—Thắp sáng màng thấm của bạn, ngay trong tầm tay bạn!
Thuốc thử ECL, được gọi là chất nền phát quang hóa học cho peroxidase cải ngựa (HRP), hiện là thuốc thử nhạy nhất được sử dụng trong phát hiện Western blotting. Các vấn đề phổ biến với thuốc thử ECL trên thị trường bao gồm dập tắt, nền cao, không ổn định và khó phát hiện protein có hàm lượng thấp, có thể ảnh hưởng đến kết quả thử nghiệm cuối cùng.
Tính năng sản phẩm
- Độ nhạy tuyệt vời — Phát hiện kháng nguyên ở mức picogram đến femtogram thấp.
- Tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu cao hơn — Chất nền phát quang chính xác giúp giảm tiếng ồn xung quanh.
- Hiệu quả kháng thể hơn — Hệ thống chất nền được tối ưu hóa để có ái lực liên kết kháng thể cao hơn.
- Tỷ lệ chi phí-hiệu suất cao — Hiệu suất cao hơn với mức giá thấp hơn.
- Độ ổn định tuyệt vời — Chất oxy hóa mới đảm bảo khả năng bảo quản ổn định ở nhiệt độ 4°C trong thời gian lên đến một năm.
Nguyên lý sản phẩm
Nguyên lý cốt lõi của phát hiện thuốc thử ECL là sự phát quang từ các phản ứng oxy hóa: Luminol, thành phần chính của chất nền phát quang, bị oxy hóa bởi H2O2 trong điều kiện kiềm thông qua quá trình xúc tác của peroxidase cải ngựa (HRP), tạo thành chất trung gian trạng thái kích thích của axit 3-amino-phthalic. Khi trở về trạng thái cơ bản, các photon được phát ra, với bước sóng phát xạ tối đa là 425 nm. Các tín hiệu photon này có thể được thu lại bằng phim X-quang hoặc thiết bị chụp ảnh CCD.
Hướng dẫn lựa chọn
Vậy, bạn nên chọn sản phẩm nào cho thí nghiệm của mình?
Bảng 1.Hướng dẫn lựa chọn thuốc thử ECL
| | ECL nâng cao Loại nâng cao | Siêu ECL Loại siêu nhạy | Siêu Dura Loại bền | MaxiSignal Loại độ nhạy cực cao |
| Mẫu áp dụng | Mục tiêu có độ phong phú cao, mẫu protein thường quy | Mục tiêu có số lượng ít, mẫu hạn chế | Mục tiêu có số lượng ít, mẫu hạn chế | Mục tiêu có số lượng cực kỳ ít, mẫu vật quý hiếm |
| Độ nhạy phát hiện | Mức picogram trung bình | Mức picogram thấp | Mức femtogram trung bình | Mức femtogram thấp |
| Thời lượng tín hiệu | < 2 giờ | < 12 giờ | < 24 giờ | < 8 giờ |
| Hệ thống phát hiện áp dụng | Tất cả các thuốc thử đều phù hợp với phim X-quang, thiết bị chụp ảnh CCD | |||
| Nồng độ pha loãng kháng thể chính | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10.000 | 1:1000-1:50.000 | 1:5000-1:100.000 |
| Nồng độ pha loãng kháng thể thứ cấp | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10.000
| 1:50.000-1:250.000 | 1:100.000-1:500.000 |
| Màng được đề xuất | Màng NC | Màng NC hoặc màng PVDF | Màng NC hoặc màng PVDF | Màng NC hoặc màng PVDF |
| Độ ổn định lưu trữ | Nhiệt độ phòng trong 1 năm | 4°C trong 1 năm, nhiệt độ phòng trong nửa năm | ||
| Thuận lợi | Tín hiệu mạnh nhất trong cùng mức độ nhạy cảm | Tỷ lệ chi phí-hiệu suất cao nhất, phù hợp với hầu hết các thí nghiệm WB | Thời lượng tín hiệu dài nhất, cực kỳ phù hợp cho nhiều lần phơi sáng | Độ nhạy tuyệt vời, cực kỳ thích hợp để phát hiện protein vết |
Lưu ý: Nồng độ pha loãng kháng thể được khuyến nghị dựa trên nồng độ kháng thể dự trữ là 1 mg/mL.
Ứng dụng sản phẩm
Hình 1. So sánh hiệu ứng phát hiện giữa
Hình 2. So sánh hiệu ứng phát hiện giữa
Hình 3.So sánh hiệu ứng phát hiện giữa
Văn học đã xuất bản
[1]Wang Z, Lu Z, Lin S, et al. Các tế bào B biểu hiện Leucine-tRNA-synthase-2 góp phần vào khả năng trốn tránh miễn dịch của ung thư đại tràng. Miễn dịch. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF:43.474)
[2] Wu Z, Liu D, Pan D, et al. Cấu trúc và kỹ thuật của vi khuẩn Acidibacillus sulfuroxidans Cas12f1[J] thu nhỏ. Nature Catalysis, 2023, 6(8):695-709. DOI:10.1038/s41929-023-00995-4(IF:38)
[3] Yao J, Wu D, Zhang C, et al. Đại thực bào IRX3 thúc đẩy béo phì do chế độ ăn uống và viêm chuyển hóa. Nat Immunol. 2021;22(10):1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y (IF:25.606)
[4] He X, Li J, Zhou G, et al. Cổng nhịp điệu hồi hải mã và trí nhớ bằng tính dẻo của khớp thần kinh trong các tế bào thần kinh trung gian ức chế. Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)
Lợi thế về giá
Hình 7.So sánh giá của
Những câu hỏi thường gặp
| Các vấn đề gặp phải | Phân tích nguyên nhân | Giải pháp được đề xuất |
| Phim có hình ảnh ngược | Phim có hình ảnh ngược | Phim có hình ảnh ngược |
| Phim có các dải màu nâu hoặc vàng | ||
| Dập tắt huỳnh quang | Thời gian hoạt động quá dài, màng khô dần | Ngăn ngừa màng bị khô |
| Nhiễm bẩn màng bọc nhựa, chất hiện hình hoặc chất cố định | Phát triển thói quen thử nghiệm tốt | |
| HRP không đủ trong hệ thống phản ứng | Tăng vật liệu được dán nhãn HRP | |
| Không có băng tần hoặc tín hiệu yếu trên phim | Hiệu suất truyền tải thấp | Cải thiện hiệu quả chuyển giao, sử dụng Bút đánh dấu đã nhuộm trước để đánh giá |
| Kháng nguyên/kháng thể không đủ hoặc không phù hợp | Tăng lượng kháng nguyên/kháng thể hoặc chọn kháng nguyên/kháng thể thích hợp | |
| Các vấn đề về phim X-quang | Nếu phim X-quang hoàn toàn đen (không trong suốt) sau khi chiếu, điều đó có nghĩa là phim đã được chiếu hoàn toàn; hãy sử dụng phim X-quang mới | |
| Các vấn đề của nhà phát triển/người sửa lỗi | Phơi phim trước để kiểm tra; nếu có vấn đề, hãy thay thế bằng chất tráng phim/chất cố định phim mới | |
| HRP quá mức trong hệ thống phản ứng | Pha loãng vật liệu có nhãn HRP | |
| Nền tảng cao | Nồng độ kháng thể sơ cấp và thứ cấp quá cao | Giảm nồng độ kháng thể, kéo dài thời gian chặn |
| Kháng thể không được làm sạch kỹ lưỡng | Tăng số lần giặt | |
| Chặn không đầy đủ | Tối ưu hóa điều kiện chặn | |
| Sử dụng chất chặn sai | Sử dụng một tác nhân chặn khác | |
| Phơi sáng quá mức | Giảm thời gian phơi sáng | |
| Độ đặc hiệu kháng thể kém | Thay thế bằng kháng thể chất lượng cao | |
| HRP quá mức trong hệ thống phản ứng | Pha loãng vật liệu có nhãn HRP | |
| Các dải có chỗ trống | Nồng độ kháng nguyên và kháng thể thứ cấp cao | Pha loãng mẫu và chạy lại gel, hoặc làm lạnh dung dịch tạo màu đã trộn và bôi lên màng để phát triển nhanh ngay lập tức. |
| Hình dạng dải không đều | Bọt khí trong quá trình chuyển hoặc hydrat hóa không đều với methanol (đối với màng PVDF) | Tối ưu hóa điều kiện truyền tải. |
| Điểm phim | Tổng hợp vật liệu được gắn nhãn HRP | Lọc vật liệu được gắn nhãn HRP bằng màng 0,2μm |
| Các dải không cụ thể | HRP quá mức trong hệ thống phản ứng | Pha loãng vật liệu có nhãn HRP |
| SDS gây ra sự liên kết protein không đặc hiệu | Không sử dụng SDS trong quy trình thử nghiệm | |
| Độ đặc hiệu kháng thể kém | Thay thế bằng kháng thể chất lượng cao | |
| Chặn không đủ | Tăng thời gian chặn hoặc sử dụng tác nhân chặn khác |
Thông tin đặt hàng
| Tên sản phẩm | Số sản phẩm | Đặc điểm kỹ thuật |
| Thuốc thử phát hiện Super ECL | 36208ES60/76 | 100mL/50mL |
| Bộ chất nền phát quang hóa học ECL nâng cao | 36222ES60/76 | 100mL/500mL |
| Chất nền SuperSignal SuperDura Extended Duration | 36223ES10/60/70/76 | 10mL/100mL/200mL/500mL |
| Chất nền độ nhạy tối đa SuperSignal MaxiSignal | 36224ES10/60/70/76 | 10mL/100mL/200mL/500mL |