exemplo, HBSS) deve ser usado; Verifique e reajuste seu pH com frequência
(3) Se houver pouco oxigênio, a solução digestiva deve ser ventilada com ar estéril
- As células foram danificadas durante o experimento
Se for causado por excesso de protease, a quantidade de protease deve ser reduzida ou deve-se adicionar albumina ou soro inativado.
Encomenda
| Número de catálogo | Nome do produto | Tamanho |
| 40507ES60 | Colagenase I | 100 mg，1 g |
| 40508ES60 | Colagenase II | 100 mg，1 g |
| 40509ES60 | Colagenase III | 100 mg |
| 40510ES60 | Colagenase IV | 100 mg，1 g |
| 40511ES60 | Colagenase V | 100 mg |
Recomendações de produtos relacionados
| Número de catálogo | Nome do produto | Tamanho |
| 40123ES60 | PerfCel™l Tripsina-EDTA (0,25%), Vermelho de fenol | 100 mL |
| 40124ES60 | PerfCell™ Tripsina sem EDTA (0.25%), sem vermelho de fenol | 100 mL |
| 40126ES60 | PerfCell™ Tripsina (0,25%), vermelho de fenol | 100 mL |
| 40127ES60 | PerfCell™ Tripsina-EDTA (0,25%), Vermelho de fenol | 100 mL |
| 40101ES25 | Tripsina 1:250 (pó) | 25 g |
| 40512ES10/60 | PerfCell™ Tripsina recombinante (pó) | 10 mg/100 mg |
| 20416ES60 | Tripsina recombinante (MS-SAFE) | 100 µg |
| 40134ES60 | PerfCell Tryzyme™Express | 100 mL |
| 40135ES60 | PerfCell Tryzyme™Express | 100 mL |
| 40506ES60 | PRECISÃO | 100 mL |
| 40104ES60/80 | Dispase II | 100 mg/1 g |