Contexto – O que é ROS
Espécies reativas de oxigênio (ERO) são um produto normal do metabolismo celular - uma molécula bioativa que contém oxigênio, incluindo peróxido, superóxido, radical hidroxila, oxigênio singlete e α-oxigênio, etc., que desempenham um papel regulador importante nas vias de sinalização celular e transcrição, como apoptose, autofagia, envelhecimento, câncer, etc.
Efeito da concentração de ROS nas células – por que detectar ROS?
Em baixos níveis de espécies reativas de oxigênio, ROS está envolvido na sinalização e regulação intracelular como "mensageiros redox". No entanto, sob estresses ambientais (por exemplo, radiação ionizante, exposição ao calor, raios ultravioleta, hipóxia, etc.), os níveis de ROS aumentam drasticamente, o que pode causar danos ao DNA, inibir a expressão genética, levar ao dobramento incorreto de proteínas e até mesmo afetar a síntese de proteínas, causando danos graves às estruturas celulares, o que é conhecido como estresse oxidativo.
Quando os níveis de ROS excedem a capacidade das defesas antioxidantes endógenas, o equilíbrio redox é interrompido, levando a alterações estruturais ou conformacionais no DNA, lipídios, proteínas e, finalmente, à morte celular.
O nível de ROS é um sinal importante de dano celular causado por funções fisiológicas normais e fatores ambientais, e a detecção do nível de ROS intracelular é de grande importância para a compreensão das vias de sinalização e mecanismos potenciais de ação de alguns fármacos. Portanto, a seleção de sondas apropriadas para a detecção de ROS desempenha um papel importante na pesquisa do mecanismo da doença e na triagem de fármacos.
Como funciona a detecção de ROS?
O Kit de ensaio de espécies reativas de oxigênio (CAT# 50101ES01) é o método mais comumente usado para quantificar os níveis de espécies reativas de oxigênio intracelulares com base em mudanças na intensidade de fluorescência do corante fluorescente DCFH-DA (diacetato de 2,7-diclorodi-hidrofluoresceína).
O DCFH-DA em si não tem fluorescência e pode passar livremente pela membrana celular e, após entrar na célula, pode ser hidrolisado por esterases intracelulares para produzir DCFH. No entanto, o DCFH não consegue penetrar na membrana celular, facilitando a marcação e agregação da sonda dentro da célula. As espécies reativas de oxigênio intracelulares são capazes de oxidar o DCFH não fluorescente para formar DCF fluorescente. A intensidade da fluorescência verde do DCF é diretamente proporcional ao nível de espécies reativas de oxigênio intracelulares, e o nível de espécies reativas de oxigênio intracelulares pode ser conhecido pela detecção da fluorescência do DCF.
Sob as condições de comprimento de onda de excitação de 488 nm e comprimento de onda de emissão de 525 nm, a fluorescência do DCF foi detectada por microscópio de fluorescência, microscópio confocal a laser, espectrofotômetro de fluorescência, leitor de microplacas de fluorescência, citômetro de fluxo, etc., para determinar o nível de espécies reativas de oxigênio intracelular.
Literatura publicada por clientes que utilizam este produto (alguns exemplos)
Em setembro de 2022, um total de 164 artigos foram publicados no kit de detecção de espécies reativas de oxigênio ROS (50101ES01), com um fator de impacto total de 913,72.
Efeito da produção de ROS na polarização de macrófagos e na morte de células tumorais （PMID: 35665496; PMID: 35301299; PMCID: PMC8931093PMCID: PMC9353410.
Perguntas frequentes
Q1: Quais amostras são adequadas para testes de ROS?
A1: É geralmente usado para a detecção de células de mamíferos e é adequado apenas para a detecção de espécies reativas de oxigênio em células vivas ou in vivo.
P2: O kit de teste ROS é adequado para detecção em soro ou plasma?
A2: Não é adequado para a detecção de ROS em soro ou homogeneizado de tecido. Suspensões de células únicas preparadas com tecido fresco podem ser tentadas.
Q3: Plantas ou bactérias podem ser detectadas?
A3: É adequado apenas para a detecção de espécies reativas de oxigênio em células vivas ou in vivo, porque a meia-vida dos radicais hidroxila e radicais superóxido de oxigênio é muito curta, e é adequado apenas para a detecção de células vivas. Plantas ou bactérias, que podem ser usadas para detecção após a preparação de protoplastos, este kit não pode detectar ROS in vivo.
P4: Como posso evitar o fundo de fluorescência excessivo?
A4: Após a incubação da sonda, certifique-se de lavar quaisquer sondas restantes que não tenham entrado na célula.
P5: Posso detectar a quantidade de ROS em células normais?
A5: O conteúdo de espécies reativas de oxigênio em células normais é muito baixo, e o efeito de detecção pode não ser muito bom.
P6: Os valores de fluorescência negativa e positiva são os mesmos. O que está acontecendo?
A6: Pode ser causado pela concentração da sonda adicionada ser muito grande. Recomenda-se reduzir a concentração da sonda em 5-7,5 μM e o tempo de incubação: 15-20 min.
P7: A fluorescência do controle positivo é fraca, o que está acontecendo?
A7: O controle positivo Rosup foi geralmente concentrado a 100 μM, e um aumento significativo em espécies reativas de oxigênio foi observado 30 min-4 h após a estimulação. O efeito do controle positivo de espécies reativas de oxigênio pode variar muito entre células diferentes. Se o aumento em ROS não for observado dentro de 30 minutos após a estimulação, o tempo de indução pode ser estendido ou a concentração de Rosup pode ser aumentada apropriadamente.
A8: A mesma sonda, não dividida, as primeiras 5 vezes o efeito é muito bom, desta vez não é tingida, qual o problema?
Q8: 1. O estado da célula não é bom, resultando em baixa eficiência de coloração; 2. O tempo de indução do fármaco positivo é muito curto, e o nível de espécies reativas de oxigênio pode ser significativamente aumentado pela incubação a 37°C no escuro por 30 min-4 h; 3. A sonda foi congelada e descongelada mais de 4 vezes, a eficiência de coloração é reduzida, e o sinal de fluorescência é instável (às vezes forte, às vezes fraco e fácil de extinguir). Recomenda-se que as sondas sejam aliquotadas e armazenadas em um freezer de -20°C protegido da luz para evitar ciclos repetidos de congelamento e descongelamento.
P9: Quais instrumentos podem ser usados para testes?
A9: Microscópio de fluorescência, microscópio confocal a laser, espectrofotômetro de fluorescência, leitor de microplacas de fluorescência, citômetro de fluxo, etc. podem detectar valores de fluorescência.
Publicações de pesquisa científica publicadas por clientes que usam este produto (parcial)
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[2] Zhang M, et al. Conscrição de células imunes por exossomo derivado de NK silenciador ativável por luz (LASNEO) para erradicação sinérgica de tumores. Adv Sci (Weinh). 2022 agosto;9(22): e2201135. doi: 10.1002/advs.202201135. Epub 2022 jun 4. SE: 16.806
[3] Zhang D, et al. Microcarreadores orais baseados em microalgas para homeostase da microbiota intestinal e proteção intestinal no câncer radioterapia. Nat Commun. 2022 Mar 17;13(1):1413. doi: 10.1038/s41467-022-28744-4. PMID: 35301299. SE: 14.919
[4] Jiao D, et al.BMSCs estimuladas por óxido de grafeno reduzido biocompatível induzem aceleração da remodelação óssea e do movimento ortodôntico dos dentes por meio da promoção da osteoclastogênese e angiogênese. Bioact Mater. 2022 6 de fev.; 15:409-425. doi: 10.1016/j.bioactmat.2022.01.021. PMID: 35386350; PMCID: PMC8958387. SE: 14.593
[5] Guo G, et al. Terapia quimiodinâmica seletiva de espaço de nanocubos de CuFe5O8 para infecções relacionadas a implantes. ACS Nano. 27 de outubro de 2020;14(10):13391-13405. doi: 10.1021/acsnano.0c05255. Epub 22 de setembro de 2020. PMID: 32931252. SE: 14.588
[6] Yang C, et al. Terapia fotodinâmica e fototérmica mediada por nanorods de TiO2 decorados com fósforo vermelho para carcinoma de células renais. Pequeno. 2021 julho;17(30): e2101837. doi: 10.1002/smll.202101837. Epub 2021 junho 19. PMID: 34145768. SE：13.281
[7] Xiaolu Chen, et al. Nanopartículas de entrega de amplificação em cascata encapsuladas em redes metal-fenólicas superando a resistência a medicamentos contra o câncer por meio de terapia combinada de fome/quimiodinâmica/quimioterapia. Chemical Engineering Journal. Agosto de 2022; 442:136221. SE: 13.273
[8] Hao Ding, et al. Células-tronco mesenquimais encapsuladas em um hidrogel injetável de eliminação de espécies reativas de oxigênio e geração de O2 para tratamento de infarto do miocárdio. Chemical Engineering Journal. 2022.133511:1385-8947. SE: 13.273
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[15] Zhu C, et al. Hidrogel termossensível multifuncional para modular o microambiente na osteoartrite por meio da polarização de macrófagos e eliminação de RONS. J Nanobiotechnology. 2022 7 de maio;20(1):221. SE: 10.435
[16] Pan X, et al. Nanoesfera de óxido de zinco para eliminação de sulfeto de hidrogênio e ferroptose do câncer colorretal. J Nanobiotechnology. 2021 Nov 27;19(1):392. doi: 10.1186/s12951-021-01069-y. PMID: 34838036; PMCID: PMC8626909. SE: 10.435
[17] He J, et al. Nanoconchas de ouro e prata promovem a cicatrização de feridas causadas por infecções bacterianas resistentes a medicamentos e permitem o monitoramento por meio de imagens de espalhamento Raman aprimoradas por superfície. Biomateriais. 2020 Mar; 234:119763. PMID: 31978871. SE: 10.317
[18] Cheng Q, et al. Nanotherapeutics interferem com a homeostase redox celular para terapia fotodinâmica altamente melhorada. Biomateriais. 2019 Dez; 224:119500. doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119500. Epub 2019 Set 17. PMID: 31557591. SE: 10.273
[19] Zhong D, et al. α cúbico agregado disparado por laser-Fe2O3@Au nanocompósitos para ressonância magnética e terapia sinérgica fototérmica/radiação aprimorada. Biomateriais. 2019 Out; 219:119369. PMID: 31351244. SE: 10.273
[20] Sun C, et al. Eliminação de selenóxido manipula o estresse oxidativo para melhorar a eficácia antitumoral. Biomateriais. 2019 dez; 225:119514. doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119514. Epub 2019 set 24. PMID: 31569018. SE: 10.273
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