Cenários de aplicação do produto

1. Remoção de ácidos nucleicos residuais em produtos biológicos: Durante a produção de produtos biológicos, como vírus, vacinas e proteínas, a UltraNuclease pode ser adicionada para degradar ácidos nucleicos residuais. Esta etapa não só aumenta o rendimento de vírus, mas também reduz significativamente o conteúdo de ácidos nucleicos residuais, garantindo assim a segurança e a eficácia dos medicamentos.
2. Redução da viscosidade: Ao degradar ácidos nucleicos, a viscosidade dos lisados ​​celulares é reduzida, o que facilita os processos de filtração/ultrafiltração durante a purificação de partículas derivadas de células, como vírus, vetores AAV e corpos de inclusão.
3. Melhor resolução e recuperação: em análises de ELISA, eletroforese bidimensional e imunoblotting, melhora a resolução e a recuperação.
4. Prevenção da agregação celular: o UltraNuclease pode prevenir eficazmente a agregação de células mononucleares do sangue periférico humano (PBMCs).

Teste de desempenho do produto

O efeito do ambiente rico em sal na atividade enzimática (Na+)

Para corresponder ao uso do Salt Active UltraNuclease, a Yeasen também desenvolveu de forma independente um kit de detecção específico para UltraNuclease Ativo Salino, que pode detectar efetivamente resíduos de enzimas e reduzir riscos. O Salt Active UltraNuclease ELISA Kit foi desenvolvido e produzido de acordo com as diretrizes de validação do método analítico <9101> da Farmacopeia Chinesa de 2020, aderindo estritamente aos principais requisitos para testes multiparâmetros (faixa linear, especificidade, exatidão, precisão, sensibilidade, estabilidade acelerada, etc.).

Para este propósito, a Yeasen Biotech desenvolveu um kit ELISA para a detecção de UltraNuclease Ativa de Sal. O kit usa o princípio do ensaio imunoenzimático (ELISA) de sanduíche de anticorpo duplo para detectar a quantidade residual de UltraNuclease Ativa de Sal. As amostras padrão e de teste de UltraNuclease Ativa de Sal são adicionadas à placa revestida com enzima pré-revestida com anticorpo anti-UltraNuclease Ativa de Sal (36703-A). Em seguida, o anticorpo de detecção de nuclease marcado com biotina diluído (36703-C) é adicionado, seguido por Estreptavidina-HRP (SA-HRP) (36703-D). Isso forma um complexo anticorpo + antígeno + anticorpo-biotina + SA-HRP. Após a lavagem da placa, a solução de substrato TMB (36703-H) é adicionada para o desenvolvimento da cor. Sob a catálise da enzima HRP, o TMB muda de incolor para azul e finalmente fica amarelo sob a ação da solução de parada (36703-I). A intensidade da cor amarela é diretamente proporcional à quantidade de nuclease universal de alta tolerância ao sal detectada na amostra.

O processo experimental de detecção de UltraNuclease Ativa de Sal residual usando o Kit ELISA UltraNuclease Ativa de Sal.

Características do kit UltraNuclease e UltraNuclease ELISA com atividade salina:

Conformidade regulatória: Totalmente validado de acordo com os requisitos regulamentares, relatórios de validação estão disponíveis;

Garantia de qualidade: Todas as matérias-primas do kit são desenvolvidas de forma independente, garantindo qualidade controlável;

Alta sensibilidade: Limite quantitativo tão baixo quanto 23 pg/mL;

Alta precisão: Alta repetibilidade intralote e baixa variabilidade entre lotes;

Forte especificidade: Sem reatividade cruzada com outras proteínas celulares projetadas

Parâmetros de desempenho

Parâmetros do produto	contente
Tempo de ensaio	3,5 horas
Princípio do ensaio	Ensaio imunoenzimático de dois sítios
Amplificação de sinal	Sistema biotina-estreptavidina
Comprimento de onda de detecção	450 nm e 630 nm
Sensibilidade	0,024 ng/mL
Alcance de detecção	0.047 ng/mL~3 ng/mL
Objeto de detecção	UltraNuclease Ativo Salino
Instrumento aplicável	Dispositivos Moleculares: Séries M e i
Aplicativo	Detecção de Nuclease residual em processos de purificação de terapia celular e genética e vacinas de vírus adeno-associados recombinantes

Dados do produto:

Curva padrão do kit de reagentes:

Especificidade

A reatividade cruzada entre o anticorpo Salt Active UltraNuclease e as sete proteínas no kit foi avaliada usando este kit para detectar as proteínas adicionadas nos sete processos. Um controle positivo (PC-0,047 ng/mL) e um controle negativo (NC-0 ng/mL) foram configurados.

Os resultados mostraram que a proteína adicionada nos 7 processos apresentou-se próxima ao controle negativo (NC-0 ng/mL), a concentração de detecção foi inferior ao limite de quantificação deste kit (0,047 ng/mL) e não foi observada reação cruzada. observado.

STaxa de recuperação do lúcio:

Adicione três padrões de concentração (ou seja, Std1 3 ng/mL, Std3 0,75 ng/mL e Std5 0,188 ng/mL) em proporções iguais às duas amostras fornecidas pelo cliente para o experimento de recuperação de spike. Os resultados mostram que as taxas de recuperação de spike estão todas entre 80% e 120%. Taxa de recuperação de spike % = (valor medido da amostra com spike - valor medido da amostra sem spike) / valor teórico (quantidade de padrão adicionada) * 100%.

Nome da amostra	Concentração de teste de UltraNuclease Ativa de Sal (ng/mL)	Quantidade de padrão (ng/mL)	Resultado do teste (ng/mL)	Taxa de recuperação de pico (%)
TS1	0,04	3	1,71	114,00%
		0,75	0,347	92,53%
		0,188	0,085	90,43%
TS2	0,08	3	1.772	118,13%
		0,75	0,405	108,00%
		0,188	0,104	110,64%

Precisão

1) Repetibilidade

Três produtos padrão Salt Active UltraNuclease com alta, média e baixa concentração foram selecionados para experimentos repetidos. No mesmo experimento, as amostras de cada concentração foram testadas por 10 vezes, e CV%< 10%.

Diferença no lote
Concentração teórica (ng/mL)	Número de repetições	Média (ng/mL)	Coeficiente de variação CV (%)
1.5	10	1.444	2,97%
0,188	10	0,196	2,27%
0,047	10	0,051	2,56%

2) Precisão Intermediária

Diferentes lotes de kits foram usados ​​para 3 experimentos, cada experimento foi realizado com 3 concentrações de alta, média e baixa, e cada concentração foi repetida 10 vezes. Um total de 30 dados foram obtidos de cada ponto de concentração, e o CV% de cada concentração foi menor que 15%.

Diferença de lote
Concentração teórica (ng/mL)	Número de experimentos	Média (ng/mL)	Coeficiente de variação CV (%)
1.5	3	1.423	5,70%
0,188	3	0,212	5,59%
0,047	3	0,059	6,82%

Informações do produto

Nome do produto	Produto número	Especificações do produto
UltraNuclease ativo de sal de grau GMP	20159ES25/50/60/80/90	25 KU/50 KU/100 KU/1 MU/5 MU
Kit ELISA UltraNuclease ativo de sal	36703ES96	96T

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