В последние годы глобальная заболеваемость инфекционными заболеваниями растет, а патогены становятся все более разнообразными и сложными. Значительной проблемой в этом сценарии является то, что примерно половина пациентов сталкивается с затруднительным положением, имея неизвестные патогены, что делает быструю диагностику этих патогенов сложной задачей. В настоящее время клиническое обнаружение патогенов в основном опирается на традиционные методы культивирования, методы ПЦР, метагеномное секвенирование (mNGS) и патоген-таргетное секвенирование (tNGS).
Флуоресцентная количественная ПЦР в реальном времени приобрела известность в обнаружении нуклеиновых кислот SARS-CoV-2. Аналогичным образом, mNGS привлекла внимание своим вкладом в борьбу с SARS-CoV-2 и перешла из клинических условий в повседневное использование. tNGS, предлагая преимущества как ПЦР, так и NGS, такие как скорость, точность и экономическая эффективность в услугах секвенирования, приобретает все большую популярность в области клинических испытаний.
Одновременно применение биологических продуктов расширилось в биомедицине, биологическом сельском хозяйстве, биоэнергетике, биологическом производстве, защите окружающей среды и других областях. Поскольку доля рынка биологических продуктов продолжает расти, государственные органы и соответствующие органы власти создали стандартизированные системы управления качеством и стандарты для этих продуктов. Особое внимание уделяется наличию остатков нуклеиновых кислот из клеток-хозяев в биологических продуктах.
Биологические продукты, такие как рекомбинантные белковые препараты, антитела, вакцины, а также клеточная и генная терапия, производятся с использованием последовательных штаммов или клеточных линий, что потенциально приводит к сохранению нуклеиновых кислот хозяина в конечных продуктах. Остаточные нуклеиновые кислоты хозяина могут иметь неблагоприятные последствия, такие как неконтролируемая пролиферация клеток, приводящая к образованию опухолей или обострению иммунных реакций путем внедрения вирусных генов. Следовательно, эффективное удаление остатков нуклеиновых кислот и строгое обнаружение остатков имеют решающее значение для обеспечения безопасности биологических продуктов и соответствия требованиям исследований. В отрасли методы qPCR/RT-qPCR широко используются для разработки наборов для обнаружения остатков нуклеиновых кислот хозяина в биологических продуктах.
Кроме того, коммерческие молекулярные ферменты обычно экспрессируются с использованием рекомбинантных инженерных штаммов, таких как E. coli, что приводит к присутствию геномной ДНК хозяина в этих молекулярных ферментах. Кроме того, экологические и человеческие факторы могут вносить загрязненную ДНК в молекулярные ферментные продукты.
В процессе обнаружения патогена фоновые бактериальные нуклеиновые кислоты от загрязнения могут затмевать целевые нуклеиновые кислоты с низкой распространенностью или обнаруживаться вместе с целевыми нуклеиновыми кислотами. Это может повлиять на чувствительность обнаружения цели или привести к ложноположительным результатам, усложняя диагностику и решения по лечению, принимаемые медицинскими специалистами.
При разработке и производстве продуктов контроля качества для тестирования остатков нуклеиновых кислот хозяина наличие остаточных нуклеиновых кислот хозяина, включая те, что получены от человека, мышей, E. coli, дрожжей и других, в молекулярных ферментах может привести к неточностям в количественной оценке продуктов контроля качества остатков нуклеиновых кислот хозяина. Это создает потенциальные риски безопасности при производстве биологических продуктов.
YEASEN UCF.MEТМ Молекулярный ферментный раствор с ультранизким содержанием остатков
Для решения проблемы интерференции фоновых бактерий и остатков нуклеиновых кислот хозяина YEASEN создала полноценную платформу для исследований, разработок и производства для UCF.MEТМ Молекулярные ферменты с ультранизким содержанием остатков. И добился крупномасштабного производства различных UCF.МНЕТМ Молекулярные ферменты с ультранизким содержанием остатков посредством выбора материалов, контроля окружающей среды, оптимизации процессов и обеспечения качества.
YEASEN UCF.MEТМ сверхнизкоостаточные молекулярные ферментные продукты
YEASEN реформировал полный набор молекулярных ферментов, таких как qPCR/RT-qPCR, создание библиотеки NGS. В то же время UCF.ME™ Для обработки молекулярных ферментных продуктов используется сверхнизкоостаточный процесс, мы можем предоставить полный набор высокопроизводительного и сверхнизкоостаточного молекулярного ферментного сырья для qPCR/RT-qPCR и NGS. к повысить точность обнаружения.
Стол 1 Список YEASEN UCF.MEТМ сверхнизкоостаточные молекулярные ферментные продукты
| Классификация продукции | Название продукта | Номер по каталогу | Критерии кишечная палочка контроль качества геномной ДНК |
| UCF.MEТМ Ферментные продукты со сверхнизким содержанием остатков для qPCR/RT-qPCR | Хайфф UCF.MEТМ Hotstart Чувствительная ДНК-полимераза Taq (5 Ед/мкл) | 14314ES | ＜0,005 копий/U |
| Hifair UCF.MEТМ V Обратная транскриптаза (200 ед./мкл) | 14608ES | ＜0,005 копий/U | |
| UCF.MEТМ Ингибитор мышиной РНКазы (40 ед/мкл) | 14672ES | ＜0,001 копий/U | |
| UCF.MEТМ Высокоаффинный ингибитор РНКазы (40 ед./мкл) | 14675ES | ＜0,001 копий/U | |
| UCF.MEТМ Урацил-ДНК-гликозилаза (УДГ/УНГ), термолабильная, 1 ед/мкл | 14466ES | ＜0,1 копий/U | |
| UCF.MEТМ Урацил ДНК гликозилаза (УДГ/УНГ), 1 ед/мкл | 14454ES | ＜0,1 копий/U |
Частичное представление данных（UCF.MEТМ Пример: Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase）
- Ростатокиз кишечная палочка гДНК <0.005 экз./ед.
- кишечная палочкаОстатки геномной ДНК различных партий UCF.MEТМTaq фермент (Cat#14314ES) были обнаружены. Результат показал, что кишечная палочка остатки гДНК остатки ДНК-полимеразы Taq были значительно ниже 0,005 копий/ед.
Фигура 1: Обнаружение E.coli гОстаток ДНК UCF.MEТМ Фермент Taq (Кат. № 14314ES)
- Остаточная плазмидная ДНК не обнаружена.
Остатки плазмидной ДНК UCF.MEТМ Были обнаружены фермент Taq (Cat#14314ES) и ДНК-полимераза Taq марки A. Результаты показали, что в ДНК-полимеразе Taq марки A присутствовал остаток плазмидной ДНК. В UCF.ME плазмидная ДНК не обнаружена.ТМ Фермент Taq (кат. № 14314ES).
Рисунок 2: Результаты обнаружения остатков плазмидной ДНК
- Одиннадцать видов распространенных фоновых бактерий не были обнаружены.
Используйте UCF.MEТМ Фермент Taq (кат. № 14314ES) в сочетании с праймерами и зондами Синегнойная палочка, Acinetobacter baumannii, Серрация марсесценс, Клебсиелла пневмонии, Стенотрофомонас мальтофил, Пневмококк, Энтерококк фаэциум, Золотистый стафилококк, кишечная палочка, Энтерококк фекальный для приготовления премикса для qPCR. NTC (No Template Control) был обнаружен, результаты показали, что никаких остатков вышеуказанных 11 распространенных фоновых бактерий не было обнаружено в UCF.MEТМ Фермент Taq (кат. № 14314ES).
Рисунок 3: Результаты испытаний 11 распространенных фоновых бактерий (ограничены пространством, Синегнойная палочка, Acinetobacter baumannii, Серрация марсесценс и Клебсиелла пневмонии показаны в качестве примеров)
- Презентация тестового случая клиента
Коммерческий фермент Taq и YEASEN UCF.MEТМ Фермент Taq (Cat#14314ES) использовался для обнаружения NTC вместе с клиентом кишечная палочка специфический праймер, и результаты показали, что коммерческий фермент Taq достиг пика 5 раз в 22 повторных экспериментах. UCF.MEТМ Фермент Taq (Cat#14314ES) не достиг пика в 22 повторах, что указывает на то, что UCF.MEТМ Фермент Taq (Cat#14314ES) не обнаружил кишечная палочка гДНК.
Фигура 4: Добнаружение результат Э.кишечная палочка Остаток геномной ДНК (тестовый случай заказчика)
Слева: коммерчески доступный обычный фермент Taq; справа: UCF.MEТМ Фермент Taq (Кат. № 14314ES)
Рекомендация по сопутствующим продуктам
| Классификация продукции | Название продукта | Номер по каталогу |
| Набор для обнаружения остатков нуклеиновой кислоты хозяина | Набор для обнаружения остатков ДНК в клетках-хозяевах CHO (3G) | 41332ES |
| Набор для обнаружения остатков ДНК в клетках-хозяевах HEK293 (3G) | 41331ES | |
| Набор для обнаружения остатков ДНК в клетках-хозяевах Vero (2G) | 41307ES | |
| E.coli Набор для обнаружения остатков ДНК клетки-хозяина (2G) | 41308ES | |
| Набор для обнаружения остатков ДНК клетки-хозяина Hansenula polymorpha | 41317ES | |
| E.coli Набор для обнаружения остатков РНК в клетках-хозяевах | 41318ES |