Mitocôndrias
As mitocôndrias são as fábricas de energia da célula, o principal local de fosforilação oxidativa intracelular e síntese de trifosfato de adenosina (ATP), que fornece energia para atividades celulares. 95% da energia necessária para atividades da vida celular vem das mitocôndrias. Além de fornecer energia para as células, as mitocôndrias também estão envolvidas em processos como diferenciação celular, transferência de informação celular e apoptose, e possuem a capacidade de regular o crescimento celular e o ciclo celular. Portanto, ensaios como mitocôndrias e membranas mitocondriais são uma parte essencial do estudo das células.
Definição e importância do potencial da membrana mitocondrial
O potencial da membrana mitocondrial é o resultado da distribuição de carga em ambos os lados da membrana mitocondrial interna e é um fator-chave na manutenção da função mitocondrial normal. Nas mitocôndrias, a cadeia de transporte de elétrons gera um gradiente de prótons por meio de reações redox que impulsionam a síntese de ATP. A estabilidade do potencial da membrana mitocondrial está diretamente relacionada ao suprimento de energia da célula e seu status de sobrevivência. Um grande número de estudos mostrou que as mitocôndrias estão intimamente relacionadas à apoptose, na qual a diminuição do potencial transmembrana mitocondrial é considerada um dos primeiros eventos no processo de reação em cascata apoptótica. Ocorre antes do aparecimento de características apoptóticas (condensação da cromatina, quebras de DNA) no núcleo e, uma vez que o potencial transmembrana mitocondrial entra em colapso, a apoptose é irreversível. Assim, a diminuição do potencial da membrana mitocondrial é um evento marcante nos estágios iniciais da apoptose.
Princípio de funcionamento da sonda JC-1
JC-1 é um corante fluorescente lipídico catiônico, que pode ser usado como um indicador do potencial transmembrana mitocondrial. O JC-1 existe em dois estados: monômero e multímero. Em baixa concentração, ele existe como um monômero, e a fluorescência verde pode ser detectada e, quando detectada pelo ensaio de fluxo, geralmente está no canal FL-1 (o mesmo canal do FITC). Em alta concentração, ele existe como um multímero e a luz vermelha pode ser detectada, e quando detectado pelo ensaio de fluxo, geralmente está no canal FL-2 (o mesmo canal do PE). O JC-1 também pode ser usado como um corante fluorescente lipídico catiônico e pode ser usado como um indicador de potencial transmembrana mitocondrial. e PE mesmo canal). Devido à mudança da concentração de JC-1, um processo de transição reversível entre monômero e multímero é formado.
Em células normais, quando o potencial de membrana é normal, JC-1 entra na mitocôndria através da polaridade da membrana mitocondrial e forma multímeros fluorescentes vermelhos devido ao aumento da concentração, enquanto em células apoptóticas, o potencial transmembrana mitocondrial é despolarizado e JC-1 é liberado da mitocôndria em uma concentração reduzida e revertido para a forma de monômero fluorescente verde. Portanto, mudanças no potencial de membrana mitocondrial podem ser detectadas pela detecção de fluorescência verde e vermelha.
Nota: Imagens citadas da internet
Sonda JC-10
JC-10, um derivado de JC-1, é uma sonda dependente de potencial usada para determinar o potencial transmembrana mitocondrial por citometria de fluxo, microscopia de fluorescência e ensaios de fluorescência baseados em placas de microtitulação. Em células saudáveis, JC-10 acumula-se seletivamente nas mitocôndrias, gerando agregados vermelhos que exibem um amplo espectro de excitação e emitem grandes valores a 590 nm.No entanto, em células apoptóticas e necróticas com baixo potencial transmembrana mitocondrial, o JC-10 difunde-se para fora da mitocôndria e produz monômeros de JC-10, resultando em uma mudança para emissão verde (525 nm). Ele tem sido usado com sucesso como um indicador do potencial transmembrana mitocondrial em uma variedade de tipos de amostra, incluindo miócitos, neurônios, tecidos intactos e mitocôndrias isoladas.
JC-10--Substituição do JC-1
- Estabilidade: JC-10 tem menos viés de detecção porque tem maior solubilidade e maior sensibilidade em meios aquosos.
- Sinal aprimorado: o JC-10 tem uma relação sinal-ruído maior que o JC-1.
- Sensibilidade aprimorada: o JC-10 é capaz de detectar mudanças sutis na perda de potencial transmembrana mitocondrial melhor do que o JC-1 em todas as linhas celulares testadas.
- Ampla aplicação: JC-10 pode ser usado em hepatócitos primários de ratos.
- Conveniente: o JC-10 é compatível com marcadores enzimáticos fluorescentes, geradores de imagens celulares e citômetros de fluxo.
Notas:. Alterações no potencial da membrana mitocondrial induzidas por comedões foram medidas em células Jurkat com JC-10 e JC-1. Após tratar células Jurkat com camptotecina (10 mM) por 4 h, soluções de upsampling de corante JC-1 e JC-10 foram adicionadas aos poços e incubadas por 30 min. A intensidade de fluorescência das formas agregadas e monoméricas de JC-1 e JC-10 foi medida em Ex/Em = 490/525 nm e 490/590 nm usando um marcador de enzima NOVOstar (BMG Labtech).
Análise dos resultados
Ao detectar o monômero JC-1, a luz de excitação pode ser ajustada para 490 nm e a luz de emissão pode ser ajustada para 530 nm; ao detectar o polímero JC-1, a luz de excitação pode ser ajustada para 525 nm e a luz de emissão pode ser ajustada para 590 nm. A apoptose foi detectada por citometria de fluxo, a fluorescência verde foi detectada através do canal FL-1, e a fluorescência vermelha foi detectada através do canal FL-2. FL-1+, FL-2 + são células normais e FL-1+, FL-2- são células apoptóticas.
Nota: A fonte da imagem são os fóruns do site da China Streamline Association
Opere sem dúvida
P: Sonda fluorescente de potencial de membrana mitocondrial JC-1. Este produto pode ser usado para colorir cortes de tecido?
R: Digerir o tecido vivo em células individuais para garantir a atividade das células antes da coloração.
P: Posso fixar as células antes de colori-las com JC-1?
R: Não. O corante JC-1 acumula-se nas mitocôndrias de uma maneira dependente do potencial e pode ser usado para detectar células, tecidos ou potenciais de membrana mitocondrial purificados. A imobilização interrompe o potencial elétrico, resultando na incapacidade da sonda de se acumular nas mitocôndrias e perda de especificidade.
P: Há partículas agregadas na solução de trabalho JC-1 e pretendo removê-las por centrifugação antes da coloração. Há algum parâmetro recomendado para centrifugação?
R: A solução de trabalho JC-1 pode ser centrifugada a 13.000 g por cerca de 1-2 minutos.
Informações para pedidos
| Nome do produto | Item nº. | Especificação |
| Sonda fluorescente de potencial de membrana mitocondrial JC-1 | 40705ES03/08 | 1 mg/5 mg |
| Sonda fluorescente de potencial de membrana mitocondrial JC-10 | 40707ES03/08 | 1 mg/5 mg |