Флуоресцентная количественная ПЦР является высокочувствительным экспериментом, требующим высокой степени точности при работе со стороны лабораторного персонала. Поэтому в процессе эксперимента qPCR мы неизбежно сталкиваемся с проблемами:
I. Вопросы, связанные с неэкспериментальными факторами
- В лаборатории проводится множество экспериментов по количественной ПЦР, а приборы заняты, в результате чего четкого способа утилизации тщательно приготовленных реакционных смесей не существует.
- Существует множество количественных образцов, задача добавления образцов обременительна, и существует риск ошибок при добавлении образцов из-за головокружения, что приводит к ненадежным экспериментальным результатам.
- Длительное время работы машины, ограниченное количество экспериментальных запусков и экспериментальные задачи не могут быть выполнены в запланированные сроки на регулярной основе.
- Лабораторное оборудование заменяется новыми приборами, в лаборатории имеется множество количественных приборов, а количественные реагенты несовместимы с приборами.
II. Проблемы, ограниченные экспериментальными факторами
Проблемы количественной оценки с малораспространенными генами. Сложный дизайн праймеров и процессы скрининга, чувствительность и воспроизводимость повторных лунок...
Как опытный производитель, занимающийся исследованиями и разработками реагентов для количественной ПЦР, YEASEN тщательно разработала высокопроизводительный премикс для количественной ПЦР – Hieff UNICON™ Универсальный синий qPCR SYBR Green Master Mix, который может решить вышеупомянутые экспериментальные проблемы за один раз. Универсальный ROX, используемый в этом продукте, заменяет традиционный ROX, компенсируя различия оптических путей на различных инструментальных платформах, что делает его пригодным для всех инструментов qPCR. Кроме того, продукт использует метод модификации антител и включает добавки, которые усиливают амплификацию генов, значительно улучшая производительность амплификации продукта. Он идеально сочетает в себе высокопроизводительные потребности исследователей в научном сообществе с высокоэффективными требованиями промышленных предприятий.
Характеристики продукта
- Широкий инструмент совместимость: The премикс содержит а специфический тип из ссылка краситель, устранение нуждаться к регулировать РОКС концентрация.
- Легкий Отслеживание: The синий премикс позволяет для прямой визуализация к различать ли образец имеет был добавлен, просто к наблюдая цвет.
- Высокий Стабильность: The система является готовый в комната температура, и смешанный система может быть хранится в 4°С для вверх к 24 часы без любой изменять в тест результаты.
- Стремительный Настраивать: Совместимый с оба стандартный и быстрый программы, позволяя количественный эксперимент к быть завершенный в как быстрый как 46 минут.
- Отличный Усиление Производительность: Высокий усиление эффективность, хороший специфичность, способный из обнаружение гены в одинокий копия число.
Информация о заказе
| Позиционирование продукта | Название продукта | Кот# |
| Высокочувствительный универсальный количественный премикс | 11184ES | |
| Отслеживание цвета Высокая чувствительность Флуоресценция Количественный Премикс | 11188ES | |
| 11189ES | ||
| 11190ES |
Производительность продукта
1. Высокая чувствительность: возможность обнаружения вплоть до одной копии
Рисунок 1. Hieff UNICON™ Премикс Universal Blue может эффективно определять диапазон количества шаблона в пределах 7 порядков величины с высокой эффективностью амплификации и хорошей линейной зависимостью в широком линейном диапазоне. Используемый шаблон представлял собой 2 мкл плазмиды с концентрацией от 10^6 до 10^0 копий, амплифицирующей ген человеческого IL23R.
2. обнаружение ставка и специфичность являются хороший: широко применимый к усилители с 30-70% ГК содержание
Рисунок 2. Hieff UNICON™ Премикс Universal Blue широко применим к амплимерам с содержанием GC 30-70%, что обеспечивает чрезвычайно высокую скорость обнаружения специфичности. Используя 2 мкл 293T cDNA в качестве шаблона, с помощью программного обеспечения Primer5 было разработано 1000 пар праймеров для амплимеров 200 п.н. (содержание GC% 30%-70%), и 27 из этих амплимеров были амплифицированы случайным образом.
3.Высокое разрешение: позволяет точно различать различия в концентрации шаблона в 2 раза
Рисунок 3. Hieff UNICON™ Универсальный синий премикс может точно различать различия в концентрации шаблона в 2 раза. В качестве шаблона использовалось 2-кратное градиентное разбавление 2 мкл исходного раствора 293T cDNA, амплифицирующее ген GAPDH.
4. Хорошая воспроизводимость дубликатов лунок: 90 дубликатов лунок
Рисунок 4. Hieff UNICON™ Премикс Universal Blue демонстрирует отличную воспроизводимость, кривые амплификации 90 дубликатов лунок показывают высокую степень совпадения, а стандартное отклонение значений Ct составляет менее 0,2. Используя 1 мкл 293T cDNA в качестве матрицы, ген GAPDH был амплифицирован.
5.Хорошая стабильность: премикс сохраняет свои свойства по амплификации даже после 50-кратного замораживания и размораживания.
| Циклы замораживания-оттаивания | 0 раз | 10 раз | 30 раз | 50 раз |
| Средний Ct | 23.11 | 23.17 | 23.18 | 23.25 |
| ▲Кт | - | 0,06 | 0,07 | 0,14 |
Рисунок 5. Hieff UNICON™ Премикс Universal Blue не показывает никаких изменений в производительности амплификации после замораживания и размораживания 50 раз. Используя 1 мкл 293T cDNA в качестве матрицы, ген C2orf68 был амплифицирован с премиксом, который прошел различное количество циклов замораживания-размораживания.
Клиент Фобратная связь
Источник образца: линия клеток рака яичников мыши ID8, HM1
Источник образца: РНК эпидидимальной жировой ткани мыши.
Источник образца: РНК листьев Arabidopsis thaliana
Литература с высоким импакт-фактором частично опубликована с использованием YEASEN qPCR Mix
[1] Ли И, Ван Д, Пин Х и др. Локальная гипертермическая терапия вызывает потемнение белого жира и лечит ожирение. Cell. 2022;185(6):949-966.e19.doi:10.1016/j.cell.2022.02.004.(ЕСЛИ=66.850)
[2] Секи Т., Ян И., Сан Х. и др. Подавление опухолей, опосредованное бурым жиром, при изменении глобального метаболизма под воздействием холода. Nature. 2022;608(7922):421-428. doi:10.1038/s41586-022-05030-3. (ЕСЛИ=69,504)
[3] Чэнь П., Ван В., Лю Р. и др. Обонятельный сенсорный опыт регулирует глиомагенез через нейрональный IGF1. Nature. 2022;606(7914):550-556. doi:10.1038/s41586-022-04719-9.(ЕСЛИ=69,504)
[4] Dong W, Zhu Y, Chang H и др. Модуль SHR-SCR определяет судьбу кортикальных клеток бобовых, чтобы обеспечить образование клубеньков. Nature. 2021;589(7843):586-590. doi:10.1038/s41586-020-3016-z.(ЕСЛИ=69,504)
[5] Lu XY, Shi XJ, Hu A и др. Кормление индуцирует биосинтез холестерина через ось mTORC1-USP20-HMGCR. Nature. 2020;588(7838):479-484. doi:10.1038/s41586-020-2928-y.(ЕСЛИ=69,504)
[6] Би X, Ван К, Ян Л и др. Отслеживание генетических следов приземления позвоночных у некостистых лучеперых рыб. Cell. 2021;184(5):1377-1391.e14. doi:10.1016/j.cell.2021.01.046.(ЕСЛИ=66.850)
[7] Лю С., Хуа И., Ван Дж. и др. РНК-полимераза III необходима для восстановления двухцепочечных разрывов ДНК путем гомологичной рекомбинации. Cell. 2021;184(5):1314-1329.e10. doi:10.1016/j.cell.2021.01.048.(ЕСЛИ=66.850)
[8] Лю СХ, Ли Х, Нан Ф и др. Структура и деградация кольцевых РНК регулируют активацию PKR при врожденном иммунитете. Cell. 2019;177(4):865-880.e21. doi:10.1016/j.cell.2019.03.046.(ЕСЛИ=66.850)
[9] Хань X, Ван Р., Чжоу И. и др. Картографирование атласа мышиных клеток с помощью Microwell-Seq. Cell. 2018;172(5):1091-1107.e17. doi:10.1016/j.cell.2018.02.001.(ЕСЛИ=66.850)
[10] Чай Кью, Ю С, Чжун И и др. Бактериальная фосфолипидная фосфатаза ингибирует пироптоз хозяина, захватывая убиквитин. Наука. 2022;378(6616):eabq0132.doi:10.1126/science.abq0132.(ЕСЛИ=63,714)
[11] Юй Цюй, Лю С., Юй Л. и др. Деметилирование РНК увеличивает урожайность и биомассу растений риса и картофеля в полевых испытаниях. Nat Biotechnol. 2021;39(12):1581-1588. doi:10.1038/s41587-021-00982-9.(ЕСЛИ=68.164)
[12] Хан Ф., Лю Х., Чэнь С. и др. GPR146, связанный с риском гиперхолестеринемии, — это орфанный рецептор, связанный с G-белком, который регулирует уровень холестерина в крови у людей и мышей. Cell Res. 2020;30(4):363-365. doi:10.1038/s41422-020-0303-z.(ЕСЛИ=46.297)
[13] Ван З, Лу З, Линь С и др. В-клетки, экспрессирующие лейцин-тРНК-синтазу-2, способствуют иммуноуклонению колоректального рака. Иммунитет. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017.(ЕСЛИ=43,474)
[14] Bi Q, Wang C, Cheng G и др. Микроглиальный PDGFB стимулирует нейрональные калиевые токи для подавления базального симпатического тонуса и ограничения гипертонии. Иммунитет. 2022;55(8):1466-1482.e9. doi:10.1016/j.immuni.2022.06.018.(ЕСЛИ=43,474)
[15] Ван X, Ни Л, Ван С и др. Фебрильная температура критически контролирует дифференциацию и патогенность клеток Т-хелперов 17. Иммунитет. 2020;52(2):328-341.e5. doi:10.1016/j.immuni.2020.01.006.(ЕСЛИ=43,474)
[16] Сяо Дж., Ли В., Чжэн Х. и др. Воздействие на 7-дегидрохолестеринредуктазу интегрирует метаболизм холестерина и активацию IRF3 для устранения инфекции. Иммунитет. 2020;52(1):109-122.e6. doi:10.1016/j.immuni.2019.11.015.(ЕСЛИ=43,474)
[17] Чжан X, Чжан C, Цяо M и др. Истощение BATF в клетках CAR-T усиливает противоопухолевую активность, вызывая устойчивость к истощению и формирование центральных клеток памяти. Cancer Cell. 2022;40(11):1407-1422.e7. doi:10.1016/j.ccell.2022.09.013.(ЕСЛИ=38,585)
[18] Wang XY, Wei Y, Hu B и др. Гликолиз, управляемый c-Myc, поляризует функциональные регуляторные В-клетки, которые запускают патогенные воспалительные реакции. Signal Transduct Target Ther. 2022;7(1):105. Опубликовано 18 апреля 2022 г. doi:10.1038/s41392-022-00948-6.(ЕСЛИ=38.104)
[19] Fan H, Hong B, Luo Y и др. Влияние сывороточного белка на вирусную инфекцию и репликацию SARS-CoV-2 и коронавируса панголина in vitro. Signal Transduct Target Ther. 2020;5(1):275. Опубликовано 24 ноября 2020 г. doi:10.1038/s41392-020-00408-z.(ЕСЛИ=38.104)
[20]Ren Y, Wang A, Wu D и др. Двойное ингибирование врожденного иммунитета и апоптоза белком цитомегаловируса человека UL37x1 обеспечивает эффективную репликацию вируса. Nat Microbiol. 2022;7(7):1041-1053. doi:10.1038/s41564-022-01136-6.(ЕСЛИ=30,964)