A essência da quantificação da biblioteca NGS é a quantificação do ácido nucleico (DNA ou RNA). A análise precisa da quantificação da biblioteca NGS é crucial para obter dados de sequenciamento de alta qualidade. Se a concentração quantitativa da biblioteca NGS for alta, o rendimento dos dados de sequenciamento pode ser baixo devido ao agrupamento insuficiente. No entanto, a baixa concentração quantitativa pode causar interferência de sinal entre os agrupamentos para produzir dados de baixa qualidade e até mesmo levar à falha do sequenciamento. Além disso, com o aumento do fluxo de sequenciamento dos sequenciadores, várias bibliotecas NGS são frequentemente combinadas para sequenciamento. De acordo com os requisitos do tamanho dos dados de sequenciamento, as bibliotecas NGS com quantidades molares correspondentes são misturadas com base nos resultados quantitativos para estabilizar a saída do tamanho de cada dado de amostra. Portanto, a quantificação precisa das bibliotecas NGS é crucial.

Atualmente, existem dois métodos principais de quantificação de biblioteca NGS, o método de absorção ultravioleta e o método de corante fluorescente. NanoDrop é um instrumento de quantificação de DNA projetado com base no princípio de absorção ultravioleta; Qubit é um instrumento de quantificação de DNA desenvolvido de acordo com o princípio de corante fluorescente. A precisão quantitativa e o custo desses dois métodos são diferentes. O método qubit é principalmente recomendado aqui. Então, por que recomendamos o qubit para você? Quais são as características dos produtos Qubit fornecidos pela Yeasen? Por favor, continue lendo...

1. Por que recomendamos o Qubit para você?

2. Quais são as características dos produtos Qubit fornecidos pela Yeasen?

• Como o Qubit funciona?
• Produto popular fornecido pela Yeasen
• Características do produto

3. Como escolher o Qubit para diferentes amostras?

1. Por que recomendamos o Qubit para você?

Não há dúvida de que o Qubit é melhor que o Nanodrop. Então, por que o qubit é melhor que o nanodrop? Qual é a diferença entre o qubit e o nanodrop? Primeiro, como mencionado antes, eles diferem no princípio da quantificação de DNA, o NanoDrop é projetado com base na absorção ultravioleta. O princípio do método de absorção ultravioleta é que há bases de purina e pirimidina em componentes de ácido nucleico, e essas bases têm ligações duplas conjugadas. Há forte absorção de luz em 250-280 nm na região UV, e o valor máximo de absorção é de cerca de 260 nm. Portanto, a absorção UV do ácido nucleico pode ser usada para quantificação de concentração. O NanoDrop é simples e rápido de operar, mas não consegue distinguir entre DNA, RNA, ácidos nucleicos degradados, nucleotídeos livres e outras impurezas. Não é adequado para obter dados quantitativos precisos da biblioteca. Mas, a quantificação Qubit é a melhor escolha para quantificação precisa da biblioteca NGS, especialmente para quantificação de DNA. Então, quais são as características da quantificação de DNA de qubit? Por favor, veja a tabela a seguir:

2. Quais são as características dos produtos Qubit fornecidos pela Yeasen?

Antes de apresentar as características dos produtos Qubit fornecidos pela Yeasen, vamos entender como eles funcionam.

2.1 Como o Qubit funciona?

O princípio do Qubit é usar corantes fluorescentes para se ligar a moléculas de DNA para emitir fluorescência e, então, medir a intensidade da fluorescência para obter a concentração de ácido nucleico. Os corantes fluorescentes fluorescem somente após se ligarem à fita dupla de DNA, e a fluorescência resultante é proporcional à concentração de DNA.

2.2 Produto popular fornecido pela Yeasen

O Kit de ensaio 1×dsDNA HS para Qubit® (Cat#: 12642ES), desenvolvido com base no O kit de ensaio dsDNA HS para o kit Qubit® (Cat#: 12640ES) é uma solução de pré-mistura Qubit pronta para uso para pré-diluir os corantes concentrados no kit original em uma solução de trabalho. Ao operar, você só precisa misturar o líquido de trabalho com a amostra a ser testada para determinar a concentração da amostra pelo fluorômetro Qubit®, que é mais conveniente de usar.

2.3 Características do produto

Simples e fácil de operar: líquido pré-misturado pronto para uso, sem necessidade de preparar líquido de trabalho, operação simples, economia quantitativa de tempo;

Figura 1. Os processos do kit de ensaio dsDNA HS para Qubit

Sensibilidade ultra-alta: quantificação precisa de diluição de gradiente de 64x, dsDNA de 0,2-100 ng tem boa relação linear;

Super especificidade: Detecção específica de dsDNA, possui excelente tolerância a alguns poluentes convencionais;

Velocidade de ligação rápida do corante: a saturação pode ser alcançada em 2 minutos, portanto não há necessidade de esperar pela leitura rápida de resultados quantitativos precisos;

Alta estabilidade: O sinal de fluorescência durou 3h e a precisão quantitativa não foi afetada após 20 dias em temperatura ambiente.

Figura 1. O teste de estabilidade do produto. Os resultados mostram que ele permanece estável após ser armazenado em temperatura ambiente por 2 semanas (o desvio entre o valor medido e o valor teórico foi <10%)

Nota: Duas concentrações de dsDNA foram selecionadas, e Thermo#Q33230 armazenado a 4℃, Yeasen#12642 armazenado a 4℃ e Yeasen#12642 armazenado à temperatura ambiente (cerca de 25℃) foram usados ​​para determinar os valores de concentração em momentos diferentes, e a taxa de desvio entre cada medição e a primeira (denotada como 0d) foi calculada.

Figura 2. Teste de estabilidade do produto. Super estabilidade, alta relevância dos resultados do teste dentro do período de validade

3. Como escolher o Qubit para diferentes amostras?

Qubit, quantificação rápida! Usar Qubit para quantificação de biblioteca tem muitas vantagens. Seu processo de detecção é rápido e eficaz.Os resultados do sequenciamento podem ser obtidos em poucos segundos para uma única amostra e a concentração pode ser diretamente emitida, o que é muito intuitivo. Ao mesmo tempo, também pode ser compatível com a maioria dos instrumentos de marcação de enzimas para quantificação de amostras em lote, que é a primeira escolha para quantificação de biblioteca convencional e quantificação de dsDNA.