การวินิจฉัยที่ถูกต้องเริ่มต้นด้วยการถอดความแบบย้อนกลับ

- RT-qPCR ขับเคลื่อนด้วยรีเวิร์สที่มีประสิทธิภาพสูง ทรานสคริปเทส

เอนไซม์รีเวิร์สทรานสคริปเทส (RT) คือเอนไซม์ที่มีความสามารถในการแปลงเทมเพลต RNA เป็นดีเอ็นเอเสริม (cDNA) ในการวิจัยชีววิทยาโมเลกุล เอนไซม์รีเวิร์สทรานสคริปเทสถูกใช้กันอย่างแพร่หลาย โดยเฉพาะอย่างยิ่งมีบทบาทสำคัญในด้านการวินิจฉัยทางโมเลกุล ผ่านกระบวนการถอดรหัสย้อนกลับ จีโนม RNA ของไวรัสสามารถแปลงเป็น cDNA ซึ่งสามารถขยายและตรวจจับได้โดยใช้เทคนิค เช่น qPCR ลักษณะนี้ทำให้สามารถวินิจฉัยไวรัส RNA เช่น HIV ไข้หวัดใหญ่ A และไข้หวัดใหญ่ B ได้อย่างแม่นยำ

รูปที่ 1 แผนผังกระบวนการถอดรหัสย้อนกลับ

การพัฒนารีเอเจนต์วินิจฉัยระดับโมเลกุลด้วย RT-qPCR ที่เร็วกว่า ไวกว่า และใช้งานง่ายกว่าได้กลายเป็นแนวโน้มหลักในปัจจุบัน เนื่องจากเป็นหนึ่งในวัตถุดิบหลักในกระบวนการ RT-qPCR รีเวิร์สทรานสคริปเทสจึงจำเป็นต้องมีความเร็วในการถอดรหัสย้อนกลับที่เร็วกว่า ผลผลิตการสังเคราะห์ที่สูงขึ้น และทนต่อความร้อนได้ดีขึ้น เพื่อให้ได้รีเวิร์สทรานสคริปเทสที่เหมาะสมกว่าสำหรับ RT-qPCR Yeasen ได้พัฒนา Hifairทีเอ็ม ชุดของเอนไซม์ทรานสคริพเทสย้อนกลับผ่านการดัดแปลงพันธุกรรมโดยอาศัย M-MLV ซึ่งมีกิจกรรม RNase H ที่ต่ำกว่า มีเสถียรภาพทางความร้อนที่สูงขึ้น และความสามารถในการสังเคราะห์อย่างต่อเนื่องที่แข็งแกร่งยิ่งขึ้น

รูปที่ 2 แผนผังการดำเนินการถอดรหัสย้อนกลับ

ไฮแฟร์™ทรานสคริปเทสย้อนกลับ

Yeasen มี Hifair หลากหลายทีเอ็ม ทรานสคริพเทสย้อนกลับ และสามารถให้รูปแบบผลิตภัณฑ์ที่หลากหลาย รวมถึงเอนไซม์และพรีมิกซ์ คุณสามารถเลือกได้ตามความต้องการจริง ตารางต่อไปนี้แสดงลักษณะเฉพาะและการใช้งานที่แนะนำของเอนไซม์ต่างๆ Yeasen เอนไซม์ทรานสคริพเทสย้อนกลับ

ตารางที่ 1 แนวทางการคัดเลือก ของ ไฮแฟร์™ ทรานสคริปเทสย้อนกลับ

ชื่อสินค้า (หมายเลขสินค้า -

คุณสมบัติผลิตภัณฑ์

แอปพลิเคชั่นที่แนะนำ

ไฮแฟร์ทีเอ็ม III ย้อนกลับ ทรานสคริปเทส (11111ES)

มีเสถียรภาพทางความร้อน (สูงถึง 65°C) เหมาะสำหรับเทมเพลตที่ซับซ้อน

โคมไฟ RT

ไฮแฟร์ทีเอ็ม วี รีเวิร์ส

ทรานสคริปเทส (11300ES)

ความเข้ากันได้สูง ความเร็วที่รวดเร็ว และผลผลิตการสังเคราะห์สูง

ขั้นตอนเดียว รีทีพีซีอาร์/คิวพีซีอาร์

หมายเหตุ: เอนไซม์ที่กล่าวถึงข้างต้นทั้งหมดมีอยู่ในสูตรความเข้มข้นสูงหรือไม่มีกลีเซอรอล

ขณะนี้เราเน้นที่ reverse transcriptase ที่ใช้ในรีเอเจนต์วินิจฉัยระดับโมเลกุล RT-qPCR: Hifairทีเอ็ม เอนไซม์ V Reverse Transcriptase เอนไซม์ชนิดนี้มีความโดดเด่นในเรื่องความเข้ากันได้สูง ความเร็วที่รวดเร็ว และผลผลิตการสังเคราะห์ที่สูง สามารถทนต่ออุณหภูมิปฏิกิริยาได้สูงถึง 58°C เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการพัฒนารีเอเจนต์วินิจฉัยระดับโมเลกุลด้วย RT-qPCR

สาธิตการทำงานของ Hifair™ วี รีเวิร์สทรานสคริปเทส

1.สามารถทนต่ออุณหภูมิปฏิกิริยา 58°C เหมาะสำหรับการถอดรหัสย้อนกลับของเทมเพลต RNA ที่ซับซ้อน-

    รูปที่ 3. เอนไซม์ทรานสคริปเทสย้อนกลับของ Hifairทีเอ็ม เอนไซม์ V Reverse Transcriptase และ T* ยี่ห้อต่างๆ ได้รับการฟักที่อุณหภูมิ 55℃ และ 58℃ ตามลำดับ เป็นเวลา 30 นาที เพื่อตรวจจับกิจกรรมเอนไซม์ที่เหลือ ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่า Hifairทีเอ็ม V Reverse Transcriptase ยังคงรักษาการทำงานที่ 70% ได้หลังจากการฟักที่อุณหภูมิ 58℃ เป็นเวลา 30 นาที ซึ่งสูงกว่าของแบรนด์ T* มาก

    2.อัตราการตรวจจับของ RT-qPCR ดีกว่ายี่ห้ออื่น-และตช่วงการตรวจจับคือ 1 pg-1 μg-

    รูปที่ 4 การใช้ RNA ทั้งหมด 1 pg-1 μg (7 gradients) ของเซลล์ 293T เป็นแม่แบบ จะดำเนินการถอดรหัสย้อนกลับโดยใช้ Hifairทีเอ็ม V การย่อย RT-gDNA แบบขั้นตอนเดียว SuperMix สำหรับ qPCR (Cat#11142), V*, T* cDNA ที่ได้นั้นถูกวิเคราะห์เชิงปริมาณโดย qPCR ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่า 11142ES มีความไวถึง 1 pg ซึ่งดีกว่ายี่ห้ออื่น

    ห้องสมุดกลายพันธุ์ทรานสคริปเทสย้อนกลับของ Yeasen

    Yeasen ยังคงส่งเสริมวิวัฒนาการของเอนไซม์ทรานสคริพเทสย้อนกลับ กับ มันคือ ZymeEditorทีเอ็ม แพลตฟอร์ม จนถึงขณะนี้ เราได้คัดกรองโปรตีนทรานสคริพเทสย้อนกลับหลากหลายชนิดที่มีประสิทธิภาพดีเยี่ยมในแอปพลิเคชันต่างๆ ซึ่งสามารถตอบสนองความต้องการของกลุ่มลูกค้าต่างๆ ในสาขาแอปพลิเคชันที่หลากหลายได้อย่างเต็มที่

    ตารางที่ 2- การ คู่มือการเลือกกลายพันธุ์ทรานสคริปเทสย้อนกลับ ของ Yeasen

    สินค้าแนะนำ

    การจำแนกประเภทผลิตภัณฑ์

    ชื่อสินค้า

    เลขที่แคตตาล็อก

    ซีรีย์เอนไซม์ PCR ประสิทธิภาพสูง

    ดีเอ็นเอโพลีเมอเรส Hieff UNICON™ Hotstart E-Taq 5 U/μL

    10726ES

    ไฮแฟร์™ วี รีเวิร์สทรานสคริปเทส (200 หน่วย/μL)

    11300ES

    ยูราซิลดีเอ็นเอไกลโคซิเลส (UDG/UNG) 1 U/μL

    14455ES

    สารยับยั้ง RNase ของหนู (40 U/µL)

    10603ES

    dNTP มิกซ์ (25 มิลลิโมลาร์ ต่อชิ้น)

    10125ES

    การสอบถาม