Produktapplikationsscenarier

1. Avlägsnande av kvarvarande nukleinsyror i biologiska läkemedel: Under produktionen av biologiska läkemedel, såsom virus, vacciner och proteiner, kan UltraNuclease tillsättas för att bryta ned kvarvarande nukleinsyror. Detta steg ökar inte bara utbytet av virus utan minskar också avsevärt innehållet av kvarvarande nukleinsyror, vilket säkerställer läkemedlens säkerhet och effektivitet.
2. Viskositetsreduktion: Genom att bryta ner nukleinsyror reduceras cellysatens viskositet, vilket underlättar filtrerings-/ultrafiltreringsprocesser under reningen av cellhärledda partiklar såsom virus, AAV-vektorer och inklusionskroppar.
3. Förbättrad upplösning och återhämtning: I ELISA, tvådimensionell elektrofores och immunoblotting-analyser, förbättrar det upplösning och återhämtning.
4. Förebyggande av cellaggregation: UltraNuclease kan effektivt förhindra aggregation av humana perifera mononukleära blodceller (PBMC).

Produktens prestandatestning

Effekten av högsaltmiljö på enzymaktivitet (Na+)

För att matcha användningen av Salt Active UltraNuclease har Yeasen också självständigt utvecklat ett specifikt detektionskit för Salt Active UltraNuclease, som effektivt kan upptäcka enzymrester och minska riskerna. Salt Active UltraNuclease ELISA Kit har utvecklats och producerats i enlighet med riktlinjerna för validering av analytiska metoder <9101> i 2020 kinesiska farmakopén, och strikt följer nyckelkraven för multiparametertestning (linjärt område, specificitet, noggrannhet, precision, känslighet, accelererad stabilitet, etc.).

För detta ändamål har Yeasen Biotech utvecklat ett ELISA-kit för detektering av Salt Active UltraNuclease. Satsen använder principen om dubbel antikroppsandwichenzymkopplad immunosorbentanalys (ELISA) för att detektera den kvarvarande mängden av Salt Active UltraNuclease. Standard- och testproverna av Salt Active UltraNuclease läggs till den enzymbelagda plattan som är förbelagd med anti-Salt Active UltraNuclease-antikropp (36703-A). Därefter tillsätts den utspädda biotinmärkta nukleasdetektionsantikroppen (36703-C), följt av Streptavidin-HRP (SA-HRP) (36703-D). Detta bildar en antikropp + antigen + antikropp-biotin + SA-HRP-komplex. Efter tvättning av plattan tillsätts TMB-substratlösning (36703-H) för färgutveckling. Under katalys av HRP-enzym ändras TMB från färglöst till blått och blir slutligen gult under verkan av stopplösning (36703-I). Intensiteten hos den gula färgen är direkt proportionell mot mängden högsalttolerant universalnukleas som detekteras i provet.

Den experimentella processen att detektera kvarvarande Salt Active UltraNuclease med hjälp av Salt Active UltraNuclease ELISA Kit.

Egenskaper för UltraNuclease och Salt Active UltraNuclease ELISA kit:

Regelefterlevnad: Fullt validerade enligt regulatoriska krav, valideringsrapporter finns tillgängliga;

Kvalitetssäkring: Alla råvaror för kitet är oberoende utvecklade, vilket säkerställer kontrollerbar kvalitet;

Hög känslighet: Kvantitativ gräns så låg som 23 pg/ml;

Hög precision: Hög repeterbarhet inom batch och låg inter-batch variabilitet;

Stark specificitet: Ingen korsreaktivitet med andra konstruerade cellproteiner

Prestandaparametrar

Produktparametrar	innehåll
Analystid	3,5 timmar
Analysprincip	Tvåställs immunoenzymetrisk analys
Signalförstärkning	Biotin-streptavidin-systemet
Detektionsvåglängd	450nm och 630nm
Känslighet	0,024 ng/ml
Detektionsområde	0.047 ng/ml~3 ng/ml
Detektionsobjekt	Salt Active UltraNuclease
Tillämpligt instrument	Molekylära enheter: M- och i-serien
Ansökan	Detektion av kvarvarande nukleas i reningsprocesser av cell- och genterapi och rekombinanta adenoassocierade virusvacciner

Produktdata:

Reagenssats standardkurva:

Specificitet

Korsreaktiviteten mellan Salt Active UltraNuclease-antikroppen och de sju proteinerna i kitet utvärderades genom att använda detta kit för att detektera proteinerna som tillsattes i de sju processerna. En positiv kontroll (PC-0,047 ng/ml) och en negativ kontroll (NC-0 ng/ml) sattes upp.

Resultaten visade att proteinet som tillsattes i de 7 processerna var nära den negativa kontrollen (NC-0 ng/ml), detektionskoncentrationen var lägre än gränsen för kvantifiering av detta kit (0,047 ng/ml), och ingen korsreaktion var observerade.

Sgädda Återvinningsgrad:

Tillsätt tre koncentrationsstandarder (dvs. Std1 3 ng/ml, Std3 0,75 ng/ml och Std5 0,188 ng/ml) i lika proportioner till de två prover som tillhandahålls av kunden för spikåtervinningsexperimentet. Resultaten visar att spikåtervinningsgraden alla ligger mellan 80 % och 120 %. Spetsåtervinningsgrad % = (uppmätt värde av spikat prov - uppmätt värde för ospetsat prov) / teoretiskt värde (mängd tillsatt standard) * 100%.

Provnamn	Testkoncentration av Salt Active UltraNuclease（ng/mL）	Kvantitet standard (ng/ml)	Testresultat (ng/ml)	Spetsåtervinningsgrad (%)
TS1	0,04	3	1,71	114,00 %
		0,75	0,347	92,53 %
		0,188	0,085	90,43 %
TS2	0,08	3	1,772	118,13 %
		0,75	0,405	108,00 %
		0,188	0,104	110,64 %

Noggrannhet

1) Repeterbarhet

Tre Salt Active UltraNuclease standardprodukter med hög, medium och låg koncentration valdes ut för upprepade experiment. I samma experiment testades proverna av varje koncentration 10 gånger och CV% < 10%.

Skillnad i batch
Teoretisk koncentration (ng/ml)	Antal repetitioner	Medel (ng/ml)	Variationskoefficient CV (%)
1.5	10	1,444	2,97 %
0,188	10	0,196	2,27 %
0,047	10	0,051	2,56 %

2) Mellanprecision

Olika satser av kit användes för 3 experiment, varje experiment utfördes med 3 koncentrationer av hög, medium och låg, och varje koncentration upprepades 10 gånger. Totalt 30 data erhölls från varje koncentrationspunkt och CV% för varje koncentration var mindre än 15%.

Batch skillnad
Teoretisk koncentration (ng/ml)	Antal experiment	Medel (ng/ml)	Variationskoefficient CV (%)
1.5	3	1,423	5,70 %
0,188	3	0,212	5,59 %
0,047	3	0,059	6,82 %

Produktinformation

Produktnamn	Produkt antal	Produktspecifikationer
Salt Active UltraNuclease GMP-grade	20159ES25/50/60/80/90	25KU/50KU/100KU/1MU/5MU
Salt Active UltraNuclease ELISA kit	36703ES96	96T

Andra relaterade produkter

Produktnamn	Produktnummer	Produktspecifikationer
UCF.ME®UltraNuclease GMP-grade (bensonas)	20157ES25/50/60/80/90	25KU/50KU/100KU/1MU/5MU
UCF.ME® UltraNuclease ELISA Kit	36701ES59	96T