Nos últimos anos, a incidência global de doenças infecciosas tem aumentado, com patógenos se tornando cada vez mais diversos e complexos. Um desafio significativo neste cenário é que aproximadamente metade dos pacientes enfrenta a situação de ter patógenos desconhecidos, tornando o diagnóstico rápido desses patógenos uma tarefa assustadora. Atualmente, a detecção clínica de patógenos depende principalmente de métodos de cultura tradicionais, técnicas de PCR, sequenciamento metagenômico (mNGS) e sequenciamento direcionado a patógenos (tNGS).
A PCR quantitativa fluorescente em tempo real ganhou destaque na detecção de ácido nucleico do SARS-CoV-2. Da mesma forma, o mNGS atraiu atenção por suas contribuições à luta contra o SARS-CoV-2 e fez a transição de ambientes clínicos para o uso diário. O tNGS, oferecendo as vantagens da PCR e do NGS, como velocidade, precisão e custo-efetividade em serviços de sequenciamento, está ganhando cada vez mais força no campo de testes clínicos.
Ao mesmo tempo, a aplicação de produtos biológicos se expandiu para biomedicina, agricultura biológica, bioenergia, fabricação biológica, proteção ambiental e outros domínios. À medida que a participação de mercado de produtos biológicos continua a crescer, órgãos governamentais e autoridades relevantes estabeleceram sistemas e padrões de gestão de qualidade padronizados para esses produtos. Uma área particular de foco diz respeito à presença de resíduos de ácido nucleico de células hospedeiras em produtos biológicos.
Produtos biológicos como medicamentos de proteína recombinante, medicamentos de anticorpos, vacinas e terapias celulares e genéticas são produzidos usando linhagens ou linhagens celulares consecutivas, resultando potencialmente na retenção de ácidos nucleicos do hospedeiro nos produtos finais. Ácidos nucleicos residuais do hospedeiro podem ter consequências adversas, como proliferação celular descontrolada levando à formação de tumores ou exacerbando respostas imunes pela introdução de genes virais. Portanto, a remoção eficaz de resíduos de ácido nucleico e a detecção rigorosa de resíduos são cruciais para garantir a segurança do produto biológico e atender aos requisitos de pesquisa. Na indústria, os métodos qPCR/RT-qPCR são amplamente empregados para desenvolver kits de detecção para detecção de resíduos de ácido nucleico do hospedeiro em produtos biológicos.
Além disso, enzimas moleculares comerciais são tipicamente expressas usando cepas de engenharia recombinantes, como E. coli, resultando na presença de DNA genômico do hospedeiro nessas enzimas moleculares. Além disso, fatores ambientais e humanos podem introduzir DNA contaminado em produtos de enzimas moleculares.
Durante o processo de detecção de patógenos, ácidos nucleicos bacterianos de fundo provenientes de contaminação podem ofuscar ácidos nucleicos alvo com baixa abundância ou ser detectados junto com ácidos nucleicos alvo. Isso pode impactar a sensibilidade da detecção de alvos ou levar a resultados falso-positivos, complicando o diagnóstico e as decisões de tratamento tomadas por profissionais médicos.
No desenvolvimento e produção de produtos de controle de qualidade para testes de resíduos de ácido nucleico do hospedeiro, a presença de ácidos nucleicos residuais do hospedeiro, incluindo aqueles de humanos, camundongos, E. coli, levedura e outros, em enzimas moleculares pode levar a imprecisões na quantificação de produtos de controle de qualidade de resíduos de ácido nucleico do hospedeiro. Isso representa riscos potenciais de segurança na fabricação de produtos biológicos.
YEASEN UCF.METM solução de enzima molecular com resíduo ultrabaixo
Para resolver o problema de bactérias de fundo e interferência de resíduos de ácido nucleico do hospedeiro, YEASEN estabeleceu uma plataforma completa de P&D e produção para a UCF.METM enzimas moleculares de resíduos ultrabaixos. E alcançou produção em larga escala de uma variedade de UCF.MEUTM enzimas moleculares de resíduos ultrabaixos por meio da seleção de materiais, controle ambiental, otimização de processos e garantia de qualidade.
YEASEN UCF.METM produtos enzimáticos moleculares de resíduo ultrabaixo
YEASEN reformou um conjunto completo de enzimas moleculares, como qPCR/RT-qPCR, construção de biblioteca NGS. Ao mesmo tempo, UCF.ME™ O processo de resíduo ultrabaixo é usado para processar produtos de enzimas moleculares, podemos fornecer um conjunto completo de matérias-primas de enzimas moleculares de alto desempenho e resíduo de hospedeiro ultrabaixo para qPCR/RT-qPCR e NGS para melhorar a precisão da detecção.
Mesa 1 A lista de YEASEN UCF.METM produtos enzimáticos moleculares de resíduo ultrabaixo
| Classificação do produto | Nome do produto | Nº de catálogo. | Critérios de E. coli controle de qualidade gDNA |
| UCF.EUTM produtos enzimáticos de resíduo ultrabaixo para qPCR/RT-qPCR | Hieff UCF.METM Taq DNA polimerase sensível de partida rápida (5 U/μL) | 14314ES | ＜0,005 cópias/U |
| Hifair UCF.METM V Transcriptase Reversa (200 U/μL) | 14608ES | ＜0,005 cópias/U | |
| UCF.EUTM Inibidor de RNase murina (40 U/μL) | 14672ES | ＜0,001 cópias/U | |
| UCF.EUTM Inibidor de RNase de alta afinidade (40 U/μL) | 14675ES | ＜0,001 cópias/U | |
| UCF.EUTM Uracil DNA glicosilase (UDG/UNG), termolábil, 1 U/μL | 14466ES | ＜0,1 cópias/U | |
| UCF.EUTM Uracila DNA glicosilase (UDG/UNG), 1 U/μL | 14454ES | ＜0,1 cópias/U |
Apresentação parcial de dados (UCF.ME)TM Exemplo de Taq DNA polimerase sensível de inicialização rápida）
- Rresíduode coli gDNA ＜0.005 cópias/U
- coliResíduos de gDNA de diferentes lotes de UCF.METMA enzima Taq (Cat#14314ES) foi detectada. O resultado mostrou que E. coli resíduos de gDNA resíduos da Taq DNA polimerase estavam bem abaixo de 0,005 cópias/U.
Figura 1: Detecção de E. coli gResíduo de DNA de UCF.METM Enzima Taq (Cat#14314ES)
- Nenhum DNA plasmídico residual foi detectado
Resíduos de DNA plasmídico de UCF.METM A enzima Taq (Cat#14314ES) e a Taq DNA polimerase da marca A foram detectadas. Os resultados mostraram que havia resíduo de DNA plasmídico na Taq DNA polimerase da marca A. Nenhum DNA plasmídico foi detectado em UCF.METM Enzima Taq (Cat#14314ES).
Figura 2: Resultados da detecção de resíduos de DNA plasmídico
- Onze tipos de bactérias de fundo comuns não foram detectados
Use o UCF.METM Enzima Taq (Cat#14314ES) acoplada a primers e sondas de Pseudomonas aeruginosa, Bactéria Acinetobacter baumannii, Serratia marcescens, Klebsiella pneumoniae, Stenotrophomonas maltophil, Estreptococo pneumoniae, Enterococo faecium, Staphylococcus aureus, E. coli, Enterococo faecalis para preparar a pré-mistura qPCR. NTC (No Template Control) foi detectado, os resultados mostraram que nenhum resíduo das 11 bactérias de fundo comuns acima foi detectado em UCF.METM Enzima Taq (Cat#14314ES).
Figura 3: Resultados de testes de 11 bactérias de fundo comuns (limitadas pelo espaço, Pseudomonas aeruginosa, Bactéria Acinetobacter baumannii, Serratia marcescens e Klebsiella pneumoniae são mostrados como exemplos)
- Apresentação do caso de teste do cliente
A enzima Taq comercial e YEASEN UCF.METM A enzima Taq (Cat#14314ES) foi usada para detectar NTC junto com o cliente E. coli primer específico, e os resultados mostraram que a enzima Taq comercial atingiu o pico 5 vezes em 22 experimentos repetidos. O UCF.METM A enzima Taq (Cat#14314ES) não atingiu o pico em 22 réplicas, indicando que o UCF.METM A enzima Taq (Cat#14314ES) não foi detectada E. coli gDNA.
Figura 4: Eetecção resultado de E.coli Resíduo de gDNA (caso de teste do cliente)
Esquerda: Enzima Taq convencional disponível comercialmente; Direita: UCF.METM Enzima Taq (Cat#14314ES)
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