- RT-qPCR drivs av högeffektiv reversering transkriptas
Omvänt transkriptas (RT-enzym) är ett enzym som kan omvandla RNA-mallar till komplementärt DNA (cDNA). Inom molekylärbiologisk forskning används omvänt transkriptas i stor utsträckning, och spelar särskilt en oumbärlig roll inom området molekylär diagnostik. Genom processen med omvänd transkription kan RNA-genomet hos virus omvandlas till cDNA, som sedan kan amplifieras och detekteras med hjälp av tekniker som qPCR. Denna egenskap möjliggör noggrann diagnos av RNA-virus, såsom HIV, influensa A och influensa B.
Figur 1. Schematiskt diagram av omvänd transkriptionsprocessen
Strävan efter RT-qPCR molekylära diagnostiska reagenser som är snabbare, känsligare och lättare att använda har blivit den nuvarande stora utvecklingstrenden. Som ett av nyckelråvarorna i RT-qPCR-processen måste omvänt transkriptas ha snabbare omvänd transkriptionshastighet, högre syntesutbyte och bättre värmebeständighet. För att erhålla ett omvänt transkriptas mer lämpligt för RT-qPCR, Yeasen har utvecklat HifairTM serie av omvända transkriptaser genom genetisk modifiering baserad på M-MLV, med lägre RNas H-aktivitet, högre termisk stabilitet och starkare kontinuerlig syntesförmåga.
Figur 2. Schematisk åtgärd för omvänd transkription
Hifair™Omvända transkriptaser
Yeasen har en mängd olika HifairTM omvänt transkriptas, och kan tillhandahålla en mängd olika produktformer, inklusive enzym och premix, kan du välja efter faktiska behov. Följande tabell listar egenskaperna och rekommenderade tillämpningar för olika Yeasen omvända transkriptaser.
Tabell 1 Riktlinjerna för urval av Hifair™ Omvända transkriptaser| Produktnamn (produktnummer ) | Produktegenskaper | Rekommenderad applikation |
| Termiskt stabil (upp till 65°C), lämplig för komplexa mallar | RT-LAMPA | |
| Stark kompatibilitet, snabb hastighet och högt syntesutbyte | Onestep RT-PCR/qPCR |
Obs: Alla enzymer som nämns ovan är tillgängliga i högkoncentrations- eller icke-glycerolformuleringar.
Vi lyfter nu fram ett omvänt transkriptas som används i RT-qPCR molekylära diagnostiska reagenser: HifairTM V Omvänt transkriptas. Detta enzym kännetecknas av sin starka kompatibilitet, snabba hastighet och höga syntesutbyte, som klarar reaktionstemperaturer upp till 58°C. Den är särskilt väl lämpad för utveckling av RT-qPCR molekylära diagnostiska reagenser.
Prestandademonstration av Hifair™ V omvänt transkriptas
1. Kan motstå en reaktionstemperatur på 58°C, den är lämplig för omvänd transkription av komplexa RNA-mallar.
Figur 3. Det omvända transkriptaset av HifairTM V Omvänt transkriptas och varumärket T* inkuberades vid 55 ℃ respektive 58 ℃ under 30 minuter för att detektera den kvarvarande enzymaktiviteten. Resultaten visade att HifairTM V Omvänt transkriptas kunde fortfarande upprätthålla 70 % aktivitet efter inkubation vid 58 ℃ under 30 minuter, vilket var mycket högre än för varumärket T*.
2. Detektionshastigheten för RT-qPCR var bättre än för andra märken,och tdetektionsområdet var 1 pg-1 μg.
Figur 4. Med användning av 1 pg-1 μg (7 gradienter) totalt RNA från 293T-celler som mall, utfördes omvänd transkription med HifairTM V enstegs RT-gDNA-digestion SuperMix för qPCR(Cat#11142), V*, T*. Det erhållna cDNA:t analyserades kvantitativt med qPCR. Resultaten visade att känsligheten för 11142ES kunde nå 1 pg, vilket var bättre än för andra märken.
Omvänt transkriptasmutant Library of Yeasen
Yeasen fortsätter att främja utvecklingen av omvänt transkriptas med dess ZymeEditorTM plattform. Hittills har vi sållat bort en mängd omvänt transkriptasmutanter med utmärkt prestanda i olika applikationer, som fullt ut kan möta behoven hos olika kundgrupper inom olika applikationsområden.Tabell 2. De omvänt transkriptas Mutant Selection Guide av Yeasen
Rekommenderade produkter
| Produktklassificering | Produktnamn | Katalog nr. |
| Högpresterande PCR-enzymserie | 10726ES | |
| 11300ES | ||
| 14455ES | ||
| 10603ES | ||
| 10125ES |