A quantificação de ácido nucleico, como um dos experimentos mais fundamentais em biologia molecular, afeta diretamente o resultado de experimentos posteriores. A precisão da quantificação de ácido nucleico é crucial. Atualmente, existem dois métodos principais de quantificação de biblioteca NGS, o método de absorção ultravioleta e o método de corante fluorescente.

O método de absorção ultravioleta usa um espectrofotômetro para medir a absorbância a 260 nm para DNA e RNA para quantificação. Ele também estima a pureza dos ácidos nucleicos calculando a razão OD260/OD280. No entanto, os valores detectados são altamente suscetíveis à interferência de outros contaminantes, como nucleotídeos livres, sais e compostos orgânicos.

A quantificação fluorométrica Qubit utiliza corantes fluorescentes que se ligam especificamente a DNA fita dupla, DNA fita simples, RNA ou proteínas. Após excitação por uma fonte de luz de comprimento de onda específico, os corantes emitem fluorescência, que não é afetada por outras moléculas de impurezas que podem estar presentes na amostra. A intensidade da fluorescência é proporcional à concentração das moléculas alvo na amostra.

Tabela 1. Comparação dos principais métodos de quantificação de ácidos nucleicos

Alvo	UV ABS (Nanodrop)	Qubit DNA HS	Qubit DNA BR	RNA qubit	Qubit ssDNA
Tipo de ácido nucleico	ADN, ARN	dsDNA	dsDNA	ARN	ssDNA, oligo
Concentração da amostra（ng/μL）	2 ng/μL-15 μg/μL	10 pg/µL-100 ng/µL	0,1 ng/µL-1000 ng/µL	250 pg/µl-1000 ng/µl	50 pg/μL-200 ng/μL
Vantagem	Limite superior de quantificação	Boa especificidade	Ampla gama de quantificação	Altamente seletivo para RNA	Bem tolerado
Limitações	Pouca especificidade	Proteger da luz durante o uso	Proteger da luz durante o uso	Proteger da luz durante o uso	Baixa especificidade e também se liga ao dsDNA

A absorbância UV e a quantificação fluorométrica Qubit têm suas vantagens e podem se complementar. Para quantificação preliminar de amostras de ácido nucleico de rotina para determinar concentração, pureza e presença de contaminantes, o método de quantificação de absorbância pode ser escolhido. A quantificação de qubit é mais adequada para amostras preciosas de baixa concentração ou quantificação precisa necessária para experimentos posteriores, como sequenciamento de última geração e PCR quantitativa em tempo real.

Yeasen lançou vários produtos de quantificação Qubit: dsDNA HS Assay Kit para Qubit^® (Cat#12640), Pronto para uso: 1× dsDNA HS Assay Kit para Qubit^® (Cat#12642), Kit de ensaio ssDNA para Qubit^® (Cat#12645) e o kit de ensaio dsDNA BR (Cat#12643), que foram amplamente elogiados desde seu lançamento.

Solução 1 dsDNA HS Quantificação de Alta Sensibilidade

Pré-mistura de quantificação de dsDNA pronta para uso — 1× kit de ensaio dsDNA HS para Qubit^®

^{Fácil operação: pré-mistura pronta para uso, sem necessidade de pré-mistura;}

^{Alta sensibilidade: Concentração detectável tão baixa quanto 50 pg/μL;}

^{Boa estabilidade: o sinal de fluorescência dura 3 horas e o armazenamento em temperatura ambiente por 20 dias não afeta a precisão da quantificação;}

^{A. Excelente estabilidade: o armazenamento em temperatura ambiente por 2 semanas ainda mantém a estabilidade (o valor medido desvia do valor teórico em menos de 10%).}

Tabela 2. Teste de estabilidade de diferentes amostras a 4°C e temperatura ambiente em comparação com concorrentes

Reagentes quantitativos	Determinado concentração de λDNA (ng/μL)
	0d		1º dia		3D	7º dia			10 dias		14º dia
O* 4℃	0,51		0,496		0,524	0,534			0,495		0,499
Yeasen 4℃	0,51		0,508		0,513	0,475			0,48		0,495
Yeasen temperatura ambiente armazenar	0,51		0,517		0,506	0,486			0,506		0,523
Reagentes quantitativos	Determinado concentração de gDNA de bezerro (ng/μL)
	0d	1º dia		3D			7º dia	10 dias		14º dia
O* 4℃	55,3	53,5		55,40			57,9	55,8		58
Yeasen 4℃	59,4	55,4		57,8			56.1	56,3		59,8
Yeasen temperatura ambiente armazenar	59	55,7		61,3			58	58,7		56.1

B. Alta sensibilidade, boa estabilidade de lote para lote

Tabela 3.Teste de estabilidade de diferentes lotes

Bpegadinha	Amostra	eu*			Yeasen			erro
		concentração1（ng/μL）	concentração2（ng/μL）	MÉDIA (ng/μL)	concentração1（ng/μL）	concentração2（ng/μL）	MÉDIA (ng/μL)
D9801060	λDNA	0,3160	0,3250	0,3205	0,320	0,320	0,320	0,16%
D8801050		0,3310	0,3320	0,3315	0,319	0,306	0,3125	5,73%
D7813110		0,345	0,358	0,352	0,334	0,329	0,332	-6,03%

Solução 2 dsDNA BR Quantificação de Ampla Faixa

Quantificação de dsDNA de amplo alcance — Kit de ensaio dsDNA BR

Alta sensibilidade: Concentração detectável tão baixa quanto 50 pg/μL;

Excelente linearidade: Boa linearidade dentro da faixa de 2-1000 ng;

Forte tolerância a contaminantes: Pode tolerar contaminantes comuns.

Tabela 4. Estabilidade e tolerância a contaminantes em comparação com os concorrentes

Yeasen BR						O* BR
padrão	RFU1	RFU2	MÉDIA	erro		padrão	RFU1	RFU2	MÉDIA	erro
S1	159,63	160,71	160,17	1%		S1	216,17	211,56	213.865	-2%
S2	24497.0	25078,64	24787,82	2%		S2	20532,46	20452,26	20492.36	0%
mensuração						mensuração
Contaminante	Concentração em amostra de 10 μL	concentração1	concentração2	MÉDIA	Para ser testado/controlado	Contaminante	Concentração em amostra de 10 μL	concentração1	concentração2	MÉDIA	Para ser testado/controlado
Controle (H2O)	/	49	48,6	48,8	0,0%	Controle (H2O)	/	49,8	48	48,9	0,0%
BSA	1mg/ml	51,8	52	51,9	6,4%	BSA	1mg/ml	54	51,2	52,6	7,6%
Etanol	20%	44,6	44	44,3	-9,2%	Etanol	20%	44,8	43,4	44.1	-9,8%
clorofórmio	4,00%	49,0	49,8	49,4	1,2%	clorofórmio	4,00%	50,0	47	48,5	-0,8%
SDS	0,2%	46,6	45,8	46.2	-5,3%	SDS	0,2%	53,2	51,6	52,4	7,2%
Trition-X100	0,20%	41,6	40,6	41.1	-15,8%	Trition-X100	0.20%	53	51	52,0	6,3%
dNTPs	2mM	44.2	45	44,6	-8,6%	dNTPs	2mM	47,8	46,4	47.1	-3,7%

Solução 3 Quantificação de ssDNA

A escolha ideal para quantificação de ssDNA — Kit de ensaio de ssDNA de alto custo-benefício para Qubit^®

^{Alta sensibilidade: Concentração detectável tão baixa quanto 50 pg/μL;
Excelente linearidade: Boa linearidade dentro da faixa de 0-200 ng;
Sinal estável: Excelente corante combinado com tampão otimizado atualizado, pode manter intensidade de fluorescência estável em temperatura ambiente e é altamente aplicável mesmo em ambientes de poluição comuns, como sais, nucleotídeos livres, solventes, detergentes ou proteínas, garantindo quantificação precisa;
Boa estabilidade: Nenhuma alteração significativa no desempenho após 6 meses de tratamento a 4°C ou 25°C;
Ampla gama de aplicações: Processo de operação simples, permitindo quantificação rápida de oligonucleotídeos, primers, DNA desnaturado, DNA circular de fita simples, etc.}

A. Boa repetibilidade: Quantificação em diferentes instrumentos Qubit, diferentes tipos de amostras usando Yeasen vários lotes de Cat#12645 testados. Dentro da faixa de 0-200ng, boa repetibilidade em medições de diferentes instrumentos Qubit.