E.Coli โฮสต์เซลล์ DNA DENTECTECTION KIT (2G) รายงานการตรวจสอบความถูกต้อง

อีโคไล ชุดตรวจหาสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ -2จี-

สรุปคุณสมบัติ (Cat No.: 4)1308อีเอส60)

1. พื้นหลัง

ข้อมูลสรุปในรายงานนี้ดำเนินการโดย Yeasen เทคโนโลยีชีวภาพสำหรับผลิตภัณฑ์ 'ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์อีโคไล (2G) ข้อมูลสรุปมีไว้สำหรับการอ้างอิงของผู้ใช้เท่านั้น และผู้ใช้จำเป็นต้องตรวจสอบสารตกค้างของเซลล์โฮสต์ วิธีการตรวจดีเอ็นเอโดยใช้ตัวอย่างของตนเองเพื่อยืนยันว่าวิธีการดังกล่าวสามารถตอบสนองความต้องการของผู้ใช้ได้ ห้องปฏิบัติการทั้งหมดที่ใช้ชุดตรวจนี้ขอแนะนำให้ตรวจสอบพารามิเตอร์ต่อไปนี้: ความเป็นเส้นตรง ช่วง ความแม่นยำ ความแม่นยำ ขีดจำกัดการวัดปริมาณ ความจำเพาะ และความแข็งแกร่ง

Yeasen เทคโนโลยีชีวภาพสามารถจัดทำรายงานคุณสมบัติโดยละเอียดสำหรับชุดนี้ได้ หากผู้ใช้ใช้รายงานนี้ แสดงเฉพาะความเหมาะสม (ซึ่งรวมถึงความแม่นยำ ความแม่นยำ และความจำเพาะ) ควรได้รับการตรวจสอบ

2. วัสดุและวิธีการทดลอง

2.1 ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ E.coli (2G) ผู้ขาย: Yeasen, รหัสสินค้า: 41308ES60.

2.2 ชุดเตรียมตัวอย่าง DNA ตกค้างแม่เหล็ก MolPure® ผู้จำหน่าย: Yeasen, หมายเลขแคตตาล็อก: 18461ES60.

2.3 มาตรฐานแห่งชาติสำหรับปริมาณ DNA ของ E.coli: Cat. 270027, หมายเลขล็อต: 201101, ความเข้มข้น: 96.2 μg/mL, สภาวะการจัดเก็บ: -70℃, ซื้อจาก: สถาบันแห่งชาติเพื่อการควบคุมอาหารและยา

2.4 ข้อมูลต้นฉบับ: เวอร์ชันอิเล็กทรอนิกส์ถูกบันทึกไว้ใน 'รายงานการทดลอง' ไฟล์ย่อยของไฟล์หลัก 'E.coli Host Cell DNA Residue Detection Kit (2G)'

2.5 วิธีการ: วัสดุและวิธีการดำเนินการที่ใช้ในการทดลองนั้นผลิตหรือกำหนดขึ้นโดยพื้นฐานแล้ว Yeasen เทคโนโลยีชีวภาพ ซึ่งได้รับการประเมินและตรวจสอบมาเป็นเวลานาน การพัฒนาและการผลิตชุดอุปกรณ์ ปฏิบัติตามระบบ ISO 13485

3. เนื้อหาและผลลัพธ์ของคุณสมบัติ

3.1 ระยะการตรวจจับ

ช่วงเชิงเส้นของชุดทดสอบคือ 30 fg/μL~300 pg/μL พร้อม R²=1 และประสิทธิภาพการขยายคือ 101.74% โดยที่ CV<15% สำหรับการทดสอบความเข้มข้นแต่ละครั้ง

รูปที่ 1 กราฟมาตรฐาน qPCR ของ DNA ของ E.coli (2G)

3.2 ความแม่นยำ

3.2.1 การเบี่ยงเบนจาก มาตรฐานแห่งชาติสำหรับเนื้อหา DNA ของ E.coli

วัสดุอ้างอิง DNA ของ E.coli ในชุดทดสอบแต่ละชุดได้รับการปรับเทียบโดยใช้มาตรฐานแห่งชาติสำหรับปริมาณ DNA ของ E.coli Yeasen ข้อมูลอ้างอิง DNA แทบจะไม่มีการเบี่ยงเบนจากมาตรฐานแห่งชาติสำหรับเนื้อหา DNA ของ E.coli เส้นโค้งการสอบเทียบ และความเบี่ยงเบนของค่าทดสอบอยู่ที่น้อยกว่า 5%

3.2-2 อาร์การอนุรักษ์สิ่งแวดล้อม

3.2.2.1 การทดลองการกู้คืนสไปค์ตัวอย่างเปล่า

ตัวอย่างมาตรฐาน DNA ของ E.coli ในความเข้มข้นสูงและต่ำ ได้แก่ 300 pg/μL, 3 pg/μL และ 30 fg/μL ตามลำดับ ถูกเตรียม และทดสอบหลังการสกัดโดยใช้ Magnetic Bead Method for Residual DNA Sample Pre-treatment Kit (ดำเนินการสกัดซ้ำ 2 ครั้งสำหรับแต่ละตัวอย่าง และทำการทดสอบซ้ำ 3 ครั้งสำหรับการสกัดแต่ละครั้ง) จากนั้นจึงวิเคราะห์ตัวอย่างที่กู้คืนและ CV

สำหรับตัวอย่าง DNA ที่มีความเข้มข้นต่างกัน การกู้คืนจะอยู่ในช่วง 70% ถึง 130% และ CV ทั้งหมดนั้นน้อยกว่า 20%

ประเภทตัวอย่าง	ความเข้มข้นเชิงทฤษฎี	สารสกัด 1 ค่าเฉลี่ย	สารสกัด 2 ค่าเฉลี่ย	ความเข้มข้นเฉลี่ย	ซีวี	การกู้คืน
ตัวอย่างว่างเปล่า	-	-	-	-	-	-
ตัวอย่างการกู้คืน 1	300 พิกกรัมต่อไมโครลิตร	250.56 พิกกรัมต่อไมโครลิตร	262.11 พิกกรัมต่อไมโครลิตร	256.33 พิกกรัมต่อไมโครลิตร	4.41%	85.44%
ตัวอย่างการกู้คืน 2	3 pg/μL	2.29 พิกกรัมต่อไมโครลิตร	2.56 พิกกรัมต่อไมโครลิตร	2.42 พิกกรัมต่อไมโครลิตร	7.09%	80.77%
ตัวอย่างการกู้คืน 3	30 กรัม/ไมโครลิตร	33.62 ฟก./ไมโครลิตร	32.61 ฟก./ไมโครลิตร	33.12 ฟก./ไมโครลิตร	14.28%	110.39%

ตาราง 1 การกู้คืนตัวอย่างเปล่าแบบสไปค์

3.2.2.2 การทดลองจำลองการกู้คืนตัวอย่าง

ตัวอย่างที่มีความเข้มข้นเท่ากัน (3 pg/μL ของ DNA จาก E.coli) ถูกสกัด (ทำซ้ำการสกัด 2 ครั้งสำหรับแต่ละตัวอย่าง และทำการจำลองการทดสอบ 3 ครั้งสำหรับการสกัดแต่ละครั้ง) ด้วยสารละลายพื้นหลัง 5 ชนิดที่แตกต่างกัน (โปรตีนสูง กรดนิวคลีอิกสูง pH สูงและต่ำ เกลือสูง) จากนั้นจึงวิเคราะห์การกู้คืนตัวอย่างและ CV

การกู้คืนตัวอย่าง DNA จากโซลูชันพื้นหลังที่แตกต่างกันมีช่วงตั้งแต่ 70% ถึง 130% โดยที่ CV ทั้งหมดน้อยกว่า 20%

ประเภทตัวอย่าง	ความเข้มข้นเชิงทฤษฎี	สารสกัด 1 ค่าเฉลี่ย	สารสกัด 2 ค่าเฉลี่ย	ความเข้มข้นเฉลี่ย	ซีวี	การกู้คืน
ตัวอย่างพื้นฐาน	-	-	-	-	-	-
โปรตีนสูง	3 pg/μL	2.25	2.23	2.24	1.09%	74.74%
กรดนิวเคลียร์สูง		3.93	3.96	3.95	1.56%	131.52%
เกลือสูง		2.69	2.67	2.68	2.63	89.20%
ค่า pH สูง		2.90	3.67	3.29	13.82%	109.55%
ค่า pH ต่ำ		2.77	2.87	2.82	3.41%	94.01%

ตารางที่ 2 ตัวอย่างพื้นฐานในการฟื้นตัวจากการสไปก์

3.3 ความแม่นยำ

3.3.1 ความสามารถในการทำซ้ำ

ทำซ้ำการทดสอบ 10 ครั้งสำหรับมาตรฐาน DNA ของ E.coli ที่ความเข้มข้น 3 pg/μL โดยมี CV <15%

การทำซ้ำ	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	หมายถึง	ซีวี
ค่าการตรวจจับ (fg/μL)	3.16	2.87	2.97	2.86	2.81	2.97	3.14	3.21	3.14	3.1	3.02	4.78%

ตารางที่ 3 ผลลัพธ์การทำซ้ำ

3.3-2 ความแม่นยำระดับกลาง

นักทดลองสามคนทดสอบตัวอย่างมาตรฐาน DNA ของ E.coli อย่างอิสระที่ความเข้มข้นสูงและต่ำ ได้แก่ 300 pg/μL, 3 pg/μL และ 30 fg/μL และมีการจำลองสามครั้งสำหรับความเข้มข้นแต่ละระดับ และค่า CV ของข้อมูลทั้งเก้าที่ได้นั้นน้อยกว่า 15%

เอ็กซ์พี	ความเข้มข้นที่แท้จริง ความเข้มข้นเชิงทฤษฎี	ดีเอ็นเอของอีโคไล (2G)
		300 pg/uL	3 pg/uL	30 กรัม/ไมโครลิตร
ประสบการณ์ 1	ความมุ่งมั่นที่ 1	295.65	3.22	26.90
	การตัดสินใจที่ 2	287.71	3.24	32.00
	การตัดสินใจที่ 3	300.23	3.17	27.50
Exp.2 ครั้งที่ 2	การตัดสินใจที่ 4	306.06	3.13	37.30
	ความมุ่งมั่นที่ 5	299.76	3.02	32.70
	การตัดสินใจที่ 6	299.63	3.02	34.00
Exp.3 ครั้งที่ 3	การตัดสินใจที่ 7	266.70	3.01	35.90
	ความมุ่งมั่นที่ 8	272.89	3.09	40.70
	ความมุ่งมั่นที่ 9	276.51	3.01	35.20
-	หมายถึง	289.46	3.10	33.60
-	ซีวี	4.89%	3.02%	13.18%

ตารางที่ 4 ผลลัพธ์ความแม่นยำระดับกลาง

3.4 ความเฉพาะเจาะจง

การรบกวนของ DNA จีโนมของเซลล์ที่ใช้กันทั่วไปในการผลิตยาชีวภาพได้รับการประเมินสำหรับการรบกวนกับรีเอเจนต์ตรวจจับ DNA ของ E.coli และกลุ่มการรบกวนทับซ้อนกับกลุ่มควบคุมและไม่พบการรบกวน (รูปด้านล่างแสดงข้อมูลการรบกวนของ DNA จีโนม HEK293, Vero และ CHO กับรีเอเจนต์ตรวจจับ DNA ของ E.coli ตามลำดับ)

รูปที่ 2 ผลการทดลองการรบกวน

3.5 ขีดจำกัดการวัดปริมาณ

ตรวจพบดีเอ็นเอของอีโคไลที่ความเข้มข้น 50 fg/μL, 40 fg/μL, 30 fg/μL, 10 fg/μL และ 5 fg/μL โดยทำซ้ำ 10 ครั้งสำหรับแต่ละความเข้มข้น ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่า CV น้อยกว่า 20% ที่ความเข้มข้น 30 fg/μL ขึ้นไป นั่นคือ ขีดจำกัดของการวัดปริมาณของชุดตรวจจับดีเอ็นเอตกค้างของเซลล์โฮสต์อีโคไล (2G) อยู่ที่ 30 fg/μL

การทำซ้ำ รายการทดสอบ	ดีเอ็นเอของอีโคไล (2G) (fg/μL)
	ปริมาณ	อัตราการคำนวณใหม่
1	29.43	98.09%
2	29.51	98.35%
3	32.04	106.79%
4	26.07	86.89%
5	34.06	113.53%
6	33.54	111.79%
7	26.95	89.82%
8	27.38	91.26%
9	27.04	90.13%
10	26.10	87.02%
หมายถึง	29.21	-
ซีวี	10.40%	-

รูปที่ 3 ผลการทดสอบ qPCR DNA ของ E.coli 30fg/μL (2G)

3.6 ความแข็งแกร่ง

ชุดนี้ได้รับการทดสอบแล้วและเหมาะสำหรับแต่ไม่จำกัดเฉพาะเครื่องมือต่อไปนี้:

ผู้ขาย	แบบจำลองเครื่องมือ	ประสิทธิภาพการขยายสัญญาณ	อาร์2	ขีดจำกัดการวัดปริมาณ (fg/μL)	ซีวี
เทอร์โม	เอบีไอ 7500	101.74%	1	30	13.30%
เทอร์โม	เอบีไอ ควอนท์สตูดิโอ 5	100.46%	1	30	12.40%
ไบโอ-ราด	ซีเอฟเอ็กซ์96	99.20%	0.999	30	13.76%
เซี่ยงไฮ้หงสือ	สแลน	100.40%	0.999	30	11.67%

ตารางที่ 5 ผลการทดสอบความเหมาะสมของเครื่องมือ

3.7 ความเสถียร

3.7.1 ความเสถียรของการแช่แข็งและละลาย

ชุดตรวจจับดีเอ็นเอตกค้างของเซลล์โฮสต์อีโคไล (2G) ได้รับการทดสอบโดยการแช่แข็งและละลายซ้ำ 10 ครั้ง และประสิทธิภาพของชุดทดสอบไม่ได้รับผลกระทบ

ตัวบ่งชี้การทดสอบ เวลาของการแช่แข็งและละลาย	พารามิเตอร์	เวลา T0	แช่แข็ง-ละลาย 10 ครั้ง
พารามิเตอร์เส้นโค้งมาตรฐาน	ประสิทธิภาพการขยายสัญญาณ	98.23%	100.20%
	อาร์2	1	0.999
ขีดจำกัดการวัดปริมาณ (30 fg/μL)	ซีวี	15.07%	9.66%

ตารางที่ 6 การวิเคราะห์ผลเสถียรภาพของการแช่แข็งและละลาย

3.7-2 เสถียรภาพที่เร่งขึ้น

อี.ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ coli (2G) ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2~8°C เป็นเวลา 30 วันและ 37°C เป็นเวลา 14 วันตามลำดับ ประสิทธิภาพของชุดทดสอบไม่ได้รับผลกระทบแต่อย่างใด

ตัวบ่งชี้การทดสอบ ความเร่ง อุณหภูมิ และเวลา	พารามิเตอร์	การทดลองที่ 1		การทดลองที่ 2
		เวลา T0	2~8℃ 30 วัน	เวลา T0	37℃ 14 วัน
พารามิเตอร์เส้นโค้งมาตรฐาน	ประสิทธิภาพการขยายสัญญาณ	97.77%	99.81%	98.39%	98.65%
	อาร์2	1	1	1	1
ขีดจำกัดการวัดปริมาณ (30 fg/μL)	ซีวี	11.04%	13.79%	9.55%	14.55%

ตารางที่ 7 การวิเคราะห์ผลการวิเคราะห์เสถียรภาพเร่ง

4. 4-อ้างอิง

4.1 คณะกรรมการเภสัชตำราจีน (ChPC) เภสัชตำราแห่งสาธารณรัฐประชาชนจีน (เล่มที่ 3) [S] ปักกิ่ง: สำนักพิมพ์วิทยาศาสตร์การแพทย์และเทคโนโลยีจีน, หน้า 542-543, 2020

4.2 NMPA, 2007: หลักการทั่วไปสำหรับการทบทวนทางเทคนิคของการตรวจสอบวิธีการวิเคราะห์สำหรับการควบคุมคุณภาพของผลิตภัณฑ์ทางชีวภาพ

4.3 ICH(2022)《การตรวจสอบวิธีการวิเคราะห์ Q2》 ฉบับร่าง

ข้อมูลการสั่งซื้อ