UCF.ME™ UltraNuclease, alternativamente conhecida como nuclease totipotente, nuclease de amplo espectro e endonuclease inibitória não limitante, originou-se de Serratia Marcescen, mas foi posteriormente reprojetada e produzida pela equipe de Pesquisa e Desenvolvimento da
1. O que é nuclease totipotente?
2. Quais são os cenários de uso da nuclease totipotente?
3. Quais são as vantagens que a nuclease totipotente precisa ter?
4. Perguntas frequentes
5. Produtos relacionados
1. O que é nuclease totipotente?
As nucleases totipotentes são endonucleases geneticamente modificadas com a capacidade de degradar uma ampla gama de formas de ácido nucleico, abrangendo ácidos nucleicos de fita simples, fita dupla, lineares, nativos e desnaturados. Elas geram oligonucleotídeos 5'-monofosfato com comprimentos variando de 3 a 5 bases e não exibem reconhecimento de base específico. Essas nucleases versáteis exibem estabilidade robusta e atividade de digestão em várias condições, tornando-as altamente eficientes para eliminar resíduos de ácido nucleico em amostras ou produtos. Isso aumenta a pureza da amostra e a eficácia biológica dos produtos, tornando as nucleases totipotentes a preparação enzimática preferida para pesquisa científica, vacinas e indústrias como produtos farmacêuticos de proteínas e polissacarídeos.
Além disso, as nucleases totipotentes desempenham um papel crucial na remoção de ácidos nucleicos durante a preparação de vacinas, anticorpos, terapia celular e outros produtos biológicos, garantindo a conformidade com os regulamentos da FDA estipulando que o ácido nucleico residual no produto final para uso terapêutico não deve exceder 10 pg/dose. Ao degradar os ácidos nucleicos, as nucleases totipotentes reduzem a viscosidade dos lisados celulares, facilitando o processo de filtração/ultrafiltração da solução durante a purificação de partículas derivadas de células, como vírus, vetores AAV e corpos de inclusão. Isso agiliza o processamento, melhora a centrifugação, aumenta a eficiência de separação da precipitação e do sobrenadante e aumenta a eficácia da purificação cromatográfica, aumentando, em última análise, o rendimento e a pureza do produto.
2. Quais são os cenários de uso da nuclease totipotente?
O UltraNuclease tem uma ampla gama de aplicações e aqui estão os cenários de uso específicos.
2.1 Purificação de vírus (lentivírus, AAV, vacina de adenovírus recombinante, vírus inativado, vírus oncolítico, etc.)
A utilização de vírus no setor biomédico está se expandindo significativamente, abrangendo aplicações como vacinas, terapia celular, terapia genética e vários outros campos. As células hospedeiras responsáveis pela produção de vírus são predominantemente células de passagem contínua (CCLs). As CCLs exibem uma predisposição genética para crescimento desregulado, concedendo a elas a capacidade de proliferar indefinidamente. No entanto, a presença de DNA residual de CCLs pode representar riscos potenciais, como proliferação descontrolada de células humanas, levando à formação de tumores. Além disso, esses fragmentos de DNA residual podem conter genomas virais infecciosos, levantando preocupações sobre o risco de infecção juntamente com a tumorigênese. Consequentemente, medidas de controle rigorosas são essenciais para gerenciar o DNA residual em produtos biológicos, garantindo sua segurança. A esse respeito, nossa UCF.ME™ UltraNuclease oferece uma solução segura para purificação de vírus.
O sal desempenha um papel fundamental na mitigação da agregação de proteínas ou vírus, facilitando a separação de DNA e RNA de proteínas e outros componentes celulares. A UltraNuclease Ativa de Sal, sendo uma endonuclease não específica, exibe atividade ótima em altas concentrações de sal. Em condições de alto teor de sal, as enzimas ganham acesso aprimorado ao DNA e RNA liberados, aumentando sua degradação. Nucleases com atividade aumentada em ambientes de alto teor de sal se mostram mais eficazes em melhorar os processos de purificação. A UltraNuclease Ativa de Sal pode ser empregada para reduzir a viscosidade em sobrenadantes e lisados celulares, aumentando a eficiência da purificação em condições de alto teor de sal. Esta enzima também reduz os resíduos de ácido nucleico do hospedeiro ao nível de picograma, aumentando assim o desempenho e a segurança de várias aplicações de produtos biológicos, incluindo purificação de vírus, fabricação de vacinas e a produção de produtos farmacêuticos de proteínas e polissacarídeos.
2.2 Purificação da proteína recombinante expressa em E. coli
Certas proteínas expressas em E. coli têm uma tendência a se agregar em corpos de inclusão, complicando o processo de purificação, pois muitas vezes se entrelaçam com o DNA do hospedeiro. As células bacterianas rompidas resultantes podem exibir alta viscosidade, diminuindo significativamente a eficiência da purificação de proteínas. No entanto, ao introduzir 10-50 U/mL de UCF.ME™UltraNuclease na solução bacteriana durante a ruptura ultrassônica e incubar a amostra a 37 °C por 30 minutos ou 4 °C durante a noite após a conclusão da ruptura, a viscosidade na solução bacteriana pode ser efetivamente reduzida. Isso, por sua vez, aumenta substancialmente a eficiência do processo de purificação. Em resumo, você pode contar com nossa UCF.ME™ UltraNuclease para facilitar a purificação eficaz da proteína.
2.3 Prevenir aglomeração de células
Nos últimos anos, o uso de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) criopreservadas em imunoensaios aumentou drasticamente. A maior característica das células PBMC é que elas são muito fáceis de aglomerar após a ressuscitação, o que pode facilmente levar à baixa qualidade das células e a resultados de testes não confiáveis. Quando as células são ressuscitadas, a concentração apropriada (25-50 U/mL) de UCF.ME™UltraNuclease é adicionada ao meio de cultura e as células são co-cultivadas, o que pode efetivamente prevenir a aglomeração de células. Portanto, você pode aproveitar ao máximo nossa UCF.ME™ UltraNuclease para aumentar as chances de um resultado bem-sucedido.
3. Quais são as vantagens que a nuclease totipotente precisa ter?
3.1 Ampla gama de aplicações
O UCF.ME™ UltraNuclease pode cortar e degradar várias formas de DNA e RNA sob uma variedade de condições experimentais e pode ser aplicado para remover ácido nucleico residual em vários produtos biológicos.
3.2 Alta pureza, alta atividade enzimática
Para nossa UCF.ME™ UltraNuclease, sua pureza enzimática é maior ou igual a 99% (HPLC) e sua atividade enzimática é maior ou igual a 1,5*106 U/mg (usando um método quantitativo absoluto para substrato geral).
3.3 Forte adaptabilidade
UCF.ME™ UltraNuclease tem alta estabilidade em armazenamento e congelamento-degelo. Armazenamos UCF.ME™ UltraNuclease a -20 °C, 4 °C e 37 °C para detectar a tendência da atividade enzimática. Quando colocado a 37 °C por 2 semanas, não houve alteração significativa na atividade enzimática.Enquanto isso, para garantir a estabilidade da enzima, usamos uma combinação de gelo seco + bolsa de gelo para transporte UCF.ME™ UltraNuclease para o seu lugar. Ele também tem forte tolerância e pode se adaptar a uma variedade de condições operacionais.
3.4 Cumprir a Farmacopeia
UCF.ME™ UltraNuclease é fabricado na UCF.ME (Ultra Clean Factory. Molecular Enzyme) é um tipo de enzima ultralimpa. O que é uma enzima ultralimpa? É uma enzima molecular que atinge padrões de qualidade de nenhum HCD、HCR、HCP, DNASE FREE、RNASE FREE, nenhum resíduo de protease, nenhum resíduo microbiano, nenhum patógeno, origem animal, poluição antibiótica, resíduo de endotoxina ultrabaixo, alta atividade enzimática e alta pureza, etc. Portanto, você pode confiar em nossos produtos, com segurança e confiabilidade.
3.5 Produção GMP
Todo o processo de produção do UltraNuclease é concluído na oficina de produção GMP, e o plano de inspeção de qualidade é estritamente pelo farmacopeia método, atendendo à demanda em larga escala, desde pesquisa e desenvolvimento até produção.
UCF.ME™ Parceiro da UltraNuclease —— Kit ELISA UltraNuclease
Em etapas normais de purificação, UCF.ME™ UltraNuclease é facilmente removido como uma impureza. Para detectar o resíduo de UCF.ME™ UltraNuclease, a YEASEN desenvolveu o kit de suporte UltraNuclease ELISA, que pode detectar com precisão o resíduo de UCF.ME™ UltraNuclease na amostra. O kit tem excelente linearidade, repetibilidade, taxa de recuperação e especificidade.
UltraNuclease Kit ELISA
O intervalo linear está entre 0,047 e 3 ng/mL, e R2 é maior que 0,99. Com boa reprodutibilidade entre lotes, adicionamos uma concentração fixa de UltraNuclease à amostra e usamos 3 lotes diferentes de kits ELISA para detecção. A taxa de recuperação de detecção está entre 70% e 110% quando a concentração de nuclease está entre 3 e 0,186 ng/mL, e CV é menor que 10%. Além disso, as taxas de recuperação de amostra simulada de UltraNuclease com diferentes concentrações estão todas entre 70% e 130% e são melhores do que outras marcas. Também tem forte especificidade que avaliamos a ligação não específica do anticorpo UltraNuclease a 8 amostras comuns. Os resultados do grupo de interferência e do grupo de controle se sobrepuseram, e nenhuma interferência foi vista.
Após o depósito de DMF da UltraNuclease, a YEASEN obteve DMFs de ultranuclease ativa de sal da FDA dos EUA.
O número do processo é:
| Número | Nome do produto | Número de arquivamento |
| 1 | UltraNuclease | MF037298 |
| 2 | UltraNuclease Ativo Salino | MF037815 |
4. Perguntas frequentes
P1: Em qual etapa adicionar o UltraNuclease?
R: Depende das amostras com as quais você está lidando. Na purificação de vírus, geralmente é adicionado após a clarificação do vírus; na purificação de proteína de E. coli, pode ser adicionado quando as células são lisadas; ao lidar com aglomeração de células, pode ser adicionado diretamente ao meio para co-cultivo com células.
Q2: Se a temperatura da reação não puder atingir 37°C, como utilizá-la?
UM: A atividade enzimática do UltraNuclease é afetada pela temperatura, tempo de tratamento e unidades de atividade enzimática. Se a temperatura não puder atingir 37°C, a quantidade de enzima pode ser adicionada apropriadamente, ou o tempo de incubação pode ser estendido.
Q3: O UltraNuclease é compatível com inibidores de protease?
UM: Compatível, mas esteja ciente de que muitos inibidores de protease contêm EDTA. Quando o EDTA começa a ser maior que 1 mM, o EDTA inibirá a atividade de algumas nucleases.
T4: Como remover o UltraNuclease?
UM: Ele pode ser removido por métodos como TFF, diálise e colunas cromatográficas.
Q5: O kit UltraNuclease ELISA pode ser usado para a detecção de outras marcas de resíduos de nucleases totipotentes?
UM: Não recomendamos fazer isso. O kit ELISA é completamente desenvolvido com base no UltraNuclease e pode quantificar o UltraNuclease com precisão. Nucleases altipotentes de outras marcas podem ser diferentes do UltraNuclease em termos de sequência e processo de produção, e os resultados do teste podem ser imprecisos.
5. Produtos relacionados
Os produtos fornecidos pela
Tabela 1 Produtos relacionados
| Nome do produto | SKU | Especificações |
| 20157ES25/60/80/90 | 25 KU/100 KU/1 MU/5 MU | |
| 20159ES25/60/80/90 | 25 KU/100 KU/1 MU/5 MU | |
| 36701ES59 | 96T | |
| Sal Ativo Kit ELISA UltraNuclease | 36703ES96 | 96T |