Обратная транскриптаза вируса лейкемии мышей Молони (M-MLV) является одной из наиболее часто используемых обратных транскриптаз в лабораторных процедурах молекулярной биологии. Для достижения более высокой эффективности обратной транскрипции, лучшей термостабильности и повышенной скорости синтеза кДНК исходная обратная транскриптаза часто подвергается генной инженерии. В настоящее время реагенты для обратной транскрипции, доступные на рынке, обычно требуют времени реакции от 15 до 30 минут, что относительно долго. Когда количество образцов реакции велико, общие временные затраты могут значительно возрасти. Существующие 5-минутные продукты серии обратной транскрипции YESSEN могут завершить процесс обратной транскрипции всего за 5 минут, что экономит время и является высокоэффективным.

Ппродукт Ппозиционирование	Название продукта	Кот#
Быстрый, эффективный и высокопродуктивный премикс для обратной транскрипции	Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix для количественной ПЦР	11156ES
Быстрый, эффективный и высокопродуктивный премикс для обратной транскрипции (с удалением геномной ДНК)	Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix для количественной ПЦР (ДНК-дигестер плюс)	11155ES
Быстрое одноэтапное завершение удаления геномной ДНК и премикс для обратной транскрипции	Hifair™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix для количественной ПЦР	11151ES
Набор для быстрой обратной транскрипции с гибким выбором праймеров (с удалением геномной ДНК)	Hifair™ Набор для синтеза первой цепи ДНК AdvanceFast (без красителя)	11150ES
Набор для быстрой обратной транскрипции с гибким выбором праймеров (с удалением геномной ДНК и отслеживающим красителем)	Hifair™ Набор для синтеза первой цепи ДНК AdvanceFast	11149ES

Рекомендация бутика один

Быстрая, эффективная и высокопродуктивная смесь для обратной транскрипции (с удалением геномной ДНК) (каталожный номер 11155ES)

Высокий выход обратной транскрипции из разных шаблонов

Образец	293Т Клетка	Arabidopsis thaliana	Мышь	Печень рыбы
11155ES	23.4↓	19.6↓	24.9↓	21.1↓
Марка А	24.9	21.3	27.5	21.3
Марка Б	26.1	20.5	27.1	23.1
Марка С	25.7	19.8	27.3	21.9
Марка D	24.3	21.3	28.1	24,5

Рисунок. Обратная транскрипция была выполнена с использованием РНК-шаблонов из человеческих клеток 293T, Arabidopsis thaliana, печени мыши и печени рыбы. Бренды A, B, C и D — это реагенты для двухэтапной обратной транскрипции с различным временем обратной транскрипции от 15 до 20 минут. Результаты испытаний показывают, что набор для 5-минутной обратной транскрипции Hifair 11155ES отличается более высокими выходами по сравнению с другими брендами, а значения Ct ниже.

Рекомендация бутика два

5-минутный одноэтапный премикс для переваривания и обратной транскрипции (каталожный номер 11151ES)

Высокий выход обратной транскрипции

Рисунок. Используя РНК клеток человека 293T в качестве шаблона, были протестированы три гена соответственно. Бренды A, B и C — это реагенты для одноэтапного удаления геномной ДНК и обратной транскрипции. Результаты теста показывают, что при вводе 1 мкг и 10 нг общей РНК выход обратной транскрипции с набором 11151ES превосходит другие бренды с меньшими значениями Ct.

Рисунок. Используя РНК Arabidopsis thaliana в качестве шаблона, бренды A, B и C являются реагентами для одноэтапного удаления геномной ДНК и обратной транскрипции. Результаты теста показывают, что при вводе 1 мкг и 10 нг общей РНК выход обратной транскрипции с набором 11151ES превосходит другие бренды с меньшими значениями Ct.

Отличная чувствительность

Рисунок. Используя РНК клеток человека 293T в качестве шаблона, были амплифицированы гены с содержанием GC 30%, GC 50%, GC 60% и GC 70%. Для обратной транскрипции использовались общие вводы РНК 100 пг, 1 нг, 10 нг, 100 нг и 1 мкг с последующим флуоресцентным количественным обнаружением. Результаты показывают, что 11151ES может обеспечить обратную транскрипцию для вводов РНК в диапазоне от 100 пг до 1 мкг.

Рекомендация бутика Tтри

5-минутный набор для быстрой обратной транскрипции (Кат. № 11149/11150ES)

Высокая чувствительность, минимальный предел обнаружения до 10 пг

Рисунок. Используя общую РНК из клеток 293T в качестве шаблона, обратная транскрипция была выполнена с 11149ES, и полученная кДНК была подвергнута количественному анализу qPCR. Результаты показывают, что 11149ES может успешно проводить обратную транскрипцию РНК-входов в диапазоне от 10 пг до 1 мкг, гарантируя точные количественные результаты.

Хорошие показатели амплификации, самая длинная амплификация фрагмента размером 14 кб

Фигура.Используя общую РНК из клеток 293T в качестве матрицы, была проведена обратная транскрипция с 11149ES, и полученная кДНК была подвергнута ПЦР-детекции. Результаты показывают, что 11149ES способен синтезировать фрагменты кДНК длиной от 1 до 14 кб, с последующей ПЦР, имеющей определенные применимые сценарии. Если требуется прямая обратная транскрипция фрагментов более 10 кб, рекомендуется продлить время обратной транскрипции до 20-30 минут, чтобы гарантировать получение конечных фрагментов.

Сравнение эффективности обратной транскрипции

Количество вводимой РНК	Значение Ct
	11149ES	Марка А
1 мкг	15.2	15.5
100 нг	18.0	18.5
10 нг	21	21.7
1 нг	24,5	25.1
100 стр.	29.1	29.7
10 стр.	32.7	34.3

Рисунок. Используя общую РНК из клеток 293T в качестве матрицы, обратная транскрипция была выполнена с 11149ES и Brand A, причем 11149ES не подвергался этапу удаления геномной ДНК. Полученная кДНК была подвергнута количественному анализу методом ПЦР. Результаты показывают, что время обратной транскрипции для Brand A составило 13 минут, тогда как для 11149ES оно составило 5 минут. Количественный анализ различных продуктов показывает, что значения Ct для 11149ES меньше или аналогичны значениям для конкурирующего бренда, что указывает на то, что 5-минутная эффективность обратной транскрипции 11149ES превосходит или приблизительно эквивалентна таковой для Brand A.

Количество вводимой РНК	Значение Ct
	11149ES	Марка Б
1 мкг	16.2	17.4
100 нг	19.0	20.5
10 нг	22	23.8
1 нг	26	27.9
100 стр.	31.4	33.2
10 стр.	32.9	35.6

Фигура.Используя общую РНК из клеток 293T в качестве матрицы, обратная транскрипция была выполнена с 11149ES и Brand B, причем 11149ES не подвергался этапу удаления геномной ДНК. Полученная кДНК была подвергнута количественному анализу методом ПЦР. Результаты показывают, что время обратной транскрипции для Brand B составило 20 минут, тогда как для 11149ES оно составило 5 минут. Количественный анализ различных количеств субстрата показывает, что значения Ct для 11149ES меньше или аналогичны значениям для Brand B, что указывает на то, что эффективность 5-минутной обратной транскрипции 11149ES превосходит или приблизительно эквивалентна таковой для Brand B.

Рекомендуемые сопутствующие товары

Метод	Ппродукт Ппозиционирование	Название продукта	Кот#
qPCR на основе красителя	Высокоспецифичный универсальный количественный премикс (на основе красителя)	Hieff UNICON™ расширенный qPCR SYBR Master Mix	11185ES
	Высокочувствительный универсальный количественный премикс (на основе красителя)	Hieff UNICON™ Универсальная синяя qPCR SYBR Master Mix	11184ES
Обратная транскрипция	5-минутная одноэтапная обработка и премикс для обратной транскрипции (для qPCR)	Hifair™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix для количественной ПЦР	11151ES
	5-минутная быстрая обратная транскрипция, способная синтезировать до 14 кб кДНК, с удалением геномной ДНК (для ПЦР/кПЦР) - версия Tracer	Hifair™ Набор для синтеза первой цепи ДНК AdvanceFast	11149ES
	5-минутная быстрая обратная транскрипция, способная синтезировать до 14 кб кДНК, с удалением геномной ДНК (для ПЦР/кПЦР)	Hifair™ Набор для синтеза первой цепи ДНК AdvanceFast (без красителя)	11150ES
	Высококачественная премикс-композиция для синтеза первой цепи ДНК с удалением геномной ДНК (для количественной ПЦР)	Hifair™ III SuperMix для синтеза первой цепи ДНК для количественной ПЦР (gDNA digester plus)	11141ES