No processo de cultura celular, a digestão celular é frequentemente necessária, então a tripsina usada para digerir as células será indispensável para a cultura celular, e também é muito importante, o que afetará o estado de crescimento das células.

A tripsina pode ser amplamente dividida em dois tipos: a tripsina recombinante e a tripsina não recombinante.

• A tripsina não recombinante é derivada da extração animal, com origem animal, e também é o uso tradicional da tripsina, que é comumente encontrada no sistema digestivo animal e é extraída diretamente do tecido pancreático de bovinos ou suínos.
• A tripsina recombinante é produzida usando tecnologia genética recombinante e não é de origem animal.

Introdução e aplicação do produto

Tripsina não recombinante (derivada de animais)

Características do produto:

A tripsina não recombinante (também conhecida como tripsina) é uma enzima proteolítica serina extraída do pâncreas de bovinos, ovinos e suínos, que pode clivar especificamente o terminal carboxila da lisina e arginina carregadas positivamente, purificada por cristalização múltipla e posteriormente preparada por cromatografia e tecnologia de ultrafiltração, com origem animal.

Como as enzimas pancreáticas podem atuar em proteínas transmembrana e proteínas na matriz extracelular, como caderina, integrina, etc., elas agora são comumente usadas para dissociar tecidos e células monocamadas. Embora a tripsina possa hidrolisar a proteólise entre células para células discretas, a reação de diferentes tecidos ou células à tripsina é diferente, e a atividade de células dispersas também está relacionada à concentração de tripsina, temperatura e tempo de reação, e a capacidade da tripsina de dispersar células é mais forte sob as condições de pH de 7-9 e temperatura de 37 °C. A adição de EDTA à solução de tripsina como um agente quelante liga cálcio e magnésio em uma estrutura de seis dentes, o que pode enfraquecer a adesão célula-célula e aumentar a aquisição de ligações peptídicas direcionadas hidrolisadas pela tripsina.

A principal aplicação da tripsina nos primeiros dias no campo biofarmacêutico foi a produção de insulina, e logo ela também foi usada em outros campos de cultura de células. Enzimas pancreáticas animais são comumente usadas em cultura de soro, e a composição e concentração de tripsina adicionada a diferentes células são diferentes.

Aplicações

1. produção de insulina e vacinas inativadas;
2. Isolamento e cultura de células teciduais;
3. Uso clínico e cirúrgico;
4. Auxiliares de processamento na indústria alimentícia;

Tripsina recombinante (sem origem animal)

Características do produto

A tripsina recombinante é uma enzima produzida usando tecnologia de engenharia genética, que tem as vantagens de boa estabilidade, alta pureza e nenhuma origem animal. No processo de produção de biofármacos modernos, o uso de matérias-primas contendo origem animal pode trazer potenciais fontes de vírus que causam doenças zoonóticas para o produto, como BSE da doença da vaca louca, vírus da febre aftosa, etc., a fim de reduzir a fonte de poluição, a tripsina é sintetizada por meio de tecnologia de engenharia genética, que resolve o risco de contaminação por vírus que pode ser trazido pela tripsina suína ou bovina tradicional.

A tripsina recombinante é expressa principalmente por E. coli recombinante ou sistema de levedura e purificada por cromatografia multietapa, sem contaminação por heterozima, como a quimotripsina. A tripsina recombinante tem as mesmas propriedades da tripsina extraída naturalmente, com uma sequência de aminoácidos homóloga à sequência de tripsina suína, que cliva especificamente os grupos carboxila em resíduos de lisina e arginina na cadeia polipeptídica.Devido à sua poluição de origem não animal e alta pureza, ele tem uma ampla gama de aplicações em desenvolvimento farmacêutico, pesquisa bioquímica, proteômica e outros campos.

A tripsina recombinante convencional no mercado é uma tripsina suína recombinante expressa em Escherichia coli ou levedura usando tecnologia de DNA recombinante, e sua sequência de aminoácidos é completamente consistente com a tripsina suína, com a mesma atividade e especificidade da tripsina natural. É composta de 223 aminoácidos e contém 6 pares de ligações dissulfeto. A enzima contém duas formas ativas de tripsina: α-tripsina e β-tripsina. Sua atividade é inibida por inibidores de serina protease, como PMSF e TLCK, quelantes de íons metálicos, como EDTA, etc. A tripsina recombinante é usada em cultura sem soro e, como a tripsina, diferentes células são adicionadas com diferentes componentes e concentrações de tripsina.

Aplicações

1. produção de vacinas e insulina recombinante;
2. Preparação de amostras de tecido para análise celular;
3. Terapia com células imunes;
4. Produção biofarmacêutica;
5. Pesquisa de sequência, estrutura e ômicas de proteínas

Comparação detalhada de produtos

produtos	Tripsina não recombinante (derivada de animais)	Tripsina recombinante (sem origem animal)
Item	40123ES (vermelho de fenol (-), EDTA (+)) 40124ES (vermelho de fenol (-), EDTA (-)) 40126ES (vermelho de fenol(+),EDTA(-)) 40127ES (vermelho de fenol(+),EDTA(+))	40512ES 20416ES (MS-SAFE)
Fonte	Retirado do pâncreas de bovinos, suínos e ovinos	colibacilo（40512ES） Pichia pastoris（20416ES）
Segurança	Contaminação com potenciais patógenos	Nenhuma contaminação viral exógena
Pureza	Mais de 90% da solução de tripsina 1:250 é impureza	Alta pureza (β-tripsina≥ 70%, α-tripsina≤20%）
Tipo de célula de digestão	A maioria das linhas celulares fortemente aderentes contíguas	A maioria das linhas celulares fortemente aderentes contíguas
Limite de quimotripsina	Não mais que 50 unidades de quimiotripsina por 2500 unidades de tripsina.	Sem contaminação por mirosinase e outras enzimas de impurezas
Atividade específica	≥2500 Unidades USP/mg de proteína	≥3800 Unidades USP/mg de proteína
Efeito digestivo	instabilidade	Digestão forte e baixa quantidade de enzimas
Taxa de autocorte	É fácil autocortar e produzir fragmentos autocortantes, o que afeta os resultados da análise de espectrometria de massa	É fácil autocortar e produzir fragmentos autocortantes, o que afeta os resultados da análise de espectrometria de massa
Líquido dissolvido	Solução HBSS com ou sem Ca2+, Mg2+	Solução de HBSS com ou sem Ca2+ e Mg2+ (40512ES); 1 mM HCL (20416ES)
Sobrevivência celular	Normal	Normal
Se é necessário congelar-descongelar	Sim	Sim

Além da tripsina mais comum usada na digestão celular, existem muitos outros tipos de produtos de enzimas digestivas que também podem ser usados, como os seguintes.

Sobre o campo de aplicação da colagenase

A colagenase é uma endonuclease peptidase que pode reconhecer especificamente a sequência Pro-X-Gly-Pro e clivar a ligação peptídica entre o aminoácido neutro (X) e a glicina (Gly) na sequência. A colagenase é a única protease que pode degradar as fibrilas naturais de colágeno com uma estrutura superenrolada de três fitas e pode efetivamente hidrolisar outras proteínas, polissacarídeos e lipídios na matriz extracelular do tecido conjuntivo e tecido epitelial, tornando este produto muito adequado para digestão de tecidos.

1. Colagenase I., comumente usada como preparação de células epiteliais, fígado, pulmão, gordura e células do tecido adrenal;
2. Colagenase II, que é usada para a preparação de células derivadas de tecidos como coração, osso, músculo, fígado, tireoide e cartilagem;
3. Colagenase III, comumente usada na preparação de células mamárias;
4. Colagenase IV, comumente usada para a preparação de células das ilhotas pancreáticas ou para experimentos de preparação de células onde a integridade do receptor precisa ser mantida.
5. Colagenase V., adequada para o isolamento de células das ilhotas pancreáticas e células do tecido conjuntivo.

Sobre o campo de aplicação do composto tripsina

Accutase é um digest de células que contém atividade proteolítica e colagenase, e é um substituto perfeito para digestões de tripsina-EDTA para digerir células de vasos de cultura de tecidos convencionais e vasos de cultura aderentes. Accutase é adequado para dissociação de tecidos e isolamento de células, pois as células isoladas retêm antígenos de superfície intactos e não contêm nenhum componente derivado de animais ou bactérias, o que pode atender aos requisitos de experimentos subsequentes, como marcação de superfície celular, análise de crescimento viral, citometria de fluxo e ensaios relacionados a biorreatores.

Áreas de aplicação para substitutos de enzimas pancreáticas

Os produtos enzimáticos PerfCell Tryzyme™ Express são altamente puros, têm pouco dano celular, são leves na digestão e podem ser armazenados de forma estável em temperatura ambiente, tornando-os uma enzima digestiva ideal para diferentes culturas de linhagens celulares. Este tipo de produto não requer o uso de inibidores de tripsina para inativação e não contém origem animal, o que é mais amigável para alguns experimentos de células aderentes de crescimento sem soro.

Sobre a área de aplicação do dispase

Dispase II dispase II, uma metaloproteinase não específica, é comumente usada em biologia celular para isolar células únicas de diferentes tecidos ou órgãos, e é usada em culturas celulares subsequentes, como isolamento de células primárias, passagem de células, etc., e também pode ser usada para eliminar agregação celular que ocorre durante a cultura de células em suspensão. Comparada com outras proteases comumente usadas em biologia celular (por exemplo, tripsina, colagenase, pronase, etc.), esta enzima tem as seguintes vantagens:

1. Enzimas de digestão celular rápidas, eficazes e suaves, com poucos danos às células, e podem manter a integridade das membranas celulares;
2. Derivado de bactérias, sem contaminação por micoplasma ou outros vírus animais;
3. Forte estabilidade, não afetado pela temperatura, pH e componentes do soro;
4. Pode ser usado para o isolamento de vários tipos de tecidos e células.

Recomendações de produtos relacionados

Número de catálogo	Nome do produto	Tamanho
40123ES60	PerfCel™l Tripsina-EDTA (0,25%), Vermelho de fenol	100 mL
40124ES60	PerfCell™ Tripsina - sem EDTA (0,25%), sem vermelho de fenol	100 mL
40126ES60	PerfCell™ Tripsina (0,25%), vermelho de fenol	100 mL
40127ES60	PerfCell™ Tripsina-EDTA (0,25%), Vermelho de fenol	100 mL
40101ES25	Tripsina 1:250 (pó)	25 g
40512ES10/60	PerfCell™ Tripsina recombinante (pó)	10 mg/100 mg
20416ES60	Tripsina recombinante (MS-SAFE)	100 µg
40134ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 mL
40135ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 mL
40506ES60	PRECISÃO	100 mL
40104ES60/80	Dispase II	100 mg/1 g