Với sự phát triển nhanh chóng của Protein Skhoa học, công nghệ tinh chế protein ngày càng đóng vai trò quan trọng trong lĩnh vực nghiên cứu sinh học và công nghiệp công nghệ sinh học. Là một kỹ thuật cốt lõi, nó liên quan đến việc tích hợp thông tin mã hóa của protein mục tiêu vào tế bào chủ thông qua các phương pháp kỹ thuật di truyền, để chúng có thể được kích thích sản xuất hiệu quả các protein cần thiết. Sau đó, một loạt các bước vận hành in vitro tinh vi được thực hiện để đạt được độ tinh khiết cao của protein. Tinh chế protein cho phép các nhà khoa học phân lập các loại protein riêng lẻ, điều này rất quan trọng đối với các nghiên cứu chuyên sâu về cấu trúc và chức năng của protein, phát triển thuốc mới, chẩn đoán bệnh và thúc đẩy ứng dụng công nghệ sinh học. Công nghệ này không chỉ đảm bảo tính chính xác của các thí nghiệm khoa học mà còn liên tục thúc đẩy sự phát triển của khoa học sự sống.
Hình 1. Sơ đồ sắc ký ái lực[1]
Trong lĩnh vực kỹ thuật protein, thẻ hợp nhất đóng vai trò là một công cụ mạnh mẽ, có thể tạo điều kiện cho nhiều mục đích thử nghiệm khác nhau bằng cách liên kết với các protein mục tiêu. Chức năng của các thẻ hợp nhất phổ biến được liệt kê trong bảng dưới đây để tham khảo. Tuy nhiên, một khi các thẻ này vẫn còn trên protein hợp nhất sau khi hoàn thành các chức năng phụ trợ ban đầu của chúng, chúng có thể có tác động tiêu cực đến các thí nghiệm tiếp theo, chẳng hạn như can thiệp vào các thí nghiệm miễn dịch học ở động vật hoặc ảnh hưởng đến hoạt động sinh học của protein. Do đó, điều quan trọng là phải loại bỏ các thẻ hợp nhất không cần thiết này để đảm bảo chức năng bình thường của protein và độ chính xác của các thí nghiệm.
Bảng 1. Giới thiệu về chức năng của thẻ hợp nhất chung và phương pháp phân cắt enzyme
| Thẻ hợp nhất | Kích cỡ (KDMột) | Chức năng | Các phương pháp cắt bằng enzym phổ biến |
| Của anh ấy | 0,84 | Có lợi cho quá trình thanh lọc, có khả năng thanh lọc các protein hòa tan/vật thể lẫn. | Protease TEV |
| Lá cờ | 1.01 | Mục đích protein hợp nhất với Fđộ trễ thẻ có thể được nhận dạng bởi kháng thể chống lại Fđộ trễ, do đó protein tổng hợp chứa Fđộ trễ thẻ có thể được phát hiện và xác định bằng Western Blot, ELISA và các phương pháp khác. | Enterokinase |
| Thuế hàng hóa và dịch vụ | 26 | Tăng cường độ hòa tan của protein, chỉ có khả năng làm sạch protein hòa tan và bảo vệ protein độc hại. | Thrombin |
| MBP | 44,4 | Tăng cường khả năng hòa tan protein và bảo vệ các protein độc hại. | Protease TEV |
| Nusa | 55 | Tăng cường khả năng hòa tan protein và bảo vệ các protein độc hại. | Thrombin |
| SUMO | 11.2 | Tăng cường khả năng hòa tan của protein, thúc đẩy quá trình phân giải protein thủy phân và cải thiện độ ổn định của protein. | Protease SUMO |
Hôm nay, chúng tôi rất vui mừng giới thiệu đến bạn một sản phẩm tiên tiến giúp loại bỏ các thẻ hợp nhất một cách hiệu quả và chính xác - UCF.METM Protease rTEV. Với quy trình thử nghiệm đơn giản và dễ vận hành, enzyme này có thể dễ dàng cắt các thẻ không cần thiết khỏi protein tổng hợp, do đó thu được protein mục tiêu có độ tinh khiết cao.
UCF.METM Protease rTEV
TEV Protease là một protease được sử dụng rộng rãi để cắt các thẻ hợp nhất protein tái tổ hợp, được biết đến với tính đặc hiệu vị trí cao. Nó nhận dạng nghiêm ngặt trình tự bảy axit amin EXXYXQ↓(G/S) và thực hiện cắt chính xác giữa glutamine và glycine hoặc serine. Trình tự bảy axit amin phổ biến nhất là Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly. Tính đặc hiệu này đảm bảo độ chính xác và hiệu quả trong quy trình xử lý protein.
Hình 2. Sơ đồ cơ chế hoạt động của protease TEV[2]
UCF.METM rTEV Protease là một loại protease tái tổ hợp đã được biến đổi gen và tinh chế tinh xảo. Nó không chỉ giữ lại toàn bộ hoạt động chức năng của enzyme TEV tự nhiên mà còn thể hiện tính ổn định và tính đặc hiệu tuyệt vời trong phạm vi nhiệt độ rộng hơn. Các dư lượng gDNA của vật chủ của tsản phẩm của anh ấy là rất thấp, đảm bảo hiệu quả cắt cao hơn của thẻ hợp nhất protein trong các ứng dụng thực tế và giảm hiệu quả nguy cơ đưa vào các chất dư thừa ngoại sinh. UCF.METM Protease rTEV thể hiện hoạt động tối ưu trong điều kiện pH 7,0 và 30°C. Tuy nhiên, nó vẫn duy trì hoạt động ngay cả trong phạm vi rộng của điều kiện với pH 6,0-8,5 và nhiệt độ 4-30°C, để đáp ứng các yêu cầu xử lý protein khác nhau. Điều đáng nói là UCF.METM Protease rTEV có thẻ His 6×6 ở đầu N, có thể được loại bỏ hiệu quả bằng nhựa Ni-NTA, do đó đạt được độ tinh sạch chính xác của protein mục tiêu.
Hiển thị hiệu suất
1. Hiệu quả cắt cao: Thẻ protein được cắt kỹ lưỡng hơn
Sử dụng protein tổng hợp (3 μg) chứa UCF.METM Vị trí cắt protease rTEV làm chất nền, UCF.METM Protease rTEV ở 10, 5 và 3 U được thêm vào tương ứng và phản ứng được thực hiện ở 30°C trong 1 giờ. Hiệu ứng cắt được phát hiện bằng điện di gel agarose. Kết quả cho thấy Ylàm dịu đicủa UCF.METM Protease rTEV có thể phân cắt chất nền một cách hiệu quả khi lượng đầu vào lớn hơn 3 U, với hiệu suất phân cắt >90%.
Hình 3. Kiểm chứng hoạt động phân cắt của UCF.METM Protease rTEV
2. Dư lượng gDNA của vật chủ thấp: Giảm hiệu quả nguy cơ đưa vào các dư lượng chất ngoại sinh
Bằng cách kiểm tra máy chủ (Vi khuẩn E. coli) các dư lượng gDNA trong các lô khác nhau của UCF.METM rTEV Protease, kết quả cho thấy dư lượng gDNA chủ của UCF.METM Protease rTEV thấp hơn nhiều so với <1 bản sao/U.
Hình 4. Kết quả của dư lượng gDNA chủ trong UCF.METM Protease rTEV
3. Điều kiện ứng dụng rộng rãi: Có khả năng đáp ứng các yêu cầu chế biến protein khác nhau.
Bằng cách xác minh hoạt động phân cắt của UCF.METM rTEV Protease trong các điều kiện khác nhau, kết quả cho thấy UCF.METM Protease rTEV có hoạt tính mạnh ở điều kiện 4-30°C, có thể đáp ứng các yêu cầu ứng dụng khác nhau của khách hàng.
| Thời gian phản ứng (giờ) | Hoạt động phân cắt ở nhiệt độ khác nhau (%) | |||
| 4℃ | 16℃ | 21℃ | 30℃ | |
| 1 | 34 | 58 | 56 | 85 |
| 2 | 58 | 80 | 78 | 90 |
| 3 | 71 | 99 | 99 | 99 |
| 3.5 | 84 | 99 | 99 | 99 |
Cólàm dịu đisản phẩm protein cắt thẻ hợp nhất được đề xuất của 's
| Sản phẩm Tên | Sản phẩm Nmàu nâu sẫm | |
| TEV Protease | UCF.METM Protease rTEV | 20427Tiếng Việt |
| Enterokinase | Enterokinase, Tái tổ hợp | 20395ES |
| Protease SUMO | Protease SUMO | 20410ES |
| Protease 3C | Protease 3C | 20409ES |
Tài liệu tham khảo：
[1] Parikh I, Cuatrecasas P. Sắc ký ái lực[J].Vox Sanguinis, 1972, 23(1-2):141-146.DOI:10.1159/000466530.
[2] Paththamperuma C, Page R C. Thử nghiệm khử huỳnh quang để xác định hoạt động của protease TEV[J]. Hóa sinh phân tích, 2022, 659: 114954.