Африканская чума свиней (АЧС) — острое, тяжелое и высококонтагиозное инфекционное заболевание, вызываемое вирусом африканской чумы свиней (АЧС), поражающим домашних свиней или диких кабанов. Его заболеваемость и смертность могут достигать 100%, что серьезно угрожает мировому свиноводству и приводит к неисчислимым экономическим потерям. Всемирная организация здравоохранения животных (МЭБ) относит его к подлежащим регистрации болезням животных.

В настоящее время не существует вакцины или эффективного лечения африканской чумы свиней. Быстрая и точная диагностика африканской чумы свиней с помощью лабораторных методов диагностики имеет решающее значение для предотвращения распространения заболевания. qPCR как основной инструмент для рутинной диагностики АЧС рекомендован OIE.

Yeasen — производитель с богатым опытом в области исследований и разработок сырья для диагностики in vitro. В условиях африканской чумы свиней компания Yeasen реагирует позитивно и сотрудничает с клиентами, чтобы разработать три комплексных технологических решения от экстракции до обнаружения вируса африканской чумы свиней. Так что же это за три решения? И каковы области применения этих решений? Продолжаем читать...

Рисунок 1. Решения Yeasen по обнаружению африканской чумы свиней

Решение I: TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)（расследование）

Характеристики продукта

👍Система защиты от загрязнения UDG, эффективно предотвращающая риск аэрозольного загрязнения

👍Долгосрочная стабильность предварительно смешанного раствора ПЦР (мастер-микс + праймеры + зонды) при комнатной температуре, что значительно упрощает задачу обнаружения

👍Высокая эффективность амплификации и хорошая повторяемость

👍Подходит для многоплатформенных и многосистемных приложений

Кейс Шоу

👉Долгосрочная стабильность предварительно приготовленного раствора для ПЦР
Cat#13171 использовался для настройки предварительно смешанного раствора ПЦР, который можно поместить при 37°C на 7 дней, и повторного замораживания и оттаивания 15 раз при амплификации плазмидной системы ASF. Результаты показали, что значение Ct и чувствительность раствора ПЦР существенно не изменились после помещения на 7 дней при 37℃, а значение Ct существенно не изменилось после повторного замораживания и оттаивания 15 раз.

Рисунок 2. Cat#13171 TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)(Запросить) используется в предварительно смешанном растворе ПЦР с долгосрочной стабильностью при амплификации плазмидной системы АЧС. 2A-Значение Ct при 37℃ в течение 0 дней и 7 дней 2B-Чувствительность при 37℃ в течение 0 дней и 7 дней 2C-Стабильность после замораживания-оттаивания 15 раз

👉Стабильные и воспроизводимые реагенты
Четыре различных партии Cat#13171 были выбраны для повторения эксперимента по амплификации плазмидной системы ASFV 20 раз. Не было выявлено существенных различий в значениях Ct, с CV менее 1%.

Рисунок 3.Тест на повторяемость Yeasen Cat#13171

👉Многоплатформенность, многосистемность, применимость
Yeasen Cat#13171 использовался для амплификации двойных плазмид африканской чумы свиней ASFV/ACT на платформах Bio-Rad CFX96, ABI Q5 и Slan соответственно. Видно, что Yeasen Cat#13171 подходит для различных типов инструментов, а данные надежны и стабильны.

Рисунок 4. Система ПЦР в реальном времени Bio-Rad CFX96

Рисунок 5. Система ПЦР в реальном времени ABI Q5

Рисунок 6. Система ПЦР в реальном времени Slan

Решение 2:Универсальная мультиплексная мастер-смесь TaqMan qPCR

Универсальная мультиплексная ПЦР-мастер-смесь TaqMan Yeasen (Cat#11211) глубоко оптимизирована для эффективной амплификации низкоконцентрированных шаблонов с использованием модифицированной антителами ДНК-полимеразы Hot-Start Taq и соответствующего мультиплексного буфера. Этот продукт поддерживает до 4-плексных ПЦР-реакций в одной пробирке и идеально подходит для генотипирования и мультиплексного ПЦР-анализа.

Характеристики продукта

👍Высокая устойчивость к примесям крови, может использоваться с реагентом для экстракции нуклеиновых кислот Yeasen, кат. № 13720, реагент для высвобождения нуклеиновых кислот V2, идеально подходит для прямой ПЦР в количественном отношении
👍Сверхвысокая чувствительность к 3 копиям/реакцию, значительно повышает точность обнаружения
👍Долгосрочная стабильность предварительно смешанного раствора ПЦР (мастер-микс + праймеры + зонды) при комнатной температуре, что значительно упрощает задачу обнаружения

Кейс Шоу

👉Высокая толерантность к примесям крови
По сравнению с аналогичными продуктами других марок, Yeasen Cat#11211 имеет более высокую толерантность к ингибиторам в образцах крови. Результаты показали, что Yeasen Cat#11211 имеет высокую толерантность к ЭДТА и цитрату натрия и может выдерживать 0,5% цельной крови.

Рисунок 7. Cat#11211 Универсальная мультиплексная основная смесь TaqMan qPCR и мастер-миксы различных марок используются для растворов КПЦР для АЧС с добавлением 3 мМ ЭДТА (3A), 6 мМ цитрата натрия (3B), 0,5% крови (3C) соответственно.

👉Сверхвысокая чувствительность до 3 копий/реакцию

Амплификация плазмиды вируса АЧС с 20 репликациями была проведена на основе продуктов разных марок. Результаты экспериментов показывают, что уровень обнаружения продуктов Yeasen выше.

Рисунок 8. Сравнение показателей обнаружения среди аналогичных продуктов разных марок (3 копии в итоговой системе)

👉Долгосрочная стабильность, стабилен в течение 7 дней при комнатной температуре

Раствор ПЦР системы двойной плазмиды ASFV/ACT может сохранять стабильную производительность после 7 дней при 4℃, 25℃ и 37℃. Видно, что значение Ct и значение флуоресценции существенно не изменились.

Рисунок 9. Стабильность раствора ПЦР

Решение III: Изотермическое усиление

Продукция Yeasen поддерживает технологию изотермической амплификации, которая помогает быстрее и эффективнее выявлять АЧС. Кат. № 14402 ДНК-полимераза Hieff™ Bst Plus (40 ед./мкл) получен из ДНК-полимеразы I Thermophilic Geobacillus sp, лишенной 5'-3' экзонуклеазной активности. Этот продукт обладает более сильной 5'-3' ДНК-полимеразной активностью, активностью смещения цепи и толерантностью к dUTP, что больше подходит для изотермических реакций амплификации, препятствующих загрязнению, таких как LAMP, CPA и т. д.

Характеристики продукта

👍Высокая эффективность усиления

👍Высокопроизводительная амплификация

👍толерантность к dUTP, может использоваться в сочетании с кат. № 10303 урацил-ДНК-гликозилазой (UDG/UNG)(Запросить), термолабильный, 1 ед./мкл для предотвращения риска аэрозольного загрязнения

Кейс Шоу

👉Превосходная альтернатива импортной продукции марки N*

Процесс амплификации был выполнен с использованием ДНК-полимеразы Bst от Yeasen и N* Company соответственно. Не было никакой значительной разницы в значении Ct и интенсивности флуоресценции между различными брендами.

Рисунок 10. Кривые амплификации разных марок

Заказ продукции