HEK293 Host Cell DNA Detection Detection Kit (3G) รายงานการตรวจสอบความถูกต้อง

เอชอีเค293 ชุดตรวจหาสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ (3จี-

สรุปคุณสมบัติ (Cat No.: 4)1331อีเอส60)

1. พื้นหลัง

ข้อมูลสรุปในรายงานนี้ดำเนินการโดย Yeasen เทคโนโลยีชีวภาพเพื่อ 'HEK293 ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ (3G)' ผลิตภัณฑ์ ข้อมูลสรุปมีไว้สำหรับการอ้างอิงของผู้ใช้เท่านั้น และผู้ใช้จำเป็นต้องตรวจสอบสารตกค้างของเซลล์โฮสต์ วิธีการตรวจดีเอ็นเอโดยใช้ตัวอย่างของตนเองเพื่อยืนยันว่าวิธีการดังกล่าวสามารถตอบสนองความต้องการของผู้ใช้ได้ ห้องปฏิบัติการทั้งหมดที่ใช้ชุดตรวจนี้ขอแนะนำให้ตรวจสอบพารามิเตอร์ต่อไปนี้: ความเป็นเส้นตรง ช่วง ความแม่นยำ ความแม่นยำ ขีดจำกัดการวัดปริมาณ ความจำเพาะ และความแข็งแกร่ง

Yeasen เทคโนโลยีชีวภาพสามารถจัดทำรายงานคุณสมบัติโดยละเอียดสำหรับชุดนี้ได้ หากผู้ใช้ใช้รายงานนี้ แสดงเฉพาะความเหมาะสม (ซึ่งรวมถึงความแม่นยำ ความแม่นยำ และความจำเพาะ) ควรได้รับการตรวจสอบ

2. วัสดุและวิธีการทดลอง

2.1 เอชอีเค293 ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ (3G) ผู้จำหน่าย: Yeasen, หมายเลขแคตตาล็อก: 41331ES60.

2.2 ชุดเตรียมตัวอย่าง DNA ตกค้างแม่เหล็ก MolPure® ผู้จำหน่าย: Yeasen, หมายเลขแคตตาล็อก: 18461ES60.

2.3 ข้อมูลต้นฉบับ: บันทึกเวอร์ชันอิเล็กทรอนิกส์ไว้ใน 'รายงานการทดลอง' ไฟล์ย่อยของไฟล์หลัก 'HEK293 ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ (3G)'

2.4 วิธีการ: วัสดุและวิธีการดำเนินการที่ใช้ในการทดลองนั้นผลิตหรือกำหนดขึ้นโดยพื้นฐานแล้ว Yeasen เทคโนโลยีชีวภาพ ซึ่งได้รับการประเมินและตรวจสอบมาเป็นเวลานาน การพัฒนาและการผลิตชุดอุปกรณ์ ปฏิบัติตามระบบ ISO 13485

3. เนื้อหาและผลลัพธ์ของคุณสมบัติ

3.1 ระยะการตรวจจับ

ช่วงเชิงเส้นของชุดทดสอบคือ 30 fg/μL~300 pg/μL พร้อม R²≥0.998 และประสิทธิภาพการขยายสัญญาณอยู่ในช่วง 90%~110% โดยที่ CV<15% สำหรับการทดสอบความเข้มข้นแต่ละแบบ

รูปที่ 1 กราฟมาตรฐาน qPCR ของ DNA (3G) HEK293

3.2 ความแม่นยำ

3.2-1 อาร์การอนุรักษ์สิ่งแวดล้อม

3.2.1.1 การทดลองการกู้คืนสไปค์ตัวอย่างเปล่า

ตัวอย่าง HEK293 มาตรฐาน DNA ในความเข้มข้นสูงและต่ำ ได้แก่ 300 pg/μL, 3 pg/μL และ 30 fg/μL ตามลำดับ และทดสอบหลังการสกัดโดยใช้ Magnetic Bead Method for Residual DNA Sample Pre-treatment Kit (ดำเนินการสกัดซ้ำ 2 ครั้งสำหรับแต่ละตัวอย่าง และทำการทดสอบซ้ำ 3 ครั้งสำหรับการสกัดแต่ละครั้ง) และวิเคราะห์ตัวอย่างที่กู้คืนและ CV

สำหรับตัวอย่าง DNA ที่มีความเข้มข้นต่างกัน การกู้คืนจะอยู่ในช่วง 70% ถึง 130% และ CV ทั้งหมดนั้นน้อยกว่า 20%

ประเภทตัวอย่าง	ความเข้มข้นเชิงทฤษฎี	สารสกัด 1 ค่าเฉลี่ย	สารสกัด 2 ค่าเฉลี่ย	ความเข้มข้นเฉลี่ย	ซีวี	การกู้คืน
ตัวอย่างว่างเปล่า	-	-	-	-	-	-
ตัวอย่างการกู้คืน 1	300 พิกกรัมต่อไมโครลิตร	306.81 พิกกรัมต่อไมโครลิตร	279.57 พิกกรัมต่อไมโครลิตร	293.82 พิกกรัมต่อไมโครลิตร	6.56%	97.94%
ตัวอย่างการกู้คืน 2	3 pg/μL	3.11 พิกกรัมต่อไมโครลิตร	2.99 พิกกรัมต่อไมโครลิตร	3.09 พิกกรัมต่อไมโครลิตร	2.75%	103.00%
ตัวอย่างการกู้คืน 3	30 กรัม/ไมโครลิตร	31.02 ฟก./ไมโครลิตร	30.63 ฟก./ไมโครลิตร	30.83 ฟก./ไมโครลิตร	0.89%	102.77%

ตาราง 1 การกู้คืนตัวอย่างเปล่าแบบสไปค์

3.2.1.2 การทดลองจำลองการกู้คืนตัวอย่าง

ตัวอย่างที่มีความเข้มข้นเท่ากัน (3 pg/μL ของ HEK293 DNA) ถูกสกัด (ทำซ้ำการสกัด 2 ครั้งสำหรับแต่ละตัวอย่าง และทำการจำลองการทดสอบ 3 ครั้งสำหรับการสกัดแต่ละครั้ง) ด้วยสารละลายพื้นหลัง 5 ชนิดที่แตกต่างกัน (โปรตีนสูง กรดนิวคลีอิกสูง pH สูงและต่ำ เกลือสูง) จากนั้นจึงวิเคราะห์การกู้คืนตัวอย่างและ CV

การกู้คืนตัวอย่าง DNA จากโซลูชันพื้นหลังที่แตกต่างกันมีช่วงตั้งแต่ 70% ถึง 130% โดยที่ CV ทั้งหมดน้อยกว่า 20%

ประเภทตัวอย่าง	ความเข้มข้นเชิงทฤษฎี	สารสกัด 1 ค่าเฉลี่ย	สารสกัด 2 ค่าเฉลี่ย	ความเข้มข้นเฉลี่ย	ซีวี	การกู้คืน
ตัวอย่างพื้นฐาน	-	-	-	-	-	-
โปรตีนสูง	3 pg/μL	2.65	2.80	2.73	3.80%	90.87%
กรดนิวเคลียร์สูง		2.82	2.97	2.90	3.71%	96.58%
เกลือสูง		2.88	2.70	2.79	4.47%	92.89%
ค่า pH สูง		2.81	2.93	2.87	2.98%	95.71%
ค่า pH ต่ำ		2.76	2.79	2.77	0.99%	92.48%

ตารางที่ 2 ตัวอย่างพื้นฐานในการฟื้นตัวจากการสไปก์

3.3 ความแม่นยำ

3.3.1 ความสามารถในการทำซ้ำ

ทำซ้ำการทดสอบ 10 ครั้งสำหรับมาตรฐาน DNA HEK293 ที่ความเข้มข้น 30 fg/μL โดยมี CV <15%

การทำซ้ำ	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	หมายถึง	ร้อยละ CV
ค่าการตรวจจับ (fg/μL)	29.51	30.02	30.13	30.16	27.99	31.01	31.05	30.95	31.02	29.86	30.17	3.15%

ตารางที่ 3 ผลลัพธ์การทำซ้ำ

3.3-2 ความแม่นยำระดับกลาง

นักทดลองสามคนทดสอบตัวอย่างมาตรฐาน DNA HEK293 อย่างอิสระที่ความเข้มข้นสูงและต่ำ ได้แก่ 300 pg/μL, 3 pg/μL และ 30 fg/μL และมีการจำลองสามครั้งสำหรับความเข้มข้นแต่ละระดับ และค่า CV ของข้อมูลทั้งเก้าที่ได้นั้นน้อยกว่า 15%

เอ็กซ์พี	ความเข้มข้นที่แท้จริง ความเข้มข้นเชิงทฤษฎี	ดีเอ็นเอ HEK293 (3G)
		300 pg/uL	3 pg/uL	30 กรัม/ไมโครลิตร
ประสบการณ์ 1	ความมุ่งมั่นที่ 1	319.58	3.026	32.02
	การตัดสินใจที่ 2	309.76	3.051	37.01
	การตัดสินใจที่ 3	309.24	3.067	36.03
Exp.2 ครั้งที่ 2	การตัดสินใจที่ 4	308.34	2.909	29.91
	ความมุ่งมั่นที่ 5	308.54	2.9	29.67
	การตัดสินใจที่ 6	305.83	2.921	28.85
Exp.3 ครั้งที่ 3	การตัดสินใจที่ 7	299.11	3.035	29.36
	ความมุ่งมั่นที่ 8	300.07	2.833	31.14
	ความมุ่งมั่นที่ 9	302.03	3.033	33.07
-	หมายถึง	306.95	2.975	31.90
-	ร้อยละ CV	2.03%	2.83%	9.26%

ตารางที่ 4 ผลลัพธ์ความแม่นยำระดับกลาง

3.4 ความเฉพาะเจาะจง

การรบกวนของ DNA จีโนมของเซลล์ที่ใช้กันทั่วไปในการผลิตยาชีวภาพได้รับการประเมินสำหรับการรบกวนกับรีเอเจนต์ตรวจจับ DNA HEK293 และกลุ่มการรบกวนทับซ้อนกับกลุ่มควบคุมและไม่พบการรบกวน (รูปด้านล่างแสดงข้อมูลการรบกวนของ DNA จีโนมของ CHO, E.coli และ Pichia Pastoris กับรีเอเจนต์ตรวจจับ DNA HEK293 ตามลำดับ)

รูปที่ 2 ผลการทดลองการรบกวน

3.5 ขีดจำกัดการวัดปริมาณ

ตรวจพบดีเอ็นเอ HEK293 ที่ความเข้มข้น 30 fg/μL, 20 fg/μL, 10 fg/μL และ 5 fg/μL โดยทำซ้ำ 10 ครั้งสำหรับแต่ละความเข้มข้น ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่า CV น้อยกว่า 20% ที่ความเข้มข้น 10 fg/μL ขึ้นไป นั่นคือ ขีดจำกัดของการวัดปริมาณของชุดตรวจจับดีเอ็นเอตกค้างของเซลล์โฮสต์ HEK293 (3G) อยู่ที่ 10 fg/μL

การทำซ้ำ รายการทดสอบ	ดีเอ็นเอ HEK293 (3G) (fg/μL)
	ปริมาณ	อัตราการคำนวณใหม่%
1	11.04	110.40%
2	9.97	99.70%
3	11.12	111.20%
4	11.07	110.70%
5	11.21	112.10%
6	9.93	99.30%
7	10.25	102.50%
8	10.16	101.60%
9	10.08	100.80%
10	10.11	101.10%
หมายถึง	10.49	-
ร้อยละ CV	5.14%	-

รูปที่ 3 ผลการทดสอบ qPCR DNA (3G) ของ HEK293 10fg/μL

3.6 ความแข็งแกร่ง

ชุดนี้ได้รับการทดสอบแล้วและเหมาะสำหรับแต่ไม่จำกัดเฉพาะเครื่องมือต่อไปนี้:

ผู้ขาย	แบบจำลองเครื่องมือ	ประสิทธิภาพการขยายสัญญาณ	อาร์2	ขีดจำกัดการวัดปริมาณ (fg/μL)	ร้อยละ CV
เทอร์โม	เอบีไอ 7500	102.84%	1	10	7%
เทอร์โม	เอบีไอ ควอนท์สตูดิโอ 5	104.70%	0.999	10	9%
เซี่ยงไฮ้หงสือ	สแลน	101.46%	0.999	10	8%

ตารางที่ 5 ผลการทดสอบความเหมาะสมของเครื่องมือ

3.7 ความเสถียร

3.7.1 ความเสถียรของการแช่แข็งและละลาย

ชุดตรวจจับ DNA ตกค้างของเซลล์โฮสต์ HEK293 (3G) ได้รับการทดสอบโดยการแช่แข็งและละลายซ้ำ 10 ครั้ง และประสิทธิภาพของชุดทดสอบไม่ได้รับผลกระทบ

ตัวบ่งชี้การทดสอบ เวลาของการแช่แข็งและละลาย	พารามิเตอร์	เวลา T0	แช่แข็ง-ละลาย 10 ครั้ง
พารามิเตอร์เส้นโค้งมาตรฐาน	ประสิทธิภาพการขยายสัญญาณ	99.34%	100.78%
	อาร์2	1	1
ขีดจำกัดการวัดปริมาณ (30 fg/μL)	ซีวี	11%	7%

ตารางที่ 6 การวิเคราะห์ผลเสถียรภาพของการแช่แข็งและละลาย

3.7-2 เสถียรภาพที่เร่งขึ้น

ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ HEK293 (3G) ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2~8°C เป็นเวลา 30 วันและ 37°C เป็นเวลา 14 วันตามลำดับ ประสิทธิภาพของชุดทดสอบไม่ได้รับผลกระทบแต่อย่างใด

ตัวบ่งชี้การทดสอบ ความเร่ง อุณหภูมิ และเวลา	พารามิเตอร์	เวลา T0	37℃ 7 วัน	37℃ 14 วัน
พารามิเตอร์เส้นโค้งมาตรฐาน	ประสิทธิภาพการขยายสัญญาณ	103.83%	101.58%	100.47%
	อาร์2	0.999	1	1
ขีดจำกัดการวัดปริมาณ (30 fg/μL)	ร้อยละ CV	8%	5%	5%

ตารางที่ 7 การวิเคราะห์ผลการวิเคราะห์เสถียรภาพเร่ง

3.8 ขีดจำกัดของช่องว่าง

ไม่มีการควบคุมเทมเพลต (NTC) เป็นการเจือจางเทมเพลตโดยมีการทำซ้ำค่า CT 96 ครั้ง >32 (บวกกับเส้นเกณฑ์การสอบเทียบ ROX ที่ตั้งเป็น 0.06)

รูปที่ 4 ผลการทดลอง NTC

4. 4-อ้างอิง

4.1 คณะกรรมการเภสัชตำราจีน (ChPC) เภสัชตำราแห่งสาธารณรัฐประชาชนจีน (เล่มที่ 3) [S] ปักกิ่ง: สำนักพิมพ์วิทยาศาสตร์การแพทย์และเทคโนโลยีจีน, หน้า 542-543, 2020

4.2 NMPA, 2007: หลักการทั่วไปสำหรับการทบทวนทางเทคนิคของการตรวจสอบวิธีการวิเคราะห์สำหรับการควบคุมคุณภาพของผลิตภัณฑ์ทางชีวภาพ

4.3 ICH(2022)《การตรวจสอบวิธีการวิเคราะห์ Q2》 ฉบับร่าง

ข้อมูลการสั่งซื้อ