UCF.ME ™ Ultra-Clean RNase H: Cắt chính xác cho các thí nghiệm hiệu quả hơn!

Lý tưởng cho loại bỏ rRNA Và mRNA đóng nắp phát hiện hiệu quả!

RNase H chịu nhiệt, có khả năng chịu nhiệt đặc biệt, vượt trội hơn RNase H thông thường về cả tính đặc hiệu và hiệu quả!

Giới thiệu về RNase H

E. coli RNase H (E. coli Ribonuclease H) là một enzyme phân hủy thành phần RNA của các sợi lai RNA-DNA. Nó đóng vai trò quan trọng trong các quá trình như sao chép DNA, sửa chữa và phiên mã bằng cách cắt sợi RNA để duy trì tính toàn vẹn và ổn định của khuôn mẫu DNA. Điều này làm cho nó được sử dụng rộng rãi trong các thí nghiệm sinh học phân tử, bao gồm tổng hợp cDNA, loại bỏ rRNA và nghiên cứu can thiệp RNA. Tuy nhiên, E. coli RNase H có một số hạn chế:

• Nó có thể gây ra sự phân cắt không đặc hiệu của RNA hoặc DNA sợi đơn, làm giảm độ chính xác của kết quả thực nghiệm.
• Độ ổn định nhiệt kém khiến nó không thể duy trì hoạt động ở nhiệt độ cao, khiến nó không phù hợp với các thí nghiệm như phiên mã ngược ở nhiệt độ cao hoặc PCR đòi hỏi nhiệt độ cao.

Những thiếu sót này đã thúc đẩy các nhà nghiên cứu phát triển RNase H chịu nhiệt để mở rộng ứng dụng và nâng cao hiệu quả thử nghiệm.

Hình 1: Cơ chế RNase H

RNase H chịu nhiệt từ Thermus thermophilus

Thermostable RNase H, có nguồn gốc từ Thermus thermophilus, là một đồng đẳng của E. coli RNase H và có chức năng ribonuclease tương tự. Nó xác định chính xác và cắt hiệu quả các liên kết phosphodiester của chuỗi RNA trong các lai RNA:DNA trong khi vẫn bảo toàn tính toàn vẹn của chuỗi DNA. Phân tích cấu trúc chuyên sâu cho thấy rằng, mặc dù phân bố độ ổn định tổng thể của nó giống với E. coli RNase H, RNase H của T. thermophilus thể hiện sự cải thiện đáng kể về cả độ ổn định tổng thể và độ ổn định dư lượng cục bộ.

Với nhiệt độ hoạt động tối ưu trên 65°C, Thermostable RNase H mang lại tính đặc hiệu và hiệu quả cao hơn ở nhiệt độ phản ứng cao hơn, giảm thiểu sự phân cắt không đặc hiệu. Tính chất này mở ra tiềm năng to lớn của nó trong các thí nghiệm sinh học phân tử, bao gồm:

• loại bỏ rRNA
• Phát hiện tỷ lệ giới hạn mRNA
• Loại bỏ mRNA poly(A) lai với poly(dT)
• Loại bỏ mRNA trong quá trình tổng hợp sợi thứ hai của cDNA
• Cải thiện hiệu quả khuếch đại trong phiên mã ngược nhiệt độ cao, khuếch đại đẳng nhiệt và thí nghiệm PCR

Hình 2: So sánh cấu trúc ba chiều của RNase H chịu nhiệt và RNase H của E. coli ^[1]

UCF.ME™RNase H chịu nhiệt (Cat14545)

RNase H chịu nhiệt thường được sử dụng trong các thí nghiệm phát hiện tác nhân gây bệnh, chẳng hạn như loại bỏ rRNA trong giải trình tự metagenomic (mNGS) và giải trình tự nhắm mục tiêu tác nhân gây bệnh (tNGS). Axit nucleic của vật chủ còn sót lại hoặc vi khuẩn nền trong enzyme có thể làm giảm đáng kể độ chính xác phát hiện. Để giải quyết vấn đề này, Yeasen Tiểu sửcông nghệ giới thiệu UCF.ME™ RNase H chịu nhiệt (Cat14545), được phát triển bằng cách sử dụng UCF.ME độc quyền của nó™ công nghệ quy trình siêu sạch. Được sản xuất tại UCF.ME™ Cơ sở sản xuất enzyme phân tử siêu sạch, sản phẩm này trải qua quá trình kiểm soát chất lượng nghiêm ngặt—từ khâu lựa chọn vật liệu và quản lý môi trường đến tối ưu hóa và thử nghiệm quy trình—đảm bảo lượng gDNA và nuclease nền của vi khuẩn ở mức tối thiểu.Điều này đảm bảo kết quả thử nghiệm chính xác, đáng tin cậy và có thể tái tạo.

Ưu điểm của sản phẩm:

• Hoạt động cao và độ đồng nhất tuyệt vời giữa các mẻ
• Dư lượng gDNA của vật chủ cực thấp: <0,02 Bản sao/U
• Không có exonuclease, endonuclease hoặc RNase còn sót lại
• Độ ổn định vượt trội: Không mất hoạt động của enzyme đáng kể sau 32 ngày ở 4°C, 16 ngày ở 25°C hoặc 7 ngày ở 37°C

Trình diễn hiệu suất của UCF.ME™ RNase H chịu nhiệt (Cat14545)

1. Hoạt động cao và tính nhất quán của lô

Ba đợt UCF.ME™ RNase H chịu nhiệt được ủ với chất nền RNA:DNA và các thay đổi băng được phân tích thông qua điện di gel agarose. Kết quả chứng minh rằng chỉ 0,05 U enzyme này có thể cắt RNA hiệu quả trong chất nền RNA:DNA 20 pmol, với độ đồng nhất tuyệt vời theo từng mẻ, làm nổi bật tính ổn định và độ tin cậy của nó.

Hình 3: Kết quả phát hiện hoạt động của UCF.ME™ RNase H chịu nhiệt

Lưu ý: Điều kiện phản ứng: 50°C trong 20 phút; Chất nền RNA:DNA – 20 pmol

2. Dư lượng gDNA của vật chủ thấp: <0,02 bản sao/U

Kiểm tra dư lượng gDNA của vật chủ (E. coli) trên nhiều lô cho thấy cả ba lô của UCF.ME™ RNase H chịu nhiệt có hàm lượng dư lượng dưới 0,02 bản sao/U, đảm bảo độ tinh khiết cao và độ tin cậy trong thử nghiệm.

Hình 4: Kết quả dư lượng gDNA của vật chủ của UCF.ME™ RNase H chịu nhiệt

3. Không có dư lượng Exonuclease, Endonuclease hoặc RNase

25 U của UCF.ME ™ RNase H chịu nhiệt được ủ với chất nền axit nucleic và các thay đổi băng được đánh giá bằng điện di gel agarose. Không phát hiện thấy dư lượng exonuclease, endonuclease hoặc RNase trong bất kỳ lô nào trong ba lô, cung cấp sự đảm bảo mạnh mẽ về độ chính xác và độ tin cậy của kết quả.

Hình 5: Kết quả phát hiện dư lượng Exonuclease, Endonuclease và RNase trong UCF.ME™ RNase H chịu nhiệt

4. Độ ổn định tuyệt vời

UCF.ME™ RNase H chịu nhiệt đã được thử nghiệm độ ổn định: 32 ngày ở 4°C, 16 ngày ở 25°C và 7 ngày ở 37°C. Các phép đo hoạt động của enzyme không cho thấy sự suy giảm đáng kể, chứng tỏ độ ổn định đặc biệt của nó trong phạm vi nhiệt độ rộng và phù hợp để bảo quản lâu dài và trong nhiều điều kiện thử nghiệm khác nhau.

Hình 6: Kết quả ổn định tăng tốc của UCF.ME™ RNase H chịu nhiệt

Sản phẩm liên quan được đề xuất

Nguồn	Tên sản phẩm	Mèo Nhoặc.
T. nhiệt đới	UCF.ME™ RNase H chịu nhiệt	14545ES
E.vi khuẩn	RNase H	12906ES

Tài liệu tham khảo

1. Hollien J, Marqusee S. Phân bố cấu trúc của tính ổn định trong một enzyme ưa nhiệt [J]. Biên bản báo cáo của Viện Hàn lâm Khoa học Quốc gia, 1999, 96(24): 13674-13678.

2. Wolf EJ, Dai N, Chan SH. Đặc điểm chọn lọc của mRNA 5′End-Capping bằng cách làm giàu theo hướng đầu dò DNA với Endoribonuclease đặc hiệu vị trí [J]. [2025-03-03].

3. Gu H, Sun YH, Li XZ. Các phương pháp làm suy giảm rRNA mới để giải trình tự RNA tổng số và lập hồ sơ ribosome được phát triển cho các loài gia cầm [J]. Poultry Science, 2021, 100(7): 101321. DOI:10.1016/j.psj.2021.101321.