Afrikansk svinpest (ASF) är en akut, allvarlig och mycket smittsam infektionssjukdom som orsakas av det afrikanska svinpestviruset (ASFV) som infekterar tamsvin eller vildsvin. Dess sjuklighet och dödlighet kan nå 100 %, vilket allvarligt äventyrar den globala grisindustrin och orsakar oöverskådliga ekonomiska förluster. Världsorganisationen för djurhälsa (OIE) listar det som en rapporterbar djursjukdom.

För närvarande finns det inget vaccin eller effektiv behandling mot afrikansk svinpest. Snabb och korrekt diagnos av afrikansk svinpest genom laboratoriediagnostik är avgörande för att förhindra spridning av sjukdomen. qPCR som huvudverktyg för rutindiagnostik av ASF rekommenderas av OIE.

Yeasen är en tillverkare med rik erfarenhet av IVD-råvaror FoU. Inför afrikansk svinpest svarar yeasen positivt och samarbetar med kunder för att utveckla tre hela processlösningar från extraktion till upptäckt av afrikansk svinpestvirus. Så vad är tre lösningar? Och vilka är tillämpningarna av dessa lösningar? Fortsätter läsa...

Figur 1. Yeasen afrikansk svinpest detektionslösningar

Lösning I: TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)(förfrågan）

Produktegenskaper

👍UDG anti-föroreningssystem som effektivt förhindrar risken för aerosolkontamination

👍Långtidsstabilitet för förblandad PCR-lösning (mastermix + primers + prober) vid rumstemperatur, vilket avsevärt förenklar detektionssvårigheten

👍Hög förstärkningseffektivitet och bra repeterbarhet

👍Lämplig för multiplattformar och multisystem

Case Show

👉Långtidsstabilitet för förblandad PCR-lösning
Cat#13171 användes för att konfigurera den förblandade PCR-lösningen som kan placeras vid 37°C i 7 dagar och upprepad frysning och upptining 15 gånger i amplifieringen av ASF-plasmidsystemet. Resultaten visade att Ct-värdet och känsligheten för PCR-lösningen inte skiljer sig signifikant efter att ha placerats i 7 dagar vid 37 ℃, och Ct-värdet ändrades inte signifikant efter upprepad frysning och upptining 15 gånger.

Figur 2. Cat#13171 TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)(Fråga) används i förblandad PCR-lösning med långtidsstabilitet vid amplifiering av ASF-plasmidsystem. 2A-Ct-värde vid 37 ℃ i 0 dygn och 7 dagar 2B-Känslighet vid 37 ℃ i 0 dygn och 7 dagar 2C-Stabilitet efter frysning-tining 15 gånger

👉Stabila och reproducerbara reagenser
Fyra olika satser av Cat#13171 valdes ut för att upprepa ASFV-plasmidsystemets amplifieringsexperiment 20 gånger. Det fanns inga signifikanta skillnader i Ct-värden, med en CV på mindre än 1 %.

Figur 3.Repeterbarhetstest av Yeasen Cat#13171

👉Multi-plattform multi-system tillämpligt
Yeasen Cat#13171 användes för att amplifiera afrikansk svinpest ASFV/ACT dubbla plasmider på Bio-Rad CFX96, ABI Q5 respektive Slan-plattformar. Det kan ses att Yeasen Cat#13171 är lämplig för olika typer av instrument, och data är tillförlitliga och stabila.

Figur 4. Bio-Rad CFX96 PCR-system i realtid

Figur 5. ABI Q5 Real-Time PCR System

Figur 6. Slan Real-Time PCR System

Lösning II:Universal TaqMan multiplex qPCR mastermix

Yeasens Universal TaqMan multiplex qPCR-mastermix (Cat#11211) är djupt optimerad för effektiv amplifiering av mallar med låg koncentration med hjälp av antikroppsmodifierat Hot-Start Taq DNA-polymeras och matchad multiplexbuffert. Denna produkt stöder upp till 4-plex PCR-reaktioner i ett enda rör och är idealisk för genotypning och multiplex qPCR-analys.

Produktegenskaper

👍Stark tolerans mot blodföroreningar, kan användas med Yeasen nukleinsyraextraktionsreagens Cat#13720 Nucleic Acid Release Reagent V2, idealisk för direkt qPCR
👍Ultrahög känslighet för 3 kopior/reaktion, förbättrar detekteringsnoggrannheten avsevärt
👍Långtidsstabilitet för förblandad PCR-lösning (mastermix + primers + prober) vid rumstemperatur, vilket avsevärt förenklar detektionssvårigheten

Case Show

👉Stark tolerans mot blodföroreningar
Jämfört med liknande produkter från andra märken har Yeasen Cat#11211 en högre tolerans mot inhibitorer i blodprover. Resultaten visade att Yeasen Cat#11211 har en hög tolerans mot EDTA och natriumcitrat, och tål 0,5 % helblod.

Bild 7. Cat#11211 Universal TaqMan multiplex qPCR mastermix och mastermix från olika märken används för ASF qPCR-lösningar kompletterade med 3 mM EDTA (3A), 6 mM natriumcitrat (3B), respektive 0,5 % blod (3C).

👉Ultrahög känslighet för 3 kopior/reaktion

Amplifieringen av ASFV-plasmiden med 20 replikat utfördes baserat på produkterna från olika märken. Resultaten av experiment visar att detektionshastigheten för Yeasen-produkter är högre.

Figur 8. Jämförelse av upptäcktshastigheter mellan liknande produkter från olika märken (3 exemplar i slutligt system)

👉Långtidsstabilitet, stabil i 7 dagar vid rumstemperatur

PCR-lösningen av ASFV/ACT dubbla plasmidsystem kan bibehålla stabil prestanda efter 7 dagar vid 4 ℃, 25 ℃ och 37 ℃. Det kan ses att Ct-värdet och fluorescensvärdet inte förändrades signifikant.

Figur 9. Stabilitet för PCR-lösning

Lösning III: Isotermisk förstärkning

Yeasens produkter stödjer den isotermiska förstärkningstekniken som hjälper till att utföra ASF-detektion snabbare och mer effektivt. Cat# 14402 Hieff™ Bst Plus DNA-polymeras (40 U/μL) är härlett från termofilt Geobacillus sp DNA-polymeras I, som saknar 5'-3' exonukleasaktivitet. Denna produkt har starkare 5'-3' DNA-polymerasaktivitet, strängförskjutningsaktivitet och dUTP-tolerans, vilket är mer lämpligt för isotermiska amplifieringsreaktioner mot föroreningar, såsom LAMP, CPA, etc.

Produktegenskaper

👍Hög förstärkningseffektivitet

👍High Yield Amplifiering

👍dUTP-tolerans, kan användas i kombination med Cat#10303 Uracil DNA Glycosylas (UDG/UNG)(Fråga), värmelabil, 1 U/μL för att förhindra risken för aerosolkontamination

Case Show

👉Överlägset alternativ till importerade N*-produkter

Amplifieringsprocessen utfördes med användning av Bst DNA-polymeras från Yeasen respektive N* Company. Det fanns ingen signifikant skillnad i Ct-värde och fluorescensintensitet mellan olika märken.

Figur 10. Amplifieringskurvor av olika märken

Beställa produkter