Cenários de aplicação do produto

1. Remoção de ácidos nucleicos residuais em produtos biológicos: Durante a produção de produtos biológicos, como vírus, vacinas e proteínas, a UltraNuclease pode ser adicionada para degradar ácidos nucleicos residuais. Esta etapa não só aumenta o rendimento de vírus, mas também reduz significativamente o conteúdo de ácidos nucleicos residuais, garantindo assim a segurança e eficácia dos medicamentos.
2. Redução da viscosidade: Ao degradar ácidos nucleicos, a viscosidade dos lisados ​​celulares é reduzida, o que facilita os processos de filtração/ultrafiltração durante a purificação de partículas derivadas de células, como vírus, vetores AAV e corpos de inclusão.
3. Melhor resolução e recuperação: em análises de ELISA, eletroforese bidimensional e imunoblotting, melhora a resolução e a recuperação.
4. Prevenção da agregação celular: o UltraNuclease pode prevenir eficazmente a agregação de células mononucleares do sangue periférico humano (PBMCs).

O efeito de diferentes condições de reação na atividade enzimática

Para explorar as condições operacionais ideais para a UltraNuclease, estudamos os efeitos de vários sistemas de tamponamento na atividade enzimática.

Análise comparativa de produtos concorrentes (de uma empresa)

O desempenho do UltraNuclease é consistente com o da Empresa A e pode atingir um efeito de substituição.

O padrão de inspeção de qualidade está em conformidade com o padrão de produção GMP

Itens de detecção	Padrões de qualidade	Método de detecção
Atividade enzimática	250-300 U/uL	Método de substrato universal
Atividade específica	≥1.5×106 U/mg	Método de substrato universal
Pureza da proteína	≥99%	PÁGINA SDS
Protease	Atende aos requisitos	Método de substrato universal
Endotoxina bacteriana	Atende aos requisitos	Método do gel
Proteína hospedeira	Negativo	Método ELISA
DNA hospedeiro	Negativo	método qPCR
Teste estéril	Crescimento estéril	Regra Geral 1101
Detecção de patógenos	Negativo (não detectado)	Consulte o método interno
Teste de micoplasma	Negativo (não detectado)	Consulte o método interno
Teste de metais pesados	Atende aos requisitos	Regra Geral 0821

Para corresponder ao uso do UltraNuclease, a Yeasen também desenvolveu de forma independente um kit de detecção específico para o UltraNuclease, que pode detectar enzimas residuais de forma eficaz e reduzir riscos. O Kit de Detecção Residual UltraNuclease da Yeasen foi desenvolvido em referência às Diretrizes de Validação de Método Analítico da Farmacopeia Chinesa <9101> de 2020 e segue rigorosamente os principais requisitos para testes multiparâmetros (faixa linear, especificidade, exatidão, precisão, sensibilidade, estabilidade acelerada, etc.).

Detecção de UltraNuclease Residual

Em etapas normais de purificação, a UltraNuclease é facilmente removida como impurezas. Para detectar a quantidade residual específica da UltraNuclease onipotente, ela é frequentemente usada como um produto padrão na indústria e um kit ELISA correspondente é desenvolvido.

O UCF.ME® UltraNuclease O kit ELISA desenvolvido independentemente pela Yeasen adota o princípio do imunoensaio enzimático sanduíche de anticorpo duplo (ELISA sanduíche), que pode detectar com precisão a quantidade residual de UltraNuclease em amostras. O kit é estável em linearidade, repetibilidade, taxa de recuperação e especificidade.

Princípio do kit Yeasen UltraNuclease ELISA (ensaio imunoenzimático de dois locais)

Características do produto:

Conformidade regulatória: Totalmente validado de acordo com os requisitos regulatórios, relatórios de validação estão disponíveis; Garantia de qualidade: Todas as matérias-primas para o kit são desenvolvidas de forma independente, garantindo o controle de qualidade;

Alta sensibilidade: limite quantitativo tão baixo quanto 23.5 pg/mL;

Alta precisão: alta repetibilidade intralote e baixa variabilidade entre lotes;

Forte especificidade: sem reatividade cruzada com outras proteínas celulares projetadas

Parâmetros de desempenho:

Parâmetros do produto	contente
Tempo de ensaio	3,5 horas
Princípio do ensaio	Ensaio imunoenzimático de dois sítios
Amplificação de sinal	Sistema biotina-estreptavidina
Comprimento de onda de detecção	450 nm e 630 nm
Sensibilidade	23,5 pg/mL
Alcance de detecção	0,047~3 ng/mL
Objeto de detecção	UltraNuclease
Instrumento aplicável	Dispositivos Moleculares: Séries M e i
Aplicativo	Detecção de UltraNuclease residual em processos de purificação de terapia celular e genética e vacinas de vírus adeno-associados recombinantes

Dados do produto:

Curva padrão do kit de reagentes:

Experimento de recuperação de amostra real:

UltraNuclease foi adicionado em soluções de lise celular de 5 μg/mL (HEK293, E. coli, CHO e Vero) independentemente com uma concentração final adicionada de 1,5 ng/mL. A precisão em diferentes amostras de células mostrou-se excelente do que a de outros fornecedores.

Demonstração de especificidade

Conclusão: O kit de teste tem alta especificidade sem reação cruzada; comparações pareadas, “*” Diferença significativa da amostra negativa; “NS” Nenhuma diferença significativa em relação à amostra negativa.

Precisão:

Repetibilidade:

Concentração ng/mL	6 datas duplicadas na mesma placa						Valor CV
3	2.412	2.390	2.323	2.367	2.476	2.291	2,53%
1.5	1.780	1.883	1.884	1.908	1.876	1.883	2,19%
0,75	1.123	1.215	1.166	1.183	1.140	1.109	3,12%
0,375	0,691	0,706	0,708	0,722	0.722	0,679	2,21%
0,1875	0,449	0,462	0,453	0,460	0,447	0,433	2,13%
0,094	0,306	0,308	0,304	0,311	0,295	0,302	1,65%
0,047	0,242	0,241	0,240	0,241	0,256	0,240	2,37%
0	0,183	0,192	0,189	0,187	0,189	0,189	1,43%

Conclusão: Foram testadas 6 duplicatas em cada concentração na curva padrão, e todos os CV% foram menores que 5%.

Precisão intermediária:

Precisão intermediária
Concentração da amostra	1,5 ng/mL	0,375 ng/mL	0,094 ng/mL
Analista 1	1.388	0,382	0,079
Analista 2	1.458	0,363	0,068
Analista 3	1.318	0,37	0,063
Média	1.388	0,372	0,07
DP	0,070	0,010	0,008
Valor CV	5,04%	2,59%	11,69%

3 analistas conduzem o experimento UCF.ME™ UltraNuclease ELISA e o CV% foi menor que 15%

Informações do produto:

Nome do produto	Produto número	Especificações do produto
UCF.ME®UltraNuclease grau GMP (Benzonase)	20157ES25/50/60/80/90	25 KU/50 KU/100 KU/1 MU/5 MU
Universidade Federal do Rio de Janeiro.Kit ME® UltraNuclease ELISA	36701ES59	96T

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