CHO โฮสต์เซลล์ DNA Detection Detection Kit (3G) รายงานการตรวจสอบความถูกต้อง

โช ชุดตรวจหาสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ (3จี-

สรุปคุณสมบัติ (หมายเลขหมวดหมู่: 41332อีเอส60)

1. พื้นหลัง

ข้อมูลสรุปในรายงานนี้ดำเนินการโดย Yeasen เทคโนโลยีชีวภาพเพื่อ CHO ผลิตภัณฑ์ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ (3G) ข้อมูลสรุปมีไว้สำหรับการอ้างอิงของผู้ใช้เท่านั้น และผู้ใช้จำเป็นต้องตรวจสอบสารตกค้างของเซลล์โฮสต์ วิธีการตรวจดีเอ็นเอโดยใช้ตัวอย่างของตนเองเพื่อยืนยันว่าวิธีการดังกล่าวสามารถตอบสนองความต้องการของผู้ใช้ได้ ห้องปฏิบัติการทั้งหมดที่ใช้ชุดตรวจนี้ขอแนะนำให้ตรวจสอบพารามิเตอร์ต่อไปนี้: ความเป็นเส้นตรง ช่วง ความแม่นยำ ความแม่นยำ ขีดจำกัดการวัดปริมาณ ความจำเพาะ และความแข็งแกร่ง

Yeasen เทคโนโลยีชีวภาพสามารถจัดทำรายงานคุณสมบัติโดยละเอียดสำหรับชุดนี้ได้ หากผู้ใช้ใช้รายงานนี้ แสดงเฉพาะความเหมาะสม (ซึ่งรวมถึงความแม่นยำ ความแม่นยำ และความจำเพาะ) ควรได้รับการตรวจสอบ

2. วัสดุและวิธีการทดลอง

2.1 โช ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ (3G) ผู้จำหน่าย: Yeasen, รหัสสินค้า: 41332ES60.

2.2 ชุดเตรียมตัวอย่าง DNA ตกค้างแบบแม่เหล็ก MolPure ผู้จำหน่าย: Yeasen, หมายเลขแคตตาล็อก: 18461ES60.

2.3 ข้อมูลต้นฉบับ: บันทึกเวอร์ชันอิเล็กทรอนิกส์ไว้ใน 'รายงานการทดลอง' ไฟล์ย่อยของไฟล์หลัก โช ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ (3G)

2.4 วิธีการ: วัสดุและวิธีการดำเนินการที่ใช้ในการทดลองนั้นผลิตหรือกำหนดขึ้นโดยพื้นฐานแล้ว Yeasen เทคโนโลยีชีวภาพ ซึ่งได้รับการประเมินและตรวจสอบมาเป็นเวลานาน การพัฒนาและการผลิตชุดอุปกรณ์ ปฏิบัติตามระบบ ISO 13485

3. เนื้อหาและผลลัพธ์ของคุณสมบัติ

3.1 ระยะการตรวจจับ

ช่วงเชิงเส้นของชุดทดสอบคือ 3 fg/μL~300 pg/μL พร้อม R²=1 และประสิทธิภาพการขยายคือ 99.09% โดยที่ CV<15% สำหรับการทดสอบความเข้มข้นแต่ละครั้ง

รูปที่ 1 กราฟมาตรฐาน qPCR ของ CHO DNA (3G)

3.2 ความแม่นยำ

3.2-1 อาร์การอนุรักษ์สิ่งแวดล้อม

3.2.1.1 การทดลองการกู้คืนสไปค์ตัวอย่างเปล่า

ตัวอย่างของ CHO มาตรฐาน DNA ที่ความเข้มข้นสูงและต่ำ: 30 พิกกรัมต่อไมโครลิตร 300 fg/μL และ 3 fg/μL ได้รับการเตรียมตามลำดับ และทดสอบหลังจากการสกัดโดยใช้ Magnetic Bead Method for Residual DNA Sample Pre-treatment Kit (3 มีการดำเนินการจำลองการสกัดสำหรับตัวอย่างแต่ละตัวอย่าง และมีการดำเนินการจำลองการทดสอบ 3 ครั้งสำหรับการสกัดแต่ละครั้ง และมีการวิเคราะห์การกู้คืนตัวอย่างและ CV

สำหรับตัวอย่าง DNA ที่มีความเข้มข้นต่างกัน การกู้คืนจะอยู่ในช่วง 70% ถึง 130% และ CV ทั้งหมดนั้นน้อยกว่า 20%

ประเภทตัวอย่าง	ความเข้มข้นเชิงทฤษฎี	สารสกัด 1 ค่าเฉลี่ย	สารสกัด 2 ค่าเฉลี่ย	สารสกัด 3 ค่าเฉลี่ย	ความเข้มข้นเฉลี่ย	ซีวี	การกู้คืน
ตัวอย่างว่างเปล่า	-	-	-		-	-	-
ตัวอย่างการกู้คืน 1	30 pg/μL	27.07	27.51	28.27	27.62	2.20%	92.06%
ตัวอย่างการกู้คืน 2	300 ฟก./ไมโครลิตร	285.53	301.25	295.71	294.16	2.71%	98.05%
ตัวอย่างการกู้คืน 3	3 กรัม/ไมโครลิตร	3.50	3.54	3.31	3.45	3.56%	115.00%

ตาราง 1 การกู้คืนตัวอย่างเปล่าแบบสไปค์

3.2.1.2 การทดลองจำลองการกู้คืนตัวอย่าง

ตัวอย่างที่มีความเข้มข้นเท่ากัน (300 fg/μL ของ CHO DNA) ถูกสกัด (ทำซ้ำการสกัด 3 ครั้งสำหรับแต่ละตัวอย่าง และทำการจำลองการทดสอบ 3 ครั้งสำหรับการสกัดแต่ละครั้ง) ด้วยสารละลายพื้นหลัง 5 ชนิดที่แตกต่างกัน (โปรตีนสูง กรดนิวคลีอิกสูง pH สูงและต่ำ เกลือสูง) จากนั้นจึงวิเคราะห์การกู้คืนตัวอย่างและ CV

การกู้คืนตัวอย่าง DNA จากโซลูชันพื้นหลังที่แตกต่างกันมีช่วงตั้งแต่ 70% ถึง 130% โดยที่ CV ทั้งหมดน้อยกว่า 20%

ประเภทตัวอย่าง	ความเข้มข้นเชิงทฤษฎี	สารสกัด 1 ค่าเฉลี่ย	สารสกัด 2 ค่าเฉลี่ย	สารสกัด 3 ค่าเฉลี่ย	ความเข้มข้นเฉลี่ย	ซีวี	การกู้คืน
ตัวอย่างพื้นฐาน	-	-	-		-	-	-
โปรตีนสูง	300 กรัม/ไมโครลิตร	302.29	332.86	342.76	325.97	6.47%	108.66%
กรดนิวเคลียร์สูง		284.47	290.66	308.76	294.63	4.28%	98.21%
เกลือสูง		272.96	286.25	312.91	290.71	7.00%	96.90%
ค่า pH สูง		296.04	320.58	324.56	313.72	4.92%	104.57%
ค่า pH ต่ำ		314.77	327.89	340.26	327.64	3.89%	109.21%

ตารางที่ 2 ตัวอย่างพื้นฐานในการฟื้นตัวจากการสไปก์

3.3 ความแม่นยำ

3.3.1 ความสามารถในการทำซ้ำ

ทำซ้ำการทดสอบ 10 ครั้งสำหรับมาตรฐาน CHO DNA ที่ความเข้มข้น 3 fg/μL โดยมี CV <15%

การทำซ้ำ	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	หมายถึง	ร้อยละ CV
ค่าการตรวจจับ (fg/μL)	3.13	3.26	2.89	3.16	2.95	2.87	2.88	2.75	2.87	3.15	2.99	5.65%

ตารางที่ 3 ผลลัพธ์การทำซ้ำ

3.3-2 ความแม่นยำระดับกลาง

นักทดลองสามคนทดสอบตัวอย่างมาตรฐาน DNA ของ CHO อย่างอิสระที่ความเข้มข้นสูงและต่ำ ได้แก่ 300 pg/μL, 3 pg/μL และ 3 fg/μL และมีการจำลองสามครั้งสำหรับความเข้มข้นแต่ละระดับ และ CV ของข้อมูลทั้งเก้าที่ได้นั้นน้อยกว่า 15%

เอ็กซ์พี	ความเข้มข้นที่แท้จริง ความเข้มข้นเชิงทฤษฎี	ซีโอ ดีเอ็นเอ (3G)
		300 pg/uL	3 pg/uL	3 กรัม/ไมโครลิตร
ประสบการณ์ 1	ความมุ่งมั่นที่ 1	302.63	2.97	3.40
	การตัดสินใจที่ 2	294.54	3.01	3.14
	การตัดสินใจที่ 3	287.67	2.99	3.01
เอ็กซ์พี2	การตัดสินใจที่ 4	292.27	2.92	3.47
	ความมุ่งมั่นที่ 5	299.61	2.90	2.82
	การตัดสินใจที่ 6	305.73	2.93	2.90
Exp.3 ครั้งที่ 3	การตัดสินใจที่ 7	301.06	3.17	3.15
	ความมุ่งมั่นที่ 8	299.17	3.00	3.21
	ความมุ่งมั่นที่ 9	290.66	2.90	3.05
-	หมายถึง	297.04	2.98	3.13
-	ร้อยละ CV	2.03	2.80	6.85

ตารางที่ 4 ผลลัพธ์ความแม่นยำระดับกลาง

3.4 ความเฉพาะเจาะจง

การรบกวนของ DNA จีโนมของเซลล์ที่ใช้กันทั่วไปในการผลิตยาชีวภาพได้รับการประเมินสำหรับการรบกวนกับรีเอเจนต์ตรวจจับ DNA ของ CHO และกลุ่มการรบกวนทับซ้อนกับกลุ่มควบคุมและไม่พบการรบกวน (รูปด้านล่างแสดงข้อมูลการรบกวนของ DNA จีโนมของ Mouse, MDCK, HEK293 และ E.coli กับรีเอเจนต์ตรวจจับ DNA ของ CHO ตามลำดับ)

รูปที่ 2 ผลการทดลองการรบกวน

3.5 ขีดจำกัดการวัดปริมาณ

ตรวจพบ CHO DNA ที่ความเข้มข้น 3 fg/μL, 1 fg/μL, 0.5 fg/μL, 0.3fg/uL และ 0.1 fg/μL โดยทำซ้ำ 10 ครั้งสำหรับแต่ละความเข้มข้น ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่า CV น้อยกว่า 20% ที่ความเข้มข้น 0.3 fg/μL ขึ้นไป นั่นคือ ขีดจำกัดของการวัดปริมาณของชุดตรวจจับ CHO host DNA ตกค้าง (3G) อยู่ที่ 0.3 fg/μL

การทำซ้ำ รายการทดสอบ	ดีเอ็นเอของ CHO (3G) (fg/μL)
	ปริมาณ	อัตราการคำนวณใหม่%
1	0.28	93.33%
2	0.26	86.67%
3	0.32	106.67%
4	0.30	100.00%
5	0.33	110.00%
6	0.23	76.67%
7	0.29	96.67%
8	0.37	123.33%
9	0.31	103.33%
10	0.28	93.33%
หมายถึง	0.30	-
ร้อยละ CV	13.09%	-

รูปที่ 3. ผลการทดสอบ qPCR ของ CHO DNA (3G)

3.6 ขีดจำกัดการตรวจจับ

ตรวจพบ CHO DNA ที่ความเข้มข้น 0.3 fg/μL, 0.1 fg/μL, 0.05 fg/μL และ 0.01 fg/μL โดยทำซ้ำ 20 ครั้งสำหรับแต่ละความเข้มข้น ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่าอัตราการตรวจจับอยู่ที่ ≥19 (กล่าวคือ อัตราการตรวจจับอยู่ที่ ≥95%) ในหลุมทำซ้ำ 20 หลุมที่ความเข้มข้น 0.05 fg/μL ขึ้นไป นั่นคือ ขีดจำกัดการตรวจจับของชุดตรวจจับ DNA ตกค้างของเซลล์โฮสต์ CHO (3G) อยู่ที่ 0.05 fg/μL

รูปที่ 4 ผลการทดสอบ CHO DNA (3G) qPCR

3.7 ความแข็งแกร่ง

ชุดนี้ได้รับการทดสอบแล้วและเหมาะสำหรับแต่ไม่จำกัดเฉพาะเครื่องมือต่อไปนี้:

ผู้ขาย	แบบจำลองเครื่องมือ	ประสิทธิภาพการขยายสัญญาณ	อาร์2	ขีดจำกัดของการวัดปริมาณ	ซีวี	ขีดจำกัดการตรวจจับ	อัตราการตรวจจับ
เทอร์โม	เอบีไอ 7500	99.69%	1	0.3 กรัม/ไมโครลิตร	12.40%	0.05 กรัม/ไมโครลิตร	95.65%
เทอร์โม	เอบีไอ ควอนท์สตูดิโอ 5	99.26%	1	0.3 กรัม/ไมโครลิตร	15.30%	0.05 กรัม/ไมโครลิตร	100.00%
โรช	ไลท์ไซคเลอร์480	2.05%	0.978	0.3 กรัม/ไมโครลิตร	-	0.05 กรัม/ไมโครลิตร	-
เซี่ยงไฮ้หงสือ	สแลน	101.14%	0.999	0.3 กรัม/ไมโครลิตร	14.41%	0.05 กรัม/ไมโครลิตร	95.65%

ตารางที่ 5 ผลการทดสอบความเหมาะสมของเครื่องมือ

3.8 ความเสถียร

3.8.1 ความเสถียรของการแช่แข็งและละลาย

ชุดตรวจจับ DNA ตกค้างของเซลล์โฮสต์ CHO (3G) ได้รับการทดสอบโดยการแช่แข็งและละลายซ้ำ 10 ครั้ง และประสิทธิภาพของชุดทดสอบไม่ได้รับผลกระทบ

ตัวบ่งชี้การทดสอบ เวลาของการแช่แข็งและละลาย	พารามิเตอร์	เวลา T0	แช่แข็ง-ละลาย 10 ครั้ง
พารามิเตอร์เส้นโค้งมาตรฐาน	ประสิทธิภาพการขยายสัญญาณ	95.70%	98.62%
	อาร์2	1	1
ขีดจำกัดการวัดปริมาณ (0.3 fg/μL)	ซีวี	15.31%	17.16%
ขีดจำกัดการตรวจจับ (0.05 fg/μL)	อัตราการตรวจจับ	95.65%	100%

ตารางที่ 6 การวิเคราะห์ผลเสถียรภาพของการแช่แข็งและละลาย

3.7-2 เสถียรภาพที่เร่งขึ้น

ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ CHO (3G) ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2~8°C เป็นเวลา 30 วันและ 37°C เป็นเวลา 14 วันตามลำดับ ประสิทธิภาพของชุดทดสอบไม่ได้รับผลกระทบแต่อย่างใด

ตัวบ่งชี้การทดสอบ ความเร่ง อุณหภูมิ และเวลา	พารามิเตอร์	การทดลองที่ 1		การทดลองที่ 2
		เวลา T0	2~8℃ 30 วัน	เวลา T0	37℃ 14 วัน
พารามิเตอร์เส้นโค้งมาตรฐาน	ประสิทธิภาพการขยายสัญญาณ	100.53%	102.61%	101.76%	101.84%
	อาร์2	1	1	1	1
ขีดจำกัดการวัดปริมาณ (0.3 fg/μL)	ซีวี	17.16%	12.63%	16.27%	12.49
ขีดจำกัดการตรวจจับ (0.05 fg/μL)	อัตราการตรวจจับ	95.65%	100%	95.57%	100%

ตารางที่ 7 การวิเคราะห์ผลการวิเคราะห์เสถียรภาพเร่ง

3.9 ข้อจำกัดของช่องว่าง

3.9.1 ไม่มีการควบคุมเทมเพลต (NTC)

ไม่มีการควบคุมเทมเพลต (NTC) คือการเจือจาง DNA ด้วยการทำซ้ำ 96 ครั้งเพื่อทำการวิเคราะห์เชิงปริมาณ qPCR โดยค่า CT ทั้งหมดที่สูงกว่าหลุมจำลอง 96 หลุมที่ทดสอบมีค่า >40

รูปที่ 5 ผลการทดลอง NTC

3.9-2 ตัวอย่างการควบคุมการสกัดเชิงลบ (NCS)

ตัวอย่างควบคุมการสกัดเชิงลบ (NCS) คือการเจือจาง DNA จากนั้นจึงทำการสกัดก่อนโดยการบำบัดตัวอย่างก่อน จากนั้นจึงทำ qPCR โดยค่า CT ทั้งหมดที่สูงกว่าหลุมจำลอง 48 หลุมที่ทดสอบมีค่า >40

รูปที่ 6 เอ็นซีเอส ผลการทดลอง

4. 4-อ้างอิง

4.1 คณะกรรมการเภสัชตำราจีน (ChPC) เภสัชตำราแห่งสาธารณรัฐประชาชนจีน (เล่มที่ 3) [S] ปักกิ่ง: สำนักพิมพ์วิทยาศาสตร์การแพทย์และเทคโนโลยีจีน, หน้า 542-543, 2020

4.2 NMPA, 2007: หลักการทั่วไปสำหรับการทบทวนทางเทคนิคของการตรวจสอบวิธีการวิเคราะห์สำหรับการควบคุมคุณภาพของผลิตภัณฑ์ทางชีวภาพ

4.3 ICH(2022)《การตรวจสอบวิธีการวิเคราะห์ Q2》 ฉบับร่าง

ข้อมูลการสั่งซื้อ