1. Hur förhindrar man att RNA bryts ned?

2. Vad är RNas-hämmare?

3. Vad gör RNase Inhibitor?

4. Vilka egenskaper har en murin RNas-hämmare?

5. Relaterade produkter och prestanda

6. Relaterade produkter

7. Vanliga frågor

1. Hur förhindrar man att RNA bryts ned?

RNas spelar en viktig roll i nukleinsyrametabolism och kan hittas i nästan alla typer av prokaryoter och eukaryoter. RNas utsöndras i kroppsvätskor som tårar, saliv och svett för att försvara sig mot invasion av mikroorganismer, och RNas finns också i hudrester. Den huvudsakliga källan till RNas i de flesta miljöer är dock mikroorganismer, nämligen bakterier och svampar. RNase är oerhört svårt att inaktivera och uppvisar hög stabilitet, värmebeständighet, syrabeständighet och alkalibeständighet. Efter termisk denaturering kan den snabbt återfå sin ursprungliga struktur. RNas är vanligtvis mycket aktivt och är brett fördelat i både eukaryota och prokaryota celler och vävnader. RNA:t i provet kan brytas ned fullständigt med bara en spårmängd av RNas-kontamination. RNas-kontamination i studier kan komma från både interna och externa källor. RNas i celler är i första hand en endogen källa till kontaminering, medan exogena källor inkluderar experimentella förnödenheter, laboratoriemiljön och experimentörerna själva. RNaser, särskilt medlemmar av RNas A-familjen, är små, kompakta proteiner som innehåller ett fåtal cysteinrester som kan bilda många intramolekylära disulfidbindningar. Efter att ha återgått till rumstemperatur, i frånvaro av ett denatureringsmedel, kommer det denaturerade RNaset att återställa sin naturliga struktur och vissa funktioner. Därför behåller RNaser avsevärd aktivitet efter upprepade frys-upptiningscykler, även efter autoklavering. Den stabila naturen hos dessa enzymer gör dem resistenta mot många dekontamineringsmetoder, som vanligtvis kräver aggressiva kemiska metoder för att eliminera RNaser från ytor och lösningar.

För att undvika nedbrytning av känsligt RNA måste särskilda försiktighetsåtgärder vidtas vid arbete med RNA. För att kontrollera exogent RNas måste operatören bära handskar under experimentet och byta handskar efter att ha berört huden, dörrhandtagen och ytan på vanliga föremål. Och operatören måste använda en speciell pipettpistol för RNA-drift och använda RNase-fria väggspetsar, centrifugrör, föreningar och reagens. Håll dig borta från eller täck över ventilationshål och öppna fönster, och använd mindre färdade områden som RNase-fria områden. Och under RNA-extraktion och analys, utför inte andra experiment som kan orsaka RNas-kontamination.
Metoden för att hämma aktiviteten av endogent RNas är för det första att bevara provet. Efter att vävnaden har tagits, bör RNA inte extraheras direkt. Istället bör det snabbt frysas och förvaras i en -80 ° C miljö med flytande kväve i tid, och experimentet bör utföras så snart som möjligt för att minimera nedbrytningen av RNA.RNas-hämmare tillsätts till cellysatet för att samtidigt bryta celler och inaktivera RNas, vilket minimerar aktiviteten av RNas som frisätts under cellbrytning. Alla reagenser och utrustning måste behandlas speciellt för att inaktivera RNaser före användning.

Dessutom kan RNA-hämmare användas för att hämma RNas-aktivitet och förhindra RNas-nedbrytning av RNA. Det finns flera typer av RNA-hämmare:

• Dietylpyrokarbonat (DEPC): Det är en stark men inte komplett RNas-hämmare. Det denaturerar proteinet genom kombinationen av imidazolringen av histidin i den aktiva gengruppen av RNas, och hämmar därigenom enzymets aktivitet.
• Guanidin isotiocyanat: För närvarande anses vara den mest effektiva RNas-hämmaren, den kan också inaktivera RNas samtidigt som den lyserar vävnad, vilket kan förstöra cellstruktur och dissociera nukleinsyra från nukleoprotein, och har även en viss effekt på RNase Stark denaturerande effekt.
• Vanadylribonukleosidkomplex: ett komplex som bildas av vanadinoxidjoner och nukleosider, som kan kombineras med RNas för att bilda en övergångsanalog, som nästan helt hämmar aktiviteten av RNas.
• Proteininhibitor of RNase (RNasin): ett surt glykoprotein extraherat från råttlever eller human blastodisc, RNasin är en icke-konkurrerande hämmare av RNas, som kan binda till en mängd olika RNaser, vilket gör det inaktiverat.
• Övrigt: SDS, urea, kiselgur etc. har också en viss hämmande effekt på RNas.

2. Vad är RNas-hämmare?

RNas-hämmare är en klass av substanser som kan hämma RNas-aktivitet. Vanliga RNas-hämmare inkluderar dietylpyrokarbonat (DEPC), guanidinisotiocyanat, ribonukleosidvanadylkomplex (RVC) och proteinhämmare av RNas (RNasin). Bland dem har DEPC och guanidin isotiocyanat viss toxicitet, och RVC har en hämmande effekt på PCR-polymeras, vilket inte är gynnsamt för efterföljande experiment. RNasin är inte giftigt och är en icke-kompetitiv hämmare av RNas, som kan binda till olika RNaser för att inaktivera dem.

3. Vad gör RNase Inhibitor?

RNas-hämmare används vanligtvis som en försiktighetsåtgärd vid enzymatiska manipulationer av RNA för att hämma och kontrollera sådana kontaminanter. RNasin är ett surt glykoprotein extraherat från råttlever eller human blastoderm, som specifikt kan binda till RNas på ett icke-kovalent sätt för att bilda ett komplex, vilket orsakar RNas-inaktivering och därigenom skyddar RNA:s integritet. För närvarande hjälper RNase-inhibitorn till att förhindra RNA-nedbrytning i tillämpningar som cDNA-syntes, RT-PCR, in vitro-transkriptions-/translationsreaktioner eller RNA-rening.

4. Vilka egenskaper har en murin RNas-hämmare?

Rekombinanta murina RNas-hämmare innehåller inte två oxidationskänsliga cysteiner som finns i RNas-hämmare av humant ursprung. Därför har murin RNas-hämmare hög antioxidationsaktivitet och är mer stabil för experiment med låg DTT. Dessutom har Murine RNase Inhibitor of Yeasen följande egenskaper:
1) All-around RNas-hämning: Murin RNas-hämmare av YEASEN hämmar specifikt RNas A, RNas B, RNas C, och så vidare.
2) Mångsidiga reaktionsförhållanden: RNas-hämmare är aktiv vid pH 5,0-9,0 och 25℃-55℃, vilket är lämpligt för termostabilt omvänt transkriptas.
3) Flera nedströmsexperiment möjliga: Ingen hämning av polymerasaktivitet observeras när RNase-inhibitor används med Taq DNA-polymeras, AMV eller M-MuLV omvänt transkriptas eller fag-RNA-polymeraser (SP6, T7 eller T3).
4) Massproducerade varor: en enda tillverkningskapacitet på 2 miljarder U är till hjälp för kostnadshanteringen genom att säkerställa produktens homogenitet, leveransstabilitet och aktualitet.
5) Konsistens från batch-till-batch: plattform för moget proteinuttryck och rening med ISO13485 kvalitetsledningssystem, kvalitetskontrolltestning genom kvalitetskrav för att säkerställa produktstabilitet mellan batcherna.

5. Relaterade produkter och prestanda

A. RNas-hämmare blockerar RNas-aktivitet

1μg HEK-cell totalt RNA, 1μL RNase-hämmare kan effektivt hämma 5ng RNas.

Figur 1. Hämmande effekt av murin RNas-inhibitor.

B. RNase Inhibitor överträffar främmande produkter i qPCR-testning

Den hämmande effekten av Yeasen och R* Company mus-härledda RNase-hämmare (MRI) mättes med qPCR-tekniken under identiska experimentella omständigheter, och RNas-hämmaren från YEASEN Murine-källan hämmade effektivt RNase A i systemet. Effekten av hämning var överlägsen konkurrenternas.

Figur 2. R* MRI RNas-inhiberingstest

Obs: Kurvorna i figuren från vänster till höger är: Positiv kontroll (endast RNA, inget RNas och MRT), 40 U MRT, 30 U MRT, 20 U MRT, 10 U MRT och Negativ kontroll (RNA + RNas, ingen MRT).

Figur 3. Yeasen MRI RNas-hämningstest

Obs: Kurvorna i figuren från vänster till höger är: Positiv kontroll (endast RNA, inget RNas och MRT), 80 U MRT, 60 U MRT, 40 U MRT, 30 U MRT, 20 U MRT, 10 U MRT, Negativ kontroll (RNA+RNase, ingen MRT).

Figur 4. CT av RT-qPCR-resultat av Yeasen MRI och R* MRI

6. Relaterade produkter

De relaterade produkterna som Yeasen kan tillhandahålla visas i Tabell 1:

Tabell 1.Lista över produkter

7. Vanliga frågor

F1: Kommer det att finnas RNas i den murina RNas-hämmaren?
S: Varje reagens kommer att detektera RNas-aktivitet för att säkerställa att den murina RNas-hämmaren inte medför RNas-kontamination.
F2: Kommer murina RNas-hämmare att ha en inverkan på nedströms PCR-experiment?
S: Det kommer inte att ha någon effekt. Varje sats av murin RNase-hämmare är fri från genomisk kontaminering efter kvalitetstestning och kan användas i RT-PCR- och RT-qPCR-forskning.
F3: Kommer den murina RNase-hämmaren att inaktiveras?
S: Inhibitorer kommer att inaktiveras vid temperaturer över 65°C, och kraftig omrörning kommer också att orsaka inaktivering.
F4: Vilka försiktighetsåtgärder bör vidtas när man använder en murin RNas-hämmare för att förbereda reaktionssystemet?
Svar: Vid förberedelse av systemet kan en RNas-hämmare tillsättas först innan andra komponenter som kan introducera RNas-kontaminationskällor tillsätts.
F5: Har murin RNas-hämmare endonukleas- och exonukleasaktivitet?
Svar: Det finns ingen endonukleas- och exonukleasaktivitet, vilket hjälper till att förbättra produktutbytet.

Angående läsning:

Murina RNas-hämmare ——Eliminera framgångsrikt RNas-kontamination och bevara RNA

Val av omvänt transkriptas

YEASEN Värmelabil UDG——Kontrollerar enkelt aerosolföroreningar

Högkvalitativa isotermiska förstärkningsråmaterial -Gör RT-LAMP känsligare och snabbare!