A Tecnologia de Amplificação Isotérmica de Ácido Nucleico (INAAT) é usada principalmente em biologia molecular para identificar e analisar ácidos nucleicos. É usada principalmente para DNA, RNA, proteínas celulares, íons, moléculas, etc. A INAAT fornece um diagnóstico rápido, sensível e preciso de doenças genéticas e infecciosas. Seus produtos amplificados podem ser usados ​​em biossensores, bioimagem e biomedicina. Além disso, a INAAT é usada para detectar várias doenças, como gripe, HIV, tuberculose, clamídia, gonorreia (CT/NG), hepatite A e hepatite B, etc. De acordo com a tecnologia, a amplificação isotérmica pode ser dividida em LAMP, RPA, CPA, SDA, RCA, HDA, etc. Então, o que é LAMP? Quais são as vantagens do RT-LAMP?

1. O que é LAMP?
2. Quais são as vantagens do RT-LAMP?
3. Quais são as características do “Cat#13762 Kit de ensaio de corante RT-LAMP (UDG plus)"?
4. Quais são as características do "Kit de corante sensível ao pH RT-LAMP Cat#13906"?
5. Pode ser liofilizado em contas liofilizadas?
6. Quais produtos podemos recomendar?

1. O que é LAMP?

LAMP é atualmente uma tecnologia amplamente usada no campo da amplificação isotérmica. Ela usa 4-6 primers que podem identificar 6 regiões específicas no gene alvo e depende da forte atividade de deslocamento de fita da Bst DNA polymerase. A amplificação interna do produto alvo pode atingir 10⁹-10¹⁰ vezes. Existem muitos métodos de detecção de LAMP, incluindo o método de corante, método colorimétrico de pH, método de turbidez, HNB, calceína, etc. O método de fluorescência recentemente desenvolvido e os kits de detecção de pH da nossa empresa têm alta sensibilidade, boa aplicabilidade de primer e excelente desempenho em especificidade, tolerância e estabilidade. Comparado com produtos semelhantes, ele tem vantagens óbvias.

2. Quais são as vantagens do RT-LAMP?

Fácil de operar: tempo de reação curto, baixos requisitos de ambiente de laboratório, pode ser usado com chips microfluídicos ou detectores portáteis para detecção rápida;
Sensibilidade: 50 cópias/T, sistema de 25 μL;
Boa aplicabilidade do primer: primer N-2, primer do gene E, amplificação do primer de referência interna, etc. têm boa aplicabilidade;
Especificidade: o NTC de 48 poços não apresenta picos e a especificidade é forte;
Tolerância: boa tolerância a alguns agentes de liberação de ácido nucleico;
Alta estabilidade: estável a 37°C por 5 dias com boa estabilidade e pode suportar congelamento e descongelamento repetidos mais de 10 vezes;
Vantagem de mercado: O desempenho é superior aos produtos concorrentes nacionais e estrangeiros similares, e o custo-benefício é alto.

3. Quais são as características do "Cat#13762 RT-LAMP Dye Assay Kit (UDG plus)"?

3.1 Alta Sensibilidade

Figura 1. Teste de sensibilidade

Vermelho: 50 cópias/T, resposta em menos de 15 minutos
Azul: 25 cópias/T, resposta em menos de 15 minutos
Os dois números de cópias de 50 cópias/T e 25 cópias/T foram testados respectivamente. Os resultados do teste mostraram que, em 15 minutos, os resultados de 50 cópias/T tiveram melhor desempenho, e a taxa de detecção atingiu 100%.

3.2 Adequação do Primer

Figura 2. Detecção de adequação do primer de ácido nucleico bloqueado N5

Roxo: Yeasen  Azul: Empresa N

Figura 3.Ensaio de adequação do primer N

Verde: Yeasen     Vermelho: Empresa N

Figura 2, Figura 3: Na detecção específica de primers de ácido nucleico bloqueados N5 e primers N, de acordo com 50 cópias/T, a detecção correspondente foi realizada usando as marcas Yeasen e N. Os resultados mostraram que a aplicabilidade dos primers de ácido nucleico bloqueados N5 foi melhor do que a das marcas N. A aplicabilidade dos primers N é a mesma para os dois produtos.

Figura 4. Detecção de adequação do primer ACTIN

Roxo: Yeasen     Azul: Empresa N

15ng de 293DNA foram testados para adequação do primer ACTIN usando as marcas Yeasen e N. Os resultados mostraram que Yeasen teve excelente aplicabilidade.

3.3 Especificidade

Figura 5. Ensaio específico de NTC de 48 poços

A detecção NTC de 48 poços foi usada na detecção específica do produto, e nenhum pico foi detectado, indicando que a especificidade foi melhor.

3.4 Tolerância

Figura 6. Ensaio de tolerância ao liberador de ácido nucleico

Vermelho: Matriz DEPC H₂O
Verde: 50% de cada agente de liberação de ácido nucleico e DEPC H₂O
Azul: 100% agente de liberação de ácido nucleico
Usando a matriz DEPC H₂O, agente de liberação de ácido nucleico e DEPC H₂O com 50% e 100% de agente de liberação de ácido nucleico foram testados respectivamente. Os resultados mostram que este produto tem excelente tolerância a agentes de liberação de ácido nucleico.

3.5 Estabilidade

Figura 7. Teste de estabilidade na mesma temperatura

Vermelho: 37℃ 0 dia Azul: 37℃ 1 dia Verde: 37℃ 3 dias Roxo: 37℃ 5 dias
0 dias a 37°C como controle e testes de estabilidade foram realizados por 1, 3 e 5 dias na mesma temperatura, indicando que ele ainda pode manter um efeito relativamente estável a 37°C por 5 dias.

Figura 8. Teste de estabilidade de congelamento e descongelamento repetido de -20℃

Vermelho: Repita o congelamento-descongelamento 0 vezes
Azul: Repita o congelamento e o descongelamento 5 vezes
Verde: Repita o congelamento e o descongelamento 10 vezes

Figura 9. Teste de estabilidade de congelamento e descongelamento repetido de gelo seco

Vermelho: Repita o congelamento-descongelamento 0 vezes
Roxo: Repita o congelamento e o descongelamento 5 vezes
Teste repetido de estabilidade de congelamento-degelo a -20°C e gelo seco. Foi descoberto que a estabilidade do congelamento-degelo foi repetida 10 vezes a -20°C e 5 vezes em gelo seco.

3.6 Comparação de produtos similares

Figura 10. Comparação dos efeitos de produtos similares

Vermelho: Yeasen  Azul: Marca N1  Verde: Marca N2
Utilizando o primer do gene N, no caso de 50 cópias/T, usando Yeasen, marca N1 e marca N2 para verificação de comparação de produtos, os produtos Yeasen tiveram bom desempenho.

6. Quais produtos podemos recomendar?

Os produtos fornecidos pela Yeasen são os seguintes.

Tabela 1.Informações do produto