Descrição
Hifair™ Kit de sonda RT-qPCR multiplex de uma etapa (UDG Mais) é um kit multiplex de PCR quantitativo baseado em RNA como molde. No processo do experimento, a transcrição reversa e a PCR quantitativa foram realizadas no mesmo tubo, o que simplificou a operação experimental e reduziu o risco de contaminação.
Neste kit, a primeira fita de cDNA foi sintetizada eficientemente pelo Hifair resistente ao calorTM V Transcriptase reversa e amplificada quantitativamente por UNICON™ HotStart Taq DNA Polymerase. O kit contém principalmente tampão MP otimizado, mistura de enzimas, etc. A solução tampão já contém Mg2+ e dNTP. Além disso, os fatores que podem efetivamente inibir a amplificação de PCR não específica e melhorar a eficiência de amplificação de múltiplas reações de qPCR são adicionados, o que pode garantir a eficiência de amplificação e realizar até múltiplas reações de amplificação. O sistema dUTP/UDG foi adicionado para efetivamente prevenir o risco de contaminação por aerossol.
Características
1. Ggrande versatilidade: É adequado para amplificação de qPCR e detecção de ácidos nucleicos de microrganismos patogênicos, genomas humanos, plantas e outras espécies.
2. Alta sensibilidade: O sistema de buffer cuidadosamente otimizado melhora a sensibilidade de detecção de modelos de baixa concentração de até 250 cópias/mL.
3. Sistema dUP/UDG: O sistema antipoluição dUTP/UDG termolábil é introduzido para degradar a poluição por aerossol de produtos de forma eficiente, reduzir falsos positivos e garantir resultados autênticos.
4. Apoiaring programa rápido: compatível com programa rápido de 40 min.
5. Super estabilidade: estávele a 37℃ por 14 dias, congelamento e descongelamento repetidos 10 vezes.
Componentes
| Componentes | Nome | 16630ES60 (100 toneladas) | 16630ES80 (1000 toneladas) | 16630ES92 (10000 toneladas) |
| 16630-A | 5×Hifair MP Buffer | 500 μL | 5 mL | 50 mL |
| 16630-B | Enzima Hifair Mistura | 100 μL | 1 mL | 10 mL |
| 16630-C | GC-Melhorador | 500 μL | 5 mL | 50 mL |
Observação: 1) 5×HifairTM Tampão MP é a abreviação de HifairTM Tampão de sonda RT-qPCR multiplex de uma etapa V, que inclui dNTPs, dUTP, Mg2+, estabilizadores, intensificadores e muito mais.
2) Mistura de enzimas Hifair contém principalmente Hifair resistente ao calorTM V transcriptase reversa, UNICONTM Polímeros de DNA HotStart Taq e UDGase.
3) O GC enhancer é opcional. Por favor, encontre a versão gratuita do GC enhancer: Gato: 16901ES.
4) O 16630-A e 16630-B são equivalentes ao 16901-A e 16901-B, respectivamente.
Especificações
| Método PCR | RT-qPCR em uma etapa |
| Tipo de amostra | ARN |
Armazenar
Eele produto deve ser armazenado no -25°C~-15°C para 1 ano.
Figuras
Figura 1. Alta taxa de detecção
Instruções
1. Reação Composição
| Componentes | Volume (μL) | Concentração Final |
| 5×Hifair™ Tampão MP | 5 | 1 × |
| Mistura de enzimas Hifair | 1 | - |
| GC-Melhorador | 0-5 | - |
| Mistura de primer (10 μM) | 0,4 cada | 0,16 μM |
| Mistura de sonda (10 μM) | 0,2 cada | 0,08 μM |
| ARN | 1-5 | - |
| RNase Livre H2O | para 25 | - |
Observação：Misture bem antes de usar, evite bolhas excessivas causadas por vibração violenta.
a) Concentração do primer: Cartilha mistura incluindo primer multiplex, dependendo da situação, a concentração ideal do primer pode estar entre 0,1 e 1,0 μM.
b) Concentração da sonda: mistura de sondas incluindo diferença de marcação de sonda multiplex grupo fluorescente, dependendo da situação a concentração ótima da sonda pode estar entre 0,05 e 0.5 μM.
c) Diluição do template: qPCR é altamente sensível e é recomendado diluir o template. O valor de Ct de controle é adequado entre 20 e 35.
e) Preparação do sistema: cabeça un com elemento filtrante. Evite contaminação cruzada e contaminação por aerossol.
2. Protocolo de Ciclismo Otimizado
| Estágio de reação | Temperatura | Tempo | Ciclo | |
| 1 | Transcrição reversa | 50°Cum | 15 mínimo | 1 |
| 2 | Desnaturação inicial | 95°C | 5 minutos | 1 |
| 3 | Reação de amplificação | 95°C | 15 segundos | 45 ciclos |
| 60°Cb | 30 segundosc |
Observação：a) Rtranscrição reversa: A temperatura pode selecionar 42°C ou 50°C por 10-15 minutos.
b) Reação de amplificação: A temperatura é ajustada de acordo com o valor de Tm dos primers projetados.
c) Aquisição de sinal de fluorescência: Defina o procedimento experimental de acordo com os requisitos do manual do instrumento.
Pagamento e segurança
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Investigação
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Perguntas frequentes
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