A tecnologia de amplificação isotérmica de ácido nucleico pode ser dividida em muitas categorias de acordo com diferentes princípios de amplificação. Atualmente, a mais comum e amplamente usada é a tecnologia de amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP) desenvolvida pelo estudioso japonês Notomi et al. em 2000. A Bst DNA polimerase é a enzima central da tecnologia de amplificação isotérmica. Qual é a função e o desempenho da Bst DNA polimerase na LAMP?

1. Como a Bst DNA polimerase desempenha um papel no LAMP?
2. O que é a DNA polimerase Bst Plus liofilizada?
3. Qual é a característica do produto de Liofilizado BST-Série Mais ADN Polimerase (14405ES)?
4. Qual é o desempenho do produto Liofilizado BST-Série Mais ADN Polimerase (14405ES)?
5. Produtos relacionados
6. Sobre a leitura

1. Como a Bst DNA polimerase desempenha um papel no LAMP?

A característica técnica do LAMP é projetar quatro primers para seis regiões do gene alvo e realizar a reação de amplificação usando a BST DNA polimerase sob a condição de temperatura constante de 60~65 ℃, alcançando 109-1010 vezes a amplificação em 15-60 minutos. A Bst DNA polimerase tem forte estabilidade térmica, atividade de deslocamento de fita e atividade de polimerase. Pode ser um molde de amplificação rápido, eficiente e específico sob condições de temperatura constante sem ciclo de amplificação de desnaturação térmica de PCR e completar todo o experimento LAMP em 1 hora.

2. O que é a DNA polimerase Bst Plus liofilizada?

A Bst Plus DNA Polymerase liofilizada é usada para congelar a Bst Plus DNA Polymerase sem glicerol, o que resolve o problema da instabilidade da enzima Bst sem glicerol. Ao mesmo tempo, este produto tem forte atividade de DNA polimerase 5'-3', atividade de deslocamento de fita e tolerância a dUTP, o que é mais adequado para a reação de amplificação isotérmica antipoluição. É conveniente para os clientes usarem na produção de produtos liofilizados.

Figura 1: 14405ES-Bst Plus DNA Polimerase Liofilizada (60 U/μL, Sem Glicerol)

3. Qual é a característica do produto Liofilizado BST-Série Mais ADN Polimerase (14405ES)?

• A enzima livre de glicerol, adequada para liofilização
• Transporte em temperatura normal para reduzir custos
• Forte atividade de deslocamento de fios, sensível e estável
• Rápida redissolução e operação conveniente

4. Qual é o desempenho do produto Liofilizado BST-Série Mais ADN Polimerase (14405ES)?

4.1 Formato do pó liofilizado: comparado ao momento T0, o formato do pó permanece inalterado após liofilização de 45 ℃ - 15 DIAS.

Figura 2. Forma de pó liofilizado

4.2 estabilidade

O desempenho do pó liofilizado após a aceleração térmica ainda pode ser consistente com o do reagente líquido, e o pó liofilizado (14405ES) é
universal e pode ser usado para o método de corante fluorescente e método indicador de pH.

4.2.1 Método de corante fluorescente — estabilidade

No sistema de amplificação de corante fluorescente RT-LAMP, o desempenho do pó liofilizado Bst sem glicerol após T0, 45℃-7 dias e 45℃-15 dias de aceleração térmica é consistente com o da versão líquida da enzima Bst sem glicerol, e o NTC não atinge o pico.

Condições experimentais:

Nota: O grupo de controle é uma versão líquida sem enzima Bst de glicerol da mesma concentração.

Figura 3. Resultados de estabilidade

4.2.2 Método de corante fluorescente — Desempenho da enzima Bst após liofilização do sistema RT-LAMP

No sistema de amplificação de corante fluorescente RT-LAMP, o desempenho do produto do pó liofilizado de Bst sem glicerol liofilizado no sistema RT-LAMP após 45 ℃ - 15 dias foi consistente com o da versão líquida da enzima Bst sem glicerol. A taxa de detecção do produto no grupo de controle e no sistema RT-LAMP após liofilização foi de 100% (16/16) e 94% (15/16), respectivamente.

Condições experimentais:

Nota: O grupo de controle é uma versão líquida sem enzima Bst de glicerol da mesma concentração.

Figura 4. Desempenho da enzima Bst após liofilização do sistema RT-LAMP

4.2.3 Método do indicador de pH ——Estabilidade

No sistema de amplificação do indicador de pH RT-LAMP, em comparação com o tempo T0, a taxa de detecção do pó liofilizado Bst foi de 88% (7/8) após 45 ℃ - 15 dias de aceleração térmica.

Condições experimentais:

Nota: O grupo de controle é uma versão líquida sem enzima Bst de glicerol da mesma concentração.

Figura 5. Resultados de estabilidade

4.2.4 Método do indicador de pH — Estabilidade de recongelamento

No sistema de amplificação do indicador de pH RT-LAMP, após 45 ℃ - 7 dias de recongelamento, o desempenho é estável. O grupo de controle é a enzima Bst líquida. Comparado com o grupo de controle, a taxa de detecção de 14405ES após aceleração térmica é de 94% (30/32).

Condições experimentais:

Nota: O grupo de controle é uma versão líquida sem enzima Bst de glicerol da mesma concentração.

Figura 6. Resultados de estabilidade de recongelamento

4.3 Especificidade

No sistema de amplificação de corante fluorescente RT-LAMP, o NTC de 48 poços não atingiu o pico, e a especificidade do 14405ES foi de 100%.

Condições experimentais:

Nota: O grupo de controle é uma versão líquida sem enzima Bst de glicerol da mesma concentração.

Figura 7. Resultados específicos

5. Produtos relacionados

Os produtos relacionados que a Yeasen pode fornecer são mostrados na Tabela 1.

Tabela 1.Produtos relacionados

6. Sobre a leitura

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