--
Sự liên kết của Fluorescein-dUTP với DNA bị cắt bởi TdT transferase là một trong những phương pháp phổ biến nhất để phát hiện apoptosis, ví dụ Bộ dụng cụ chết tế bào tại chỗ của Roche dựa trên nguyên tắc này. Hoạt động của TdT transferase trong sản phẩm ảnh hưởng trực tiếp đến hiệu quả đánh dấu.
Hiện nay, có hơn 120 nhóm nghiên cứu đang sử dụng sản phẩm này và đã công bố nhiều bài báo tiếng Anh trên các tạp chí uy tín như Theranostics và EMBO Molecular Medicine.
Cơ chế phát hiện
Ở giai đoạn cuối của quá trình apoptosis, các đứt gãy mạch đôi hoặc mạch đơn của DNA nhiễm sắc thể tạo ra một số lượng lớn đầu 3-OH dính và dưới tác động của quá trình chuyển đầu cuối deoxyribonucleotide (TdT), dUTP được gắn fluorescein/enzyme liên kết với đầu cuối 3 của DNA, do đó có thể phát hiện apoptosis thông qua phát hiện huỳnh quang, được gọi là đánh dấu đầu nick qua trung gian deoxyribonucleotide terminal transferase. Phương pháp này được gọi là Đánh dấu đầu nick qua trung gian Terminal-Deoxynucleotidyl Transferase (TUNEL) và nguyên tắc được thể hiện trong Hình 1.
Hình 1: Sơ đồ của Terminal-Deoxynucleotidyl Transferase Mediated Nick End Labeling (TUNEL)
Tính năng sản phẩm
- Phạm vi ứng dụng rộng rãi
Có thể sử dụng cho các phần mô nhúng parafin, phần mô đông lạnh, tế bào nuôi cấy và tế bào phân lập từ mô.
- Độ nhạy phát hiện cao
Có thể phát hiện một lượng rất nhỏ tế bào chết theo chương trình.
- Độ nhiễu nền thấp
Tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu cao.
- Tính linh hoạt của quan sát
Quan sát bằng kính hiển vi huỳnh quang, phát hiện dòng chảy.
Trình bày dữ liệu
1、Xét nghiệm Tunel tiền mỡ ở chuột (3T3-L)
Hình 2: Phát hiện apoptosis 3T3-L tiền tế bào mỡ ở chuột. Hàng đầu tiên biểu thị kiểm soát âm tính và hàng thứ hai biểu thị kiểm soát dương tính. Thuốc thử phát hiện: Cat No. 40306 Bộ phát hiện apoptosis TUNEL (FITC)
2、Phát hiện đường hầm mẫu phần parafin
Hình 3: LY3009120 dùng riêng lẻ hoặc kết hợp với Vemurafenib và Obatoclax có hiệu quả làm chậm ung thư tuyến giáp trong mô hình khối u ghép dưới da. IF=8.8. Loại mẫu: mô khối u nhúng parafin (lấy từ chuột không lông). Thuốc thử phát hiện: Bộ phát hiện apoptosis TUNEL số Cat 40307 (Alexa Fluor 488).
3、Phát hiện đường hầm của các tế bào bò
Hình 4: Tác dụng của kẽm sulfat đối với quá trình apoptosis của tế bào nội mô ở các phân nhóm khác nhau. Loại mẫu: HUVEC (tế bào nội mô tĩnh mạch rốn người). Thuốc thử phát hiện: Bộ phát hiện apoptosis TUNEL số 40308 (Alexa Fluor 640)
4、Phân tích dòng chảy tế bào để phát hiện apoptosis
Hình 5: Xử lý PA có thể làm giảm hiệu quả sự xuất hiện của apoptosis trong quá trình tái lập trình. IF=3.7. Loại mẫu: Tế bào iPS. Thuốc thử phát hiện: Bộ phát hiện apoptosis TUNEL số Cat. 40307 (Alexa Fluor 488).
Trích dẫn tài liệu tham khảo
[1] Li C, Wang Q, Gu X, et al. Nanocomposite Se@SiO2 xốp thúc đẩy quá trình di chuyển và biệt hóa tạo xương của tế bào gốc trung mô tủy xương chuột để đẩy nhanh quá trình lành xương gãy ở mô hình chuột[J].Tạp chí Y học Nano Quốc tế, 2019, 14: 3845. (NẾU 4.76)
[2] Miao T, Qian L, Yu F, et al. Tác dụng bảo vệ của hydroxysafflor yellow an đối với các tổn thương tế bào nội mô động mạch vành của con người do lipoprotein mật độ thấp bị oxy hóa cao gây ra[J]. Phát triển, 2019, 22: 581-589.(NẾU 6.208)
[3] Wen Y, Liu G, Zhang Y, et al. MicroRNA-205 có liên quan đến rối loạn cương dương do bệnh tiểu đường gây ra thông qua việc điều hòa giảm thụ thể androgen[J]. Tạp chí y học tế bào và phân tử, 2019, 23(5): 3257-3270.(NẾU 4.41)
[4] Xu T, Ding W, Ao X, et al. ARC điều chỉnh hoại tử theo chương trình và tổn thương do thiếu máu cục bộ/tái tưới máu cơ tim thông qua ức chế mở mPTP[J]. Redox Biology, 2019, 20: 414-426.(NẾU 8.37)
[5] Li P, Hao L, Guo YY, et al. Chloroquine ức chế quá trình tự thực và làm suy yếu rối loạn chức năng ty thể và apoptosis ở tế bào thần kinh chuột thiếu oxy[J]. Khoa học sự sống, 2018, 202: 70-77.(NẾU 3.40)
[6] Chen H, Guan B, Chen X, et al. Baicalin làm giảm sự phá vỡ hàng rào máu não và chuyển đổi xuất huyết và cải thiện kết quả thần kinh ở chuột đột quỵ thiếu máu cục bộ với điều trị t-PA chậm trễ: sự tham gia của con đường ONOO−-MMP-9[J]. Nghiên cứu đột quỵ chuyển dịch, 2018, 9(5): 515-529.(NẾU 4.87)
[7] Liu Q, Qian Y, Li P, et al. Các hiệu ứng điều trị kết hợp của các vi cầu đồng sunfua đa chức năng được gắn nhãn 131iodine trong điều trị ung thư vú[J]. Acta Pharmaceutica Sinica B, 2018, 8(3): 371-380.(NẾU 6.88)
[8] Han YQ, Ming SL, Wu HT, et al. Việc loại bỏ myostatin gây ra chứng apoptosis trong các tế bào ung thư cổ tử cung của con người thông qua việc tạo ra các loài oxy phản ứng tăng cao[J]. Redox Biology, 2018, 19: 412-428.(NẾU 8.37)
[9] Wang S, Xu Y, Weng Y, et al. Astilbin làm giảm độc tính thận do cisplatin gây ra thông qua việc giảm stress oxy hóa và viêm[J]. Độc chất học thực phẩm và hóa chất, 2018, 114: 227-236.(NẾU 3.78)
[10] Liu L, Pang XL, Shang WJ, et al. MicroRNA-181a biểu hiện quá mức làm giảm xơ cứng cầu thận và tổn thương biểu mô ống thận ở chuột mắc bệnh thận mãn tính thông qua việc điều hòa giảm con đường TLR/NF-κB bằng cách liên kết với CRY1[J]. Y học phân tử, 2018, 24(1): 49.(NẾU 3.46)
[11] Li G, Yin Q, Ji H, et al. Nghiên cứu về sàng lọc và tác dụng chống khối u của peptide phối tử đặc hiệu CD55 trong tế bào ung thư cổ tử cung[J]. Thiết kế, phát triển và điều trị thuốc, 2018, 12: 3899.(NẾU 3.27)
[12] Qian Y, Wang Y, Jia F, et al. Các hạt nanomicelle được kiểm soát bởi môi trường vi mô khối u có đặc tính AIE để thúc đẩy liệu pháp điều trị ung thư và theo dõi apoptosis[J]. Biomaterials, 2019, 188: 96-106.(NẾU 9,85)
[13] Li Z, Li D, Li Q, et al. Các hạt nano dẫn hướng corona liên hợp albumin miễn dịch thấp tại chỗ cho hóa trị liệu nhắm mục tiêu khối u[J]. Khoa học vật liệu sinh học, 2018, 6(10): 2681-2693.(NẾU 5.31)
[14] Liu Y, Zhi X, Hou W, et al. Các tập hợp tự lắp ráp các chấm carbon do ion Gd3+ gây ra được nạp chất nhạy sáng để tăng cường hình ảnh kép huỳnh quang/MRI và liệu pháp chống khối u[J]. Nanoscale, 2018, 10(40): 19052-19063.(NẾU 7.17)
[15] Liu Q, Qian Y, Li P, et al. 131 Vi cầu đồng sunfua gắn nhãn I để điều trị khối u gan thông qua thuyên tắc động mạch gan[J]. Theranostics, 2018, 8(3): 785.(NẾU 8.12)
Những câu hỏi thường gặp
Hỏi: Xuất hiện dấu hiệu huỳnh quang không đặc hiệu?
1) Bản thân mô/tế bào có mức độ hoạt động của nuclease hoặc polymerase cao, có thể dễ dàng dẫn đến sự xuất hiện của nhãn huỳnh quang không đặc hiệu, chẳng hạn như tế bào cơ trơn. Giải pháp là cố định tế bào hoặc mô ngay sau khi lấy chúng và cố định chúng đủ để ngăn các enzyme này gây ra kết quả dương tính giả.
2) Việc sử dụng chất cố định không phù hợp, chẳng hạn như một số chất cố định có tính axit, dẫn đến kết quả dương tính giả. Nên sử dụng chất cố định paraformaldehyde trung tính 4% mới pha.
3) Huỳnh quang không đặc hiệu cũng có thể xảy ra khi thời gian phản ứng của xét nghiệm TUNEL quá dài và bề mặt tế bào hoặc mô không thể giữ ẩm. Hãy cẩn thận kiểm soát thời gian phản ứng và đảm bảo dung dịch phản ứng xét nghiệm TUNEL phủ kín mẫu.
Hỏi: Nền huỳnh quang rất cao?
1) Các tế bào phân chia và sinh sôi với tốc độ cao, có mức độ phiên mã cao, đôi khi cũng xuất hiện các đứt gãy DNA trong nhân.
2) Tiếp xúc lâu dài với ánh sáng kích thích có thể dẫn đến kết quả dương tính giả.
Hỏi: Hiệu quả dán nhãn thấp?
1) Việc cố định bằng etanol hoặc metanol dẫn đến hiệu quả dán nhãn thấp.
2) Thời gian cố định quá dài, dẫn đến mức độ liên kết chéo quá cao. Nên giảm thời gian cố định.
3) Phần mô quá dày, khiến hiệu quả cố định không đạt yêu cầu, tốt nhất nên kiểm soát trong phạm vi 10 μm.
(4) Dập tắt huỳnh quang: Huỳnh quang sẽ bị dập tắt nghiêm trọng trong 10 phút ánh sáng bình thường. Giải pháp là tránh hoạt động ánh sáng.
Chi tiết sản phẩm
| Tên sản phẩm | Mã số mặt hàng | Đặc điểm kỹ thuật |
| Bộ phát hiện apoptosis Annexin V-FITC/7-AAD | 40311ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40302ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Bộ phát hiện apoptosis Annexin V-PE/7-AAD | 40310ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40303ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Bộ phát hiện apoptosis Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD | 40313ES60 | 100T |
| 40305ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40304ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Bộ phát hiện apoptosis Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD | 40312ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40306ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40307ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40308ES20/50/60 | 20T/50T/100T |