- Lý lịch
Dữ liệu tóm tắt trong báo cáo này được thực hiện bởi
Dữ liệu tóm tắt chỉ để người dùng tham khảo và người dùng cần xác minh phương pháp mycoplasma bằng cách sử dụng mẫu của riêng họ để xác nhận phương pháp có thể đáp ứng các yêu cầu của người dùng. Tất cả các phòng thí nghiệm sử dụng bộ dụng cụ này được khuyến nghị xác minh các thông số sau: Giới hạn phát hiện, Độ đặc hiệu và Độ mạnh mẽ.
Nội dung xác thực:
| Hiệu suất | Tham số xác thực | Kết quả xác thực |
| Giới hạn phát hiện | Giới hạn phát hiện chủng Mycoplasma | Giới hạn phát hiện đối với 10 loại mycoplasma dược điển: 10 CFU/mL, mỗi loại được thử nghiệm 24 lần với tỷ lệ phát hiện ≥95%. |
| Tính đặc hiệu | Mẫu Ma trận nhiễu | Đã thử nghiệm 9 mẫu ma trận và dung dịch pha loãng DNA khác nhau, không phát hiện thấy mycoplasma. |
| Phản ứng chéo | Đã thử nghiệm 14 chủng và 6 tế bào kỹ thuật thường dùng trong dược phẩm sinh học, không phát hiện thấy mycoplasma. | |
| Độ bền | Độ ổn định khi đông lạnh-tan băng | Có thể chịu được 20 chu kỳ đóng băng-tan băng lặp lại mà không ảnh hưởng đến hiệu suất của bộ dụng cụ. |
| Độ ổn định gia tốc nhiệt | Không bị ảnh hưởng trong điều kiện 37°C trong 14 ngày và 4°C trong 30 ngày. | |
| Khả năng tương thích của thiết bị | Tương thích với ABI7500, ABI QuantStudio™5, Bio-Rad CFX96 và Roche LightCycler®480. | |
| Phạm vi phủ sóng | Phạm vi của các loại DNA Mycoplasma | So sánh cơ sở dữ liệu sử dụng trình tự rRNA 16S của mycoplasma bao gồm 183 loài trong lớp Mollicutes. |
- Vật liệu và phương pháp thí nghiệm
2.1 MycAwayTM Bộ phát hiện qPCR thời gian thực Mycoplasma (2G), Nhà cung cấp:
2.2 MolPureTM Bộ dụng cụ chuẩn bị mẫu DNA dư từ tính, Nhà cung cấp:
2.3 Các tiêu chuẩn độ nhạy Mycoplasma được mua từ Minerva Biolabs (MB), có các chủng từ Bộ sưu tập quốc gia về các nền văn hóa loại (NCTC). Các tiêu chuẩn độ nhạy là mycoplasma bất hoạt và được sử dụng để xác minh phương pháp khuếch đại axit nucleic (phương pháp qPCR/PCR) để phát hiện mycoplasma. Tổng cộng có 10 loại mycoplasma được mua bao gồm các yêu cầu của EP 2.6.7 và JP G3. Thông tin của các tiêu chuẩn như sau:
| Người bán | Số mèo | Số NCTC | ATCC KHÔNG. | Tên vật liệu |
| Phòng thí nghiệm sinh học Minerva (MB) | 102-1003 | 10129 | 23838 | 10CFU™ Tiêu chuẩn độ nhạy Mycoplasma arginini |
| 102-2003 | 10112 | 23714 | 10CFU™ Tiêu chuẩn độ nhạy Mycoplasma miệng | |
| 102-3003 | 10115 | 19610 | 10CFU™ Tiêu chuẩn độ nhạy Mycoplasma gallisepticum | |
| 102-4003 | 10119 | 15531 | 10CFU™ Tiêu chuẩn độ nhạy Viêm phổi do Mycoplasma | |
| 102-5003 | 10124 | 25204 | 10CFU™ Tiêu chuẩn độ nhạy Mycoplasma synoviae | |
| 102-6003 | 10117 | 19989 | 10CFU™ Tiêu chuẩn độ nhạy Mycoplasma lên men | |
| 102-7003 | 10130 | 17981 | 10CFU™ Tiêu chuẩn độ nhạy Mycoplasma hyorhinis | |
| 102-8003 | 10116 | 23206 | 10CFU™ Tiêu chuẩn độ nhạy Acholeplasma laidlawii | |
| 102-9003 | 10164 | 27556 | 10CFU™ Tiêu chuẩn độ nhạy Spiroplasma citri | |
| 102-11003 | 10113 | 23064 | 10CFU™ Tiêu chuẩn độ nhạy Mycoplasma nước bọt |
2.4 Dữ liệu gốc: phiên bản điện tử được ghi lại trong 'Báo cáo thử nghiệm' tập tin con của tập tin cha 'MycAwayTM Bộ phát hiện qPCR thời gian thực Mycoplasma (2G).
2.5 Phương pháp: Các vật liệu và phương pháp vận hành sử dụng cho thí nghiệm về cơ bản được sản xuất hoặc thiết lập bởi
- Nội dung và kết quả trình độ
3.1 Giới hạn phát hiện (LOD)
Chiết xuất axit nucleic cũng như phát hiện chủng chuẩn Mycoplasma 10 CFU/mL được thực hiện theo hướng dẫn cho chủng chuẩn cũng như hướng dẫn cho bộ dụng cụ chiết xuất và phát hiện. Tổng cộng có 24 xét nghiệm được thực hiện cho chủng chuẩn Mycoplasma 10 CFU/mL. Các mẫu NCS (mẫu đối chứng âm tính) và NTC (mẫu đối chứng không có mẫu) được thử nghiệm đồng thời trong mỗi thí nghiệm.
Kết quả cho thấy kết quả NCS và NTC đạt yêu cầu, tất cả 24 mẫu 10 CFU/mL đều có kết quả xét nghiệm dương tính, đạt yêu cầu có ít nhất 23 kết quả xét nghiệm dương tính trong tổng số 24 xét nghiệm.
| KHÔNG. | Tên vật liệu | Nồng độ chất lỏng của vi khuẩn |
| 1 | Mycoplasma arginini | 10 CFU/mL |
| 2 | Mycoplasma miệng | 10 CFU/mL |
| 3 | Mycoplasma gallisepticum | 10 CFU/mL |
| 4 | Viêm phổi do Mycoplasma | 10 CFU/mL |
| 5 | Mycoplasma synoviae | 10 CFU/mL |
| 6 | Mycoplasma lên men | 10 CFU/mL |
| 7 | Mycoplasma hyorhinis | 10 CFU/mL |
| 8 | Acholeplasma Lailawii | 10 CFU/mL |
| 9 | Spiroplasma citri | 10 CFU/mL |
| 10 | Mycoplasma nước bọt | 10 CFU/mL |
Bảng 1 Thông tin về các chủng đã được xác nhận
| 10 CFU/mL | Thí nghiệm 1 | Thí nghiệm 2 | Thí nghiệm 3 |
| Tỷ lệ phát hiện | 8/8 | 8/8 | 8/8 |
| Tổng cộng | 24/24 | ||
Bảng 2 Kết quả giới hạn phát hiện
3.2 Tính đặc hiệu
3.2.1 Phạm vi xét nghiệm Mycoplasma
Trình tự đầu dò mồi trong bộ dụng cụ được so sánh với bộ gen 16S rRNA trong cơ sở dữ liệu. Thông qua phân tích tin sinh học, người ta đã thu được MycAwayTM Bộ phát hiện Mycoplasma qPCR (Phương pháp thăm dò) của NextSense Biologicals có thể phát hiện ít nhất 183 loài Zooxanthellae, bao gồm 120 loài Mycoplasma, 9 loài Ureaplasma, 33 loài Spiroplasma và 7 loài Cholestrongyla, v.v.
3.2.2 Mẫu ma trận nhiễu
9 chất nền (MEM của Dulbecco, Môi trường F-10 của Ham, Môi trường M-199, Môi trường F-12K của Ham dành cho Kaighn, Môi trường RPMI-1640, Môi trường 5A của McCoy, Môi trường F-12K của Ham dành cho Kaighn+1,0 mM/L Glutamine, Môi trường L-15 LEIBOVITZ MEDTA +2.05 mM L-Glutamine, DMEM-môi trường chuẩn glucose thấp) được sử dụng làm mẫu để kiểm tra sự can thiệp của nền mẫu, kết quả cho thấy môi trường không gây ảnh hưởng đến thuốc thử của bộ dụng cụ.
3.2.3 Phạm vi phát hiện Flexibacteria
Cần phải chiết xuất và phát hiện mycoplasma bất hoạt (Mycoplasma arginini, Mycoplasma orale, Mycoplasma gallisepticum, Mycoplasma pneumoniae, Mycoplasma synoviae, Mycoplasma fermentans, Mycoplasma hyorhinis, Acholeplasma laidlawii, Spiroplasma citri, Mycoplasma salivarium) ở mức 10 CFU/mL cùng với xét nghiệm mẫu NCS và NTC.
Kết quả cho thấy không phát hiện NCS và NTC và kết quả âm tính; phát hiện cả 10 loài Mycoplasma và kết quả dương tính.
3.2.4 Phản ứng chéo
Đối với 14 chủng không phải vi khuẩn flexibacterial bao gồm Clostridium (Clostridium perfringens, Clostridium acetobutylicum), Lactobacillus (Lactobacillus acidophilus), Streptococcus (Streptococcus mutans, Streptococcus pneumoniae), một số vi sinh vật trực khuẩn-cầu khuẩn-nấm phổ biến khác (Staphylococcus epidermidis, Acinetobacter baumannii, Enterobacter aerogenes, Micrococcus garciniae, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonalbacterium leucocephala, Salmonella enterica enteritidis subsp. enterica, Bacillus subtilis, Bacillus subtilis và Bacillus sp. Bacillus cereus, Bacillus cereus) và sáu tế bào được thiết kế (HEK293, 293T, Vero, CHO, E.coli, SF9) đã được sử dụng để phát hiện mycoplasma bằng cách sử dụng MolPureTM Bộ dụng cụ xử lý mẫu DNA dư thừa bằng phương pháp hạt từ (chai) và MycAwayTM Bộ phát hiện Mycoplasma qPCR (Phương pháp thăm dò) (2G) và mỗi thí nghiệm được thực hiện đồng thời với thử nghiệm mẫu PCS, NCS và NTC.
Kết quả cho thấy kết quả PCS, NCS và NTC đều đạt yêu cầu; các mẫu thử nghiệm đều âm tính và không xảy ra phản ứng chéo.
3.3 Độ bền
3.3.1 Độ ổn định khi đóng băng-tan băng
Bộ xét nghiệm Mycoplasma đã được tiến hành thử nghiệm đông lạnh-rã đông trong điều kiện -25℃~-15℃, kết quả cho thấy bộ xét nghiệm có thể chịu được 20 lần đông lạnh-rã đông liên tục mà hiệu suất không bị ảnh hưởng.
3.3.2 Ổn định tăng tốc
Bộ phát hiện Mycoplasma được tăng tốc nhiệt ở 37℃ trong 14 ngày và ở 4℃ trong 30 ngày, kết quả cho thấy hiệu suất sản phẩm không bị ảnh hưởng.
3.3.3 Khả năng áp dụng của công cụ
Đối với bộ dụng cụ phát hiện mycoplasma, các nồng độ khác nhau của mẫu đối chứng dương tính và DNA Mycoplasma pneumoniae trong bộ dụng cụ được sử dụng làm mẫu để thử nghiệm và các thí nghiệm được thực hiện trên bốn thương hiệu và kiểu máy khác nhau, cụ thể là Thermo Scientific ABI7500, Thermo Scientific ABI Q5, Shanghai Hongshi SLAN-96S và Roche LightCycler®480.Các thí nghiệm được thực hiện trên các thiết bị qPCR của bốn thương hiệu và mẫu khác nhau, Shanghai Hongshi SLAN-96S và Roche LightCycler®480.
Kết quả cho thấy các mẫu cần thử nghiệm đã được phát hiện trên các thiết bị qPCR của các hãng sản xuất khác nhau và kết quả kiểm soát âm tính đã được xác nhận, hiệu suất của bộ dụng cụ không bị ảnh hưởng.
- 4.Thẩm quyền giải quyết
4.1 Phương pháp xét nghiệm Mycoplasma <3301>. Dược điển Trung Quốc, Phần III [S]. Bắc Kinh: Nhà xuất bản Khoa học và Công nghệ Trung Quốc, 2020: 542-543.
4.2 Hướng dẫn xác nhận phương pháp phân tích <9101>. Dược điển Trung Quốc, Phần III [S]. Bắc Kinh: Nhà xuất bản Khoa học và Công nghệ Trung Quốc, 2020: 682.
4.3 Hướng dẫn xác nhận các phương pháp thay thế để thử nghiệm vi sinh dược phẩm <9201>. Dược điển Trung Quốc, Phần III [S]. Bắc Kinh: Nhà xuất bản Khoa học và Công nghệ Trung Quốc, 2020: 684.
4.4 Mycoplasmas. Dược điển Châu Âu[S]. Ấn bản lần thứ 10, năm 2020: Mục 2.6.7, 194-199.
4.5 Kiểm tra Mycoplasma đối với chất nền tế bào được sử dụng để sản xuất các sản phẩm công nghệ sinh học/sinh học <G3-14-170>. Dược điển Nhật Bản[S]. Ấn bản lần thứ 18, 2021: 2678-2682.
4.6 Erica J. Fratz-Berilla, Phillip Angart, Ryan J.Graham, et al. Tác động đến các thuộc tính chất lượng sản phẩm của kháng thể đơn dòng được sản xuất trong nuôi cấy tế bào CHO trong các sự kiện nhiễm mycoplasma cố ý. Công nghệ sinh học và Kỹ thuật sinh học. 2020;117(9): 2802-2815.
4.7 Dmitriy V. Volokhov, Laurie J Graham, Kurt A Brorson, Vladimir E Chizhikov. Kiểm tra Mycoplasma của chất nền tế bào và chất sinh học: Đánh giá các kỹ thuật phi vi sinh thay thế. Mol Cell Probes. 2011 tháng 4-tháng 6; 25 (2-3): 69-77.
4.8 AL Ingebritson, CP Gibbs, C. Tong, GB Srinivas. Một phương pháp phát hiện PCR để thử nghiệm nhiễm Mycoplasma trong vắc-xin thú y và các sản phẩm sinh học. Lett trong Applied Microbiology. 2015 tháng 2;60(2):174-180.
Thông tin đặt hàng
| Sự miêu tả | Mã số sản phẩm |
| 18461ES | |
| Bộ phát hiện Mycoplasma qPCR MycAway™ (2G) | 40619ES |