--O kit de ensaio
A ligação de Fluoresceína-dUTP ao DNA cortado pela TdT transferase é um dos métodos mais comuns para detectar apoptose, por exemplo, o In Situ Cell Death Kit da Roche é baseado neste princípio. A atividade da TdT transferase no produto afeta diretamente a eficiência da marcação. A
Atualmente, mais de 120 grupos de pesquisa estão usando este produto e publicaram muitos artigos em inglês em periódicos confiáveis, como Theranostics e EMBO Molecular Medicine.
Mecanismo de detecção
No estágio final da apoptose, quebras de fita dupla ou fita simples do DNA cromossômico produzem um grande número de extremidades 3-OH pegajosas e, sob a ação da transferência terminal de desoxirribonucleotídeo (TdT), o dUTP marcado com fluoresceína/enzima é ligado à extremidade 3-terminal do DNA, de modo que a detecção da apoptose pode ser realizada por meio da detecção de fluorescência, que é chamada de marcação de extremidade nick mediada por transferase terminal de desoxirribonucleotídeo. Esse método é chamado de marcação de extremidade nick mediada por transferase terminal de desoxirribonucleotídeo (TUNEL), e o princípio é mostrado na Figura 1.
Figura 1: Diagrama esquemático da marcação de extremidade de níquel mediada por desoxinucleotidil transferase terminal (TUNEL)
Características do produto
- Ampla gama de aplicações
Pode ser usado para cortes de tecido embebidos em parafina, cortes de tecido congelado, células cultivadas e células isoladas de tecidos.
- Alta sensibilidade de detecção
Uma quantidade muito pequena de células apoptóticas pode ser detectada.
- Baixa interferência de fundo
Alta relação sinal-ruído.
- Versatilidade de observação
Observação por microscopia de fluorescência, detecção de fluxo.
Apresentação de dados
1、Ensaio de Tunel de pré-adipócitos de camundongo (3T3-L)
Figura 2: Detecção de apoptose 3T3-L de pré-adipócitos de camundongo. A primeira linha representa o controle negativo e a segunda linha representa o controle positivo. Reagente de detecção: Cat No. 40306 Kit de detecção de apoptose TUNEL (FITC)
2、Detecção de túnel de amostras de seções de parafina
Figura 3: LY3009120 sozinho ou em combinação com Vemurafenib e Obatoclax retardou efetivamente o câncer de tireoide em um modelo de tumor de enxerto subcutâneo. IF=8,8. Tipo de amostra: tecido tumoral embebido em parafina (retirado de camundongos nus). Reagente de detecção: Cat No. 40307 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 488).
3、Detecção de túnel de rastreamento de células
Figura 4: Efeito do sulfato de zinco na apoptose de células endoteliais em diferentes subgrupos. Tipo de amostra: HUVEC (células endoteliais da veia umbilical humana). Reagente de detecção: Cat No. 40308 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 640)
4、Citometria de fluxo para detectar apoptose
Figura 5: O tratamento com PA pode efetivamente reduzir a ocorrência de apoptose durante a reprogramação. IF=3,7. Tipo de amostra: Células iPS. Reagente de detecção: Cat No. 40307 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 488).
Citação de Literatura
[1] Li C, Wang Q, Gu X, et al. O nanocompósito poroso Se@ SiO2 promove a migração e a diferenciação osteogênica de células-tronco mesenquimais da medula óssea de ratos para acelerar a cicatrização de fraturas ósseas em um modelo de rato[J].Revista Internacional de Nanomedicina, 2019, 14: 3845. (SE 4,76)
[2] Miao T, Qian L, Yu F, et al. Efeitos protetores do amarelo de hidroxicártamo em lesões de células endoteliais de artérias coronárias humanas induzidas por lipoproteínas de baixa densidade altamente oxidadas[J]. Desenvolvimento, 2019, 22: 581-589.(SE 6.208 )
[3] Wen Y, Liu G, Zhang Y, et al. O microRNA-205 está associado à disfunção erétil induzida por diabetes mellitus por meio da regulação negativa do receptor de andrógeno[J]. Journal of cellular and molecular medicine, 2019, 23(5): 3257-3270.(SE 4.41)
[4] Xu T, Ding W, Ao X, et al. ARC regula a necrose programada e a lesão de isquemia/reperfusão miocárdica por meio da inibição da abertura de mPTP[J]. Redox Biology, 2019, 20: 414-426.(SE 8.37)
[5] Li P, Hao L, Guo YY, et al. A cloroquina inibe a autofagia e deteriora a disfunção mitocondrial e a apoptose em neurônios hipóxicos de ratos[J]. Life Sciences, 2018, 202: 70-77.(SE 3.40)
[6] Chen H, Guan B, Chen X, et al. Baicalin atenua a ruptura da barreira hematoencefálica e a transformação hemorrágica e melhora o resultado neurológico em ratos com acidente vascular cerebral isquêmico com tratamento tardio com t-PA: envolvimento da via ONOO−-MMP-9[J]. Translational Stroke Research, 2018, 9(5): 515-529.(SE 4,87)
[7] Liu Q, Qian Y, Li P, et al. Os efeitos terapêuticos combinados de microesferas multifuncionais carregadas com sulfeto de cobre marcadas com iodo 131 no tratamento do câncer de mama[J]. Acta Pharmaceutica Sinica B, 2018, 8(3): 371-380.(SE 6,88)
[8] Han YQ, Ming SL, Wu HT, et al. O knockout da miostatina induz a apoptose em células de câncer cervical humano por meio da geração elevada de espécies reativas de oxigênio[J]. Redox Biology, 2018, 19: 412-428.(SE 8.37)
[9] Wang S, Xu Y, Weng Y, et al. Astilbina melhora a nefrotoxicidade induzida por cisplatina por meio da redução do estresse oxidativo e da inflamação[J]. Food and Chemical Toxicology, 2018, 114: 227-236.(SE 3,78)
[10] Liu L, Pang XL, Shang WJ, et al. O microRNA-181a superexpresso reduz a esclerose glomerular e a lesão epitelial tubular renal em ratos com doença renal crônica por meio da regulação negativa da via TLR/NF-κB pela ligação ao CRY1[J]. Molecular Medicine, 2018, 24(1): 49.(SE 3.46)
[11] Li G, Yin Q, Ji H, et al. Um estudo sobre triagem e efeito antitumoral do peptídeo ligante específico de CD55 em células de câncer cervical[J]. Drug Design, Development and Therapy, 2018, 12: 3899.(SE 3.27)
[12] Qian Y, Wang Y, Jia F, et al. Nanomicelas controladas por microambiente tumoral com propriedade AIE para impulsionar a terapia do câncer e o monitoramento da apoptose[J]. Biomateriais, 2019, 188: 96-106.(SE 9,85)
[13] Li Z, Li D, Li Q, et al. Nanopartículas de guia de corona conjugadas com albumina de baixa imunogenicidade in situ para quimioterapia direcionada a tumores[J]. Biomaterials Science, 2018, 6(10): 2681-2693.(SE 5.31)
[14] Liu Y, Zhi X, Hou W, et al. Agregados de automontagem de pontos de carbono induzidos por íons Gd3+ carregados com um fotossensibilizador para imagem dupla de fluorescência/RM aprimorada e terapia antitumoral[J]. Nanoscale, 2018, 10(40): 19052-19063.(SE 7.17)
[15] Liu Q, Qian Y, Li P, et al. 131 Microesferas carregadas com sulfeto de cobre marcadas com I para tratar tumores hepáticos por meio de embolização da artéria hepática[J]. Theranostics, 2018, 8(3): 785.(SE 8.12 )
Perguntas frequentes
P: Aparecimento de marcação fluorescente não específica?
1) O próprio tecido/células tem altos níveis de atividade de nuclease ou polimerase, o que pode facilmente levar ao aparecimento de marcação fluorescente não específica, como células musculares lisas. A solução é fixar as células ou tecidos imediatamente após tomá-los e fixá-los o suficiente para impedir que essas enzimas causem falsos positivos.
2) O uso de fixadores inapropriados, como alguns fixadores ácidos, leva a falsos positivos. Fixador de paraformaldeído neutro a 4% preparado recentemente é recomendado.
3) Fluorescência não específica também pode ocorrer quando o tempo de reação do ensaio TUNEL é muito longo e a superfície da célula ou tecido não pode ser mantida molhada. Tome cuidado para controlar o tempo de reação e certifique-se de que a solução de reação do ensaio TUNEL cubra bem a amostra.
P: O fundo de fluorescência é muito alto?
1) Células que se dividem e proliferam em alta taxa, com altos níveis de transcrição, às vezes também apresentam quebras de DNA no núcleo.
2) A exposição prolongada à luz de excitação leva a falsos positivos.
P: Baixa eficiência de rotulagem?
1) A fixação com etanol ou metanol leva à baixa eficiência de marcação.
2) O tempo de fixação é muito longo, resultando em um grau muito alto de reticulação. É aconselhável reduzir o tempo de fixação.
3) A seção do tecido é muito espessa, o que torna o efeito de fixação insatisfatório, sendo melhor controlar dentro de 10 μm.
(4) Extinção de fluorescência: A fluorescência será severamente extinta em 10 min de luz normal. A solução é evitar a operação de luz.
Detalhes do produto
| Nome do produto | Item nº. | Especificação |
| Kit de detecção de apoptose de anexina V-FITC/7-AAD | 40311ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40302ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Kit de detecção de apoptose de anexina V-PE/7-AAD | 40310ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40303ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Kit de detecção de apoptose Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD | 40313ES60 | 100T |
| 40305ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40304ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Kit de detecção de apoptose Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD | 40312ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40306ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40307ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40308ES20/50/60 | 20T/50T/100T |