A peste suína africana (PSA) é uma doença infecciosa aguda, grave e altamente contagiosa causada pelo vírus da peste suína africana (PSAV) que infecta porcos domésticos ou javalis. Sua morbidade e mortalidade podem chegar a 100%, colocando seriamente em risco a indústria suína global e causando perdas econômicas incalculáveis. A Organização Mundial de Saúde Animal (OIE) a lista como uma doença animal notificável.

Atualmente, não há vacina ou tratamento eficaz para a peste suína africana. O diagnóstico rápido e preciso da peste suína africana por meio de métodos de diagnóstico laboratorial é crucial para prevenir a disseminação da doença. O qPCR como a principal ferramenta para o diagnóstico de rotina da PSA é recomendado pela OIE.

A Yeasen é uma fabricante com rica experiência em P&D de matérias-primas para IVD. Em face da peste suína africana, a Yeasen responde positivamente e coopera com os clientes para desenvolver três soluções de processo completo, da extração à detecção do vírus da peste suína africana. Então, quais são as três soluções? E quais são as aplicações dessas soluções? Continuando a ler...

Figura 1. Soluções de detecção da Peste Suína Africana de Yeasen

Solução I: TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)（investigação）

Características do produto

👍Sistema antipoluição UDG, prevenindo eficazmente o risco de contaminação por aerossol

👍Estabilidade de longo prazo da solução de PCR pré-misturada (master mix + primers + sondas) em temperatura ambiente, simplificando muito a dificuldade de detecção

👍Alta eficiência de amplificação e boa repetibilidade

👍Adequado para multiplataforma e multissistema

Apresentação de Caso

👉Estabilidade de longo prazo da solução de PCR pré-misturada
Cat#13171 foi usado para configurar a solução de PCR pré-misturada que pode ser colocada a 37°C por 7 dias, e congelamento e descongelamento repetidos 15 vezes na amplificação do sistema de plasmídeo ASF. Os resultados mostraram que o valor Ct e a sensibilidade da solução de PCR não diferiram significativamente após a colocação por 7 dias a 37℃, e o valor Ct não mudou significativamente após congelamento e descongelamento repetidos 15 vezes.

Figura 2. Cat#13171 TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)(Inquirir) usado em solução de PCR pré-misturada com estabilidade de longo prazo na amplificação do sistema de plasmídeo ASF. 2A-Valor Ct a 37℃ por 0 dia e 7 dias 2B-Sensibilidade a 37℃ por 0 dia e 7 dias 2C-Estabilidade após congelamento-degelo 15 vezes

👉Reagentes estáveis ​​e reprodutíveis
Quatro lotes diferentes de Cat#13171 foram selecionados para repetir o experimento de amplificação do sistema plasmídeo ASFV 20 vezes. Não houve diferenças significativas nos valores de Ct, com um CV de menos de 1%.

Figura 3.Teste de repetibilidade de Yeasen Cat#13171

👉Multiplataforma multissistema aplicável
Yeasen Cat#13171 foi usado para amplificar plasmídeos duais de peste suína africana ASFV/ACT nas plataformas Bio-Rad CFX96, ABI Q5 e Slan, respectivamente. Pode-se ver que Yeasen Cat#13171 é adequado para vários tipos de instrumentos, e os dados são confiáveis ​​e estáveis.

Figura 4. Sistema de PCR em tempo real Bio-Rad CFX96

Figura 5. Sistema de PCR em tempo real ABI Q5

Figura 6. Sistema Slan de PCR em tempo real

Solução II:Universal TaqMan multiplex qPCR master mix

O master mix multiplex qPCR Universal TaqMan da Yeasen (Cat#11211) é profundamente otimizado para amplificação eficiente de modelos de baixa concentração usando a polimerase de DNA Taq Hot-Start modificada por anticorpo e o buffer multiplex correspondente. Este produto suporta até reações de PCR 4-plex em um único tubo e é ideal para genotipagem e análise multiplex qPCR.

Características do produto

👍Forte tolerância a impurezas sanguíneas, pode ser usado com reagente de extração de ácido nucleico Yeasen Cat#13720 Reagente de liberação de ácido nucleico V2, ideal para qPCR direto
👍Sensibilidade ultra-alta para 3 cópias/reação, melhora muito a precisão da detecção
👍Estabilidade de longo prazo da solução de PCR pré-misturada (master mix + primers + sondas) em temperatura ambiente, simplificando muito a dificuldade de detecção

Apresentação de Caso

👉Forte tolerância às impurezas do sangue
Comparado com produtos similares de outras marcas, o Yeasen Cat#11211 tem uma tolerância maior a inibidores em amostras de sangue. Os resultados mostraram que o Yeasen Cat#11211 tem uma alta tolerância a EDTA e citrato de sódio, e pode suportar 0,5% de sangue total.

Figura 7. Cat#11211 Universal TaqMan multiplex qPCR master mix e master mix de várias marcas são usados ​​para soluções de qPCR de ASF suplementadas com 3 mM de EDTA (3A), 6 mM de citrato de sódio (3B), 0,5% de sangue (3C), respectivamente.

👉Sensibilidade ultra-alta para 3 cópias/reação

A amplificação do plasmídeo ASFV com 20 replicados foi realizada com base nos produtos de diferentes marcas. Os resultados dos experimentos mostram que a taxa de detecção dos produtos Yeasen é maior.

Figura 8. Comparação das taxas de detecção entre produtos similares de diferentes marcas (3 cópias no sistema final)

👉Estabilidade a longo prazo, estável por 7 dias em temperatura ambiente

A solução de PCR do sistema de plasmídeo duplo ASFV/ACT pode manter desempenho estável após 7 dias a 4℃, 25℃ e 37℃. Pode ser visto que o valor Ct e o valor de fluorescência não mudaram significativamente.

Figura 9. Estabilidade da solução de PCR

Solução III: Amplificação Isotérmica

Os produtos da Yeasen oferecem suporte à tecnologia de amplificação isotérmica que ajuda a realizar a detecção de PSA de forma mais rápida e eficiente. Cat# 14402 Hieff™ Bst Plus DNA Polimerase (40 U/μL) é derivado de Thermophilic Geobacillus sp DNA Polymerase I, sem atividade de exonuclease 5'-3'. Este produto tem atividade de DNA polimerase 5'-3' mais forte, atividade de deslocamento de fita e tolerância a dUTP, o que é mais adequado para reações de amplificação isotérmica antipoluição, como LAMP, CPA, etc.

Características do produto

👍Alta eficiência de amplificação

👍Amplificação de alto rendimento

👍Tolerância a dUTP, pode ser usada em combinação com Cat#10303 Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG)(Inquirir), termolábil, 1 U/μL para evitar o risco de contaminação por aerossol

Apresentação de Caso

👉Alternativa superior aos produtos importados da marca N*

O processo de amplificação foi realizado usando Bst DNA polymerase da Yeasen e N* Company, respectivamente. Não houve diferença significativa no valor de Ct e intensidade de fluorescência entre as diferentes marcas.

Figura 10. Curvas de amplificação de diferentes marcas

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