Com o rápido desenvolvimento da glicoproteômica e da pesquisa de medicamentos de anticorpos, a modificação da glicosilação também atraiu muita atenção. O contato entre células e células, e entre células e patógenos é concluído principalmente por meio da interação de açúcares e proteínas, e a glicosilação determina as propriedades de adesão dos glicoconjugados. Na IgG, a glicosilação conservada ligada a N em Asn297 na região Fc também é crucial para sua atividade. Além disso, alguns anticorpos também têm N-glicanos adicionais, que, juntamente com o sítio conservado em Asn297 na região Fc, afetam o reconhecimento, a meia-vida e a resposta imune do anticorpo.
A glicosilação de proteínas é uma modificação pós-traducional complexa que envolve a conexão de cadeias de glicano em locais específicos nas proteínas. Dependendo do tipo de cadeia de glicano, as glicoproteínas são divididas em glicoproteínas ligadas a N, glicoproteínas ligadas a O, etc.; além disso, a glicosilação de proteínas também é afetada pelo tipo de célula hospedeira e condições de fermentação (como meio de cultura, valor de pH, temperatura, etc.). Portanto, as glicoproteínas geralmente têm heterogeneidade nos padrões de glicosilação, incluindo locais de glicosilação, níveis de glicosilação e a estrutura específica das cadeias de glicano, tornando a análise da cadeia de glicano e o trabalho de caracterização estrutural extremamente desafiadores. Para obter a quantidade máxima de informações estruturais da cadeia de glicano, a principal estratégia da análise da cadeia de glicano é primeiro liberar as cadeias de glicano das proteínas e, em seguida, realizar análise e caracterização detalhadas. Nessa estratégia, um método de desglicosilação eficiente, preciso e estável é crucial.
Métodos enzimáticos são atualmente amplamente utilizados para desglicosilação. Para glicanos ligados a N, as enzimas comumente usadas incluem PNGase F, Endo H e Endo S.
Introdução ao produto
PNGase F é o método enzimático mais eficaz para remover quase todos os N-ligados oligossacarídeos em glicoproteínas, que podem clivar glicoproteínas oligossacarídicas complexas, híbridas e de alta manose conectadas por asparagina, removendo especificamente glicanos ligados a N. O sítio de clivagem é: a ligação amida entre a N-acetilglucosamina mais interna (GlcNAc) e o resíduo de asparagina, enquanto converte a asparagina na proteína após hidrólise enzimática em ácido aspártico.
Quando a α1-6 fucose está localizada no núcleo GlcNAc, a PNGase F também pode cortar; somente quando a α1-3 fucose está localizada no núcleo GlcNAc (comum em glicoproteínas de plantas e insetos), a PNGase F não pode cortar.
Nossa empresa oferece convencional PNGase F (Cat#20407ES)，No entanto, a reação enzimática PNGase F convencional requer várias horas para liberar N-glicanos de anticorpos e, devido à preferência pela liberação de glicanos, a desglicosilação incompleta pode levar a resultados tendenciosos, e a distribuição de glicanos obtida pode não representar a composição correta de anticorpos terapêuticos. Portanto, obter um perfil de N-glicano preciso o mais rápido possível é crucial para o monitoramento da glicosilação durante o processo de produção de anticorpos e proteínas de fusão de anticorpos e outros agentes bioterapêuticos.
PNGase F rápido (Cat#20406ES) é um reagente recombinante otimizado que pode desglicosilar anticorpos, imunoglobulinas, proteínas de fusão e outras glicoproteínas de forma rápida e completa em poucos minutos. Esta enzima pode remover rapidamente e sem preferência todos os N-glicanos e pode ser usada diretamente para análise de cromatografia downstream ou espectrometria de massa.
Características do produto:
Rápido: Desglicosilação completa e rápida em poucos minutos.
Alta Pureza: Sem contaminação por protease ou glicosidase, pureza ≥95%.
Não seletivo: Remova rapidamente e sem preferência todos os N-glicanos.
Boa compatibilidade: Usado diretamente para análise de cromatografia downstream ou espectrometria de massa.
Endo H é uma glicosidase recombinante que pode clivar a estrutura central da quitobiose de oligossacarídeos de alto teor de manose e alguns oligossacarídeos do tipo híbrido em N-glicoproteínas, removendo o alto teor de manose ligado a N das glicoproteínas.
Nossa empresa atualmente oferece Endo H recombinante expresso em levedura (Cat#20414ES).
Endo S é uma glicosidase altamente específica que pode clivar açúcares ligados a N entre as estruturas do núcleo de quitobiose de cadeias pesadas de IgG do tipo selvagem. A atividade da glicosidase S não é estritamente dependente do peptídeo, então X pode ser uma proteína, peptídeo, asparagina ou oligossacarídeo livre. A glicosidase S é ativa independentemente da presença de alfa1-6 fucose central ou N-acetilglucosamina bissectora no substrato. No entanto, é inativa contra oligossacarídeos que são sialilados e dessialilados tri- ou tetra-antenários.
Nossa empresa atualmente oferece Endo S recombinante expresso de E. coli (Cat#20413ES).
Guia de Compra
| Número do produto | 20406ES | 20407ES | 20414ES | 20413ES |
| Nome do produto | ||||
| Fonte | Expressão recombinante de levedura | Expressão recombinante de levedura | Expressão recombinante de levedura | E.coli expressão recombinante |
| Atividade Específica | Não aplicável | 100000U/mL | 1000000U/mL | 8000 U/mg |
| Local de clivagem | Quase todos os glicanos ligados a N | Quase todos os glicanos ligados a N | Glicanos de alta manose ligados a N | Cliva-se dentro da estrutura central do dissacarídeo da cadeia pesada da IgG |
| Tempo de digestão | 10 minutos | 1-3 horas | 1-3 horas | 1 hora |
| Glicosilação | Adequado | Adequado | Adequado | Adequado |
| Estrutura da proteína | Adequado | Adequado | Adequado | Adequado |
Dados de teste
1. PNGase F rápido Teste
1: Marcador de proteínaCat#20350ES) 2: Concorrente + substrato ou anticorpo 3: Concorrente + substrato ou anticorpo
4:
2. Teste Endo H
Figura 2. Endo H efeito de clivagem enzimática (substrato)
3.Teste Endo S
Informações do produto
| Nome do produto | Número do produto | Especificação |
| 20406ES20/50 | 20 toneladas/50 toneladas | |
| 20407ES01/02 | 15000 U /75000 U | |
| 20414ES92/97 | 10000 U /50000 U | |
| 20413ES80/90 | 1000 U/5 x 1000 U |