Wnt3a humano expresso nas células HEK293 exibe alta atividade promovendo o cultivo de organoides

Organoides são modelos tridimensionais criados in vitro que se assemelham muito a tecidos ou órgãos naturais, e eles têm significância significativa dentro dos reinos de modelagem de doenças, rejuvenescimento de órgãos e cuidados médicos individualizados. O cultivo desses organoides necessita do gerenciamento cuidadoso de uma gama diversificada de citocinas, com Wnt3a se destacando como um fator frequentemente empregado que assume um papel fundamental na nutrição de organoides derivados de uma ampla gama de tecidos.

O que é Wnt-3a?

Wnt-3a pertence à família Wnt, um grupo de proteínas secretadas que compreende 19 variantes humanas, incluindo Wnt1, Wnt2, Wnt2b (Wnt13), Wnt3, Wnt3a, Wnt4, Wnt5a, Wnt5b, Wnt6, Wnt7a, Wnt7b, Wnt8a, Wnt8b, Wnt9a (também conhecido como Wnt14), Wnt9b (Wnt14b), Wnt10a, Wnt10b, Wnt11 e Wnt16. Esta família é caracterizada por sua conservação e composição rica em cisteína. As proteínas Wnt facilitam a via de sinalização Wnt ligando-se a receptores de membrana celular ou receptores de membrana celular vizinhos. Esta via pode ser categorizada em via canônica, mediada pela β-catenina, que inclui Wnt1, Wnt2, Wnt2b, Wnt3, Wnt3a, Wnt7a, Wnt8, Wnt8b e Wnt10a, e a via não canônica, independente da β-catenina, que abrange Wnt4, Wnt5a, Wnt6 e Wnt11. Wnt3a, como o membro quintessencial da família Wnt, é distribuído ubiquamente e exerce um papel fundamental no governo de várias funções celulares, como autorrenovação, proliferação, diferenciação e motilidade.

Mecanismo de transdução da via de sinalização Wnt-3a

A via de sinalização Wnt é uma rede multifacetada de interações proteicas principalmente associadas ao desenvolvimento embrionário e ao câncer. No entanto, ela também desempenha um papel em processos fisiológicos normais em organismos adultos. Wnt3a se liga ao seu receptor, a proteína Frizzled (Fz), juntamente com a proteína relacionada ao receptor da lipoproteína correceptora (LRP5/6), ativando subsequentemente a proteína de andaime Disheveled (Dvl). Essa ativação leva à desmontagem do "complexo de destruição", que consiste em Caseína quinase 1 (CK1), glicogênio sintase quinase-3β (GSK-3β) e proteínas de andaime adenomatous polyposis coli (APC), Axin1 e Axin2. A dissolução desse complexo estabiliza a proteína β-catenina livre no citoplasma. A β-catenina acumulada no citoplasma então se transloca para o núcleo, onde se liga a fatores de transcrição da família TCF/LEF, ativando, em última análise, genes alvo a jusante, como c-myc e ciclina D1. Essa cascata induz respostas celulares subsequentes. Em resumo, a via de sinalização Wnt pode ser simplificada da seguinte forma: Wnt3a→FZD→DVL→dissolução do complexo→β-catenina entra no núcleo→TCF/LEF→transcrição do gene a jusante. Sem Wnt3a, a β-catenina é normalmente degradada no citoplasma pelo "complexo de destruição", que a direciona para ubiquitinação e degradação subsequente no proteassoma. Como resultado, ela não pode entrar no núcleo para iniciar a transcrição de genes a jusante. A via de sinalização Wnt/β-catenina é altamente conservada ao longo da evolução e desempenha um papel fundamental no desenvolvimento embrionário, crescimento celular, diferenciação, formação de polaridade, desenvolvimento neural e carcinogênese.

Wnt3a e Organoides

Wnt3a ocupa uma posição central como um dos fatores de cultura mais frequentemente empregados para geração de organoides. Sua alta atividade, consistência entre lotes, ausência de contaminação e preparação sem soro são fatores-chave que contribuem para o sucesso de experimentos de organoides.Wnt3a encontrou amplo uso em culturas organoides de vários tecidos, incluindo intestino, estômago, pâncreas, fígado, tireoide, esôfago e sistema nervoso. Em um esforço para auxiliar pesquisadores científicos e empresas farmacêuticas em seus estudos sobre a aplicação clínica de Wnt3a na formação de organoides e pesquisa de tumores, a YEASEN introduziu um produto de proteína Wnt3a altamente ativo (Catálogo: 92276ES) projetado para facilitar a cultura organoide.

Figura 3. Medido por sua capacidade de induzir atividade do repórter Topflash em células renais embrionárias humanas HEK293T. O ED50 para esse efeito é 25 ng/mL.

Validação de cultura organoide

Yeasen citocinas foram verificadas em organoides tumorais humanos, como câncer de pulmão, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de pâncreas e câncer intestinal, e organoides normais, como organoides do intestino delgado humano e de camundongo.

Citocinas relacionadas Informação