ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา ด้วยการพัฒนาอย่างรวดเร็วของชีวการแพทย์ การเกิดขึ้นของการบำบัดด้วยเซลล์และยีนภายใต้การระบาดของ COVID-19 และการถือกำเนิดของวัคซีน mRNA การรับรองความปลอดภัยและความน่าเชื่อถือของผลิตภัณฑ์ทางชีวภาพได้กลายเป็นประเด็นสำคัญสำหรับรัฐบาลและหน่วยงานกำกับดูแลทั่วโลก การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาเป็นประเภทของการปนเปื้อนที่พบได้ทั่วไปแต่โดยทั่วไปแล้วเป็นเรื่องท้าทายในการกำจัด ข้อกำหนดด้านกฎระเบียบกำหนดให้ "ต้องแน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของไมโคพลาสมา" สำหรับกระบวนการทางชีวภาพที่เกี่ยวข้องกับการเพาะเลี้ยงเซลล์
ข้อกำหนดของหน่วยงานกำกับดูแลสำหรับการทดสอบไมโคพลาสมา:
- “คำแนะนำสำหรับอุตสาหกรรม: การจำแนกลักษณะและคุณสมบัติของสารตั้งต้นเซลล์และวัสดุชีวภาพอื่นๆ ที่ใช้ในการผลิตวัคซีนไวรัสเพื่อบ่งชี้โรคติดเชื้อ” กำหนดให้มีการควบคุมไมโคพลาสมาสำหรับวัตถุดิบ เมล็ดไวรัส และของเหลวจากการเก็บเกี่ยวที่ยังไม่ผ่านการแปรรูป
- ตำรายาจีนฉบับปี 2020 ตอนที่ 3 เรื่อง "การเตรียมและการควบคุมคุณภาพของสารตั้งต้นเซลล์สัตว์ที่ใช้สำหรับการทดสอบการผลิตผลิตภัณฑ์ทางชีววิทยา" กำหนดให้ต้องมีการทดสอบไมโคพลาสมาสำหรับเซลล์การผลิต ได้แก่ ธนาคารเซลล์หลัก (MCB) ธนาคารเซลล์ทำงาน (WCB) และเซลล์ปลายการผลิต (EOPC)
- “แนวทางทางเทคนิคสำหรับการวิจัยยาและการประเมินผลิตภัณฑ์เซลล์บำบัดภูมิคุ้มกัน (การทดลอง)” แนะนำให้ดำเนินการทดสอบความปลอดภัยของไมโคพลาสมาในตัวอย่างกลางที่เหมาะสมในช่วงเวลาสำคัญหรือใช้มาตรการที่เกี่ยวข้องเพื่อควบคุม การทดสอบไมโคพลาสมายังจำเป็นสำหรับการทดสอบการปล่อยผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้ายด้วย
การทดสอบกรดนิวคลีอิก (NAT) และวิธีการแบบดั้งเดิม:
ก่อนที่จะมีวิธีการตรวจหาอย่างรวดเร็ว เช่น เทคโนโลยีการขยายกรดนิวคลีอิก (NAT) มีการใช้วิธีการเพาะเลี้ยงแบบดั้งเดิมและการทดสอบเซลล์ตัวบ่งชี้ อย่างไรก็ตาม เนื่องจากรอบการตรวจจับที่ยาวนานหรือปัญหาความไว วิธีการเหล่านี้จึงมักทำให้รอบการผลิตหรือการปล่อยผลิตภัณฑ์ยาวนานขึ้น หรือจำเป็นต้องปล่อยวัสดุเซลล์ตามเงื่อนไขโดยพิจารณาจากการประเมินความเสี่ยงหรือการสำรวจวิธีการทางเลือกอื่น ด้วยความก้าวหน้าของการบำบัดด้วยเซลล์และยีน ความต้องการวิธีการตรวจหาไมโคพลาสมาที่มีความตรงเวลาและความไวสูงขึ้นในอุตสาหกรรมก็เพิ่มมากขึ้น อายุการเก็บรักษาที่สั้นของผลิตภัณฑ์ไม่สามารถรองรับระยะเวลาการทดสอบที่ยาวนานได้ ดังนั้น วิธีการ NAT จึงกลายมาเป็นทางเลือกที่ได้รับความนิยม
ปัจจุบัน เภสัชตำรับยุโรป (EP) <2.6.7> เภสัชตำรับญี่ปุ่น (JP) และเภสัชตำรับสหรัฐอเมริกา (USP) <63> ต่างรวมวิธี NAT เป็นวิธีตรวจจับไมโคพลาสมา อย่างไรก็ตาม การตรวจสอบความถูกต้องของวิธีนี้และการเปรียบเทียบกับวิธีดั้งเดิมเพื่อให้แน่ใจว่าความไวของวิธีนี้ไม่ด้อยกว่าเป็นข้อกำหนดเบื้องต้นสำหรับการใช้งาน แม้ว่าเภสัชตำรับจีน (ChP) ฉบับปี 2020 จะไม่รวม NAT เป็นวิธีตรวจจับไมโคพลาสมา แต่ได้กล่าวถึงความเป็นไปได้ในการใช้ "วิธีอื่นที่ได้รับการยอมรับจากหน่วยงานกำกับดูแลยาแห่งชาติ" ในเดือนพฤษภาคม 2022 ศูนย์ทบทวนยาของสำนักงานบริหารผลิตภัณฑ์ทางการแพทย์แห่งชาติ (NMPA) ได้เผยแพร่ "แนวทางทางเทคนิคสำหรับการวิจัยยาและการประเมินผลิตภัณฑ์เซลล์บำบัดภูมิคุ้มกัน (การทดลอง)" ซึ่งแนะนำให้พิจารณาพัฒนาวิธีตรวจจับปลอดเชื้อและไมโคพลาสมาแบบใหม่สำหรับการทดสอบการปล่อยภายใต้สถานการณ์พิเศษเมื่อปริมาณตัวอย่างมีจำกัดหรือจำเป็นต้องปล่อยอย่างรวดเร็วและวิธีการทางเภสัชตำรับไม่เพียงพอ ด้วยเหตุนี้ วิธี NAT จึงคาดว่าจะได้รับการนำไปใช้มากขึ้นโดยซัพพลายเออร์วัตถุดิบและบริษัทผลิตภัณฑ์ยาขั้นสูง (ATP) เนื่องจากเป็นวิธีที่สามารถรองรับการทดสอบการปล่อยไมโคพลาสมาอย่างรวดเร็ว
วิธี NAT - ข้อกำหนดการตรวจสอบวิธีการ
กระบวนการตรวจสอบความถูกต้องสำหรับวิธี NAT ได้รับการอธิบายไว้อย่างละเอียดในตำรายายุโรป <2.67> และตำรายาญี่ปุ่น โดยเนื้อหามีความสอดคล้องกันเป็นพื้นฐาน สถาบันแห่งชาติเพื่อการควบคุมอาหารและยา (NIFDC) ยังได้ตีพิมพ์บทความเรื่อง "ข้อควรพิจารณาเกี่ยวกับวิธีการตรวจจับกรดนิวคลีอิกและการตรวจสอบวิธีการสำหรับการตรวจสอบไมโคพลาสมา" ซึ่งมุ่งหวังที่จะให้คำแนะนำแก่ผู้พัฒนาและผู้ใช้การขยายกรดนิวคลีอิกของไมโคพลาสมาในประเทศจีน ความจำเพาะ ขีดจำกัดการตรวจจับ และความแข็งแกร่งถือเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการตรวจสอบวิธี NAT ของไมโคพลาสมา หากใช้ชุดทดสอบเชิงพาณิชย์สำหรับการตรวจจับไมโคพลาสมา การตรวจสอบความเหมาะสมของวิธีการสามารถดำเนินการได้โดยอิงตามรายงานประสิทธิภาพของชุดทดสอบที่ครอบคลุมของซัพพลายเออร์ ร่วมกับสภาพแวดล้อมในห้องปฏิบัติการและประเภทของตัวอย่าง
ความจำเพาะ:
ความจำเพาะหมายถึงความสามารถของวิธีการวิเคราะห์ในการระบุสารวิเคราะห์อย่างแม่นยำเมื่อมีส่วนประกอบอื่นๆ (เช่น สิ่งเจือปน ผลิตภัณฑ์จากการย่อยสลาย สารช่วย ฯลฯ) EP เน้นย้ำถึงความจำเป็นในการเน้นที่ปฏิกิริยาข้ามสายพันธุ์ระหว่างสายพันธุ์แบคทีเรียอื่นๆ ที่มีความเกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดกับแผนภูมิวิวัฒนาการ เช่น คลอสตริเดียม แล็กโทบาซิลลัส และสเตรปโตค็อกคัส ภายในแบคทีเรียแกรมบวก ควรให้ความสนใจกับประเภทสารปนเปื้อนทั่วไป เช่น การปนเปื้อนของดีเอ็นเอของมนุษย์ในเซลล์โฮสต์และสภาพแวดล้อมการทดลองด้วย
ขีดจำกัดการตรวจจับ:
ขีดจำกัดการตรวจจับคือปริมาณต่ำสุดของสารวิเคราะห์ที่สามารถตรวจพบได้ในตัวอย่าง ซึ่งทำหน้าที่เป็นพื้นฐานในการระบุคุณภาพและไม่จำเป็นต้องวัดเป็นค่าที่แน่นอน EP ต้องใช้ข้อมูลการตรวจจับ 24 จุดสำหรับไมโคพลาสมาแต่ละสายพันธุ์ที่ความเข้มข้นของการเจือจางแต่ละระดับ ซึ่งสามารถทำได้โดยทำการเจือจางแบบต่อเนื่อง 10 เท่าอิสระ 3 ครั้งในวันต่างกัน โดยตรวจจับซ้ำ 8 ครั้งสำหรับแต่ละระดับการเจือจาง หรือโดยทำการเจือจางแบบต่อเนื่อง 10 เท่าอิสระ 4 ครั้งในวันต่างกัน โดยตรวจจับซ้ำ 6 ครั้งสำหรับแต่ละระดับการเจือจาง อัตราการตรวจจับที่เป็นบวกมากกว่า 95% ถือเป็นขีดจำกัดการตรวจจับ สำหรับไมโคพลาสมาชนิดที่ต้องยืนยันขีดจำกัดการตรวจจับ ผู้ผลิตชุดทดสอบจะต้องครอบคลุมไมโคพลาสมาชนิดต่างๆ ให้ได้มากที่สุดเท่าที่จะทำได้ตามที่ตำรายาที่ควบคุมกำหนด และสำรวจขีดจำกัดการตรวจจับสำหรับไมโคพลาสมาแต่ละชนิด สำหรับบริษัทชีวเภสัชภัณฑ์ ขอแนะนำให้พิจารณาไมโคพลาสมาชนิดในมนุษย์ด้วย
- หากมีการใช้หรือพบเซลล์หรือวัสดุของนกระหว่างกระบวนการผลิต ควรทำการตรวจสอบขีดจำกัดการตรวจหา Mycoplasma synoviae
- หากมีการใช้หรือพบแมลงหรือวัสดุจากพืชระหว่างกระบวนการผลิต ควรทำการตรวจสอบขีดจำกัดการตรวจหา Acholeplasma
- ไมโคพลาสมาในโพรงจมูกของสุกรมีอัตราแพร่ระบาดสูงในตัวอย่างที่ปนเปื้อนไมโคพลาสมา และได้รับความสนใจจากสถาบันควบคุมอาหารและยาแห่งประเทศจีน
เมื่อเปรียบเทียบกับเภสัชตำราของยุโรป เภสัชตำราของญี่ปุ่นไม่ได้กล่าวถึงไมโคพลาสมาในนกซึ่งต้องมีการยืนยันขีดจำกัดการตรวจพบ แต่รวมถึงไมโคพลาสมาในน้ำลายด้วย
ความแข็งแกร่ง:
ความแข็งแกร่งหมายถึงความสามารถของวิธีการที่จะทนต่อการเปลี่ยนแปลงเล็กน้อยในเงื่อนไขการวัดโดยไม่ได้รับผลกระทบ ซึ่งเป็นพื้นฐานสำหรับการใช้วิธีการที่กำหนดไว้ในการทดสอบตามปกติ การประเมินความแข็งแกร่งควรเน้นที่ความทนทานของวิธีการตรวจจับไมโคพลาสมาต่อการเปลี่ยนแปลงในความเข้มข้นของ MgCl2 ไพรเมอร์ และ dNTP ในรีเอเจนต์การตรวจจับ การเปลี่ยนแปลงในชุดสกัดกรดนิวคลีอิกหรือขั้นตอนการสกัด และการใช้แอมพลิฟายเออร์กรดนิวคลีอิกที่แตกต่างกัน
การศึกษาการเปรียบเทียบ
หากจะใช้ NAT ทดแทนวิธีทางเภสัชวิทยา จำเป็นต้องยืนยันโดยการเปรียบเทียบว่า NAT สามารถแทนที่วิธีการที่ใช้วัฒนธรรมเป็นฐานหรือวิธีการเพาะเลี้ยงเซลล์ตัวบ่งชี้ได้โดยทั่วไปแล้วจะต้องพิจารณาถึงขีดจำกัดการตรวจจับของวิธีการ ตลอดจนความจำเพาะ (เช่น ขอบเขตของการครอบคลุมของไมโคพลาสมาและผลบวกปลอมที่เป็นไปได้) สำหรับการเปรียบเทียบขีดจำกัดการตรวจจับ ควรเป็นไปตามเกณฑ์ที่ว่า "ขีดจำกัดการตรวจจับ 10 CFU/mL สามารถแทนที่วิธีการที่ใช้การเพาะเลี้ยง และขีดจำกัดการตรวจจับ 100 CFU/mL สามารถแทนที่วิธีการเพาะเลี้ยงเซลล์ตัวบ่งชี้ได้"
มีสองวิธีทางเลือกในการดำเนินการศึกษาการเปรียบเทียบ:
- การดำเนินการทดลองแบบซิงโครนัสโดยใช้สายพันธุ์ไมโคพลาสมาที่ผ่านการตรวจสอบเดียวกันสำหรับทั้งวิธี NAT และเภสัชเภสัชเพื่อยืนยันขีดจำกัดการตรวจจับ
- การเปรียบเทียบผลลัพธ์ของการตรวจสอบความถูกต้องของ NAT กับผลการตรวจสอบความถูกต้องของวิธีเภสัชตำรับก่อนหน้านี้ แต่ต้องมีการบันทึกไฟล์ยืนยันมาตรฐานไมโคพลาสมาที่ใช้ในทั้งสองวิธีอย่างระมัดระวัง
การตรวจหาเชื้อไมโคพลาสมาด้วย NAT qPCR - โซลูชันที่ครอบคลุม
สินค้าที่เกี่ยวข้อง
การบริการด้านเทคนิค
- จัดทำรายงานการตรวจสอบที่ครอบคลุมสำหรับชุดทดสอบ MycAway™ Mycoplasma qPCR
- การให้บริการด้านเทคนิคเพื่อตรวจสอบการใช้ตัวอย่างของลูกค้า
- การให้การสนับสนุนการตรวจสอบ
| คำอธิบาย | หมายเลขชิ้นส่วน |
| 18461ES | |
| ชุดตรวจหา Mycoplasma qPCR MycAway™ (2จี) | 40619ES |