Với sự phát triển nhanh chóng của glycoproteomics và nghiên cứu thuốc kháng thể, sự biến đổi glycosyl hóa cũng thu hút được nhiều sự chú ý. Sự tiếp xúc giữa các tế bào với nhau, và giữa các tế bào với mầm bệnh chủ yếu được hoàn thành thông qua sự tương tác của đường và protein, và glycosyl hóa quyết định các đặc tính bám dính của glycoconjugate. Trong IgG, glycosyl hóa liên kết N được bảo tồn tại Asn297 trong vùng Fc cũng rất quan trọng đối với hoạt động của nó. Ngoài ra, một số kháng thể cũng có thêm N-glycan, cùng với vị trí bảo tồn tại Asn297 trong vùng Fc, ảnh hưởng đến khả năng nhận diện, thời gian bán hủy và phản ứng miễn dịch của kháng thể.
Glycosyl hóa protein là một biến đổi sau dịch mã phức tạp liên quan đến sự kết nối của các chuỗi glycan tại các vị trí cụ thể trên protein. Tùy thuộc vào loại chuỗi glycan, glycoprotein được chia thành glycoprotein liên kết N, glycoprotein liên kết O, v.v.; hơn nữa, glycosyl hóa protein cũng bị ảnh hưởng bởi loại tế bào chủ và điều kiện lên men (như môi trường nuôi cấy, giá trị pH, nhiệt độ, v.v.). Do đó, glycoprotein thường có tính không đồng nhất về kiểu glycosyl hóa, bao gồm các vị trí glycosyl hóa, mức độ glycosyl hóa và cấu trúc cụ thể của chuỗi glycan, khiến cho việc phân tích chuỗi glycan và đặc điểm cấu trúc trở nên cực kỳ khó khăn. Để thu được lượng thông tin về cấu trúc chuỗi glycan tối đa, chiến lược chính của phân tích chuỗi glycan là trước tiên giải phóng các chuỗi glycan khỏi protein và sau đó tiến hành phân tích và đặc điểm chi tiết. Trong chiến lược này, một phương pháp khử glycosyl hóa hiệu quả, chính xác và ổn định là rất quan trọng.
Phương pháp dùng enzym hiện đang được sử dụng rộng rãi để khử glycosyl. Đối với glycan liên kết N, các enzyme thường được sử dụng bao gồm PNGase F, Endo H và Endo S.
Giới thiệu sản phẩm
PNGase F là phương pháp sử dụng enzym hiệu quả nhất để loại bỏ hầu hết các liên kết N oligosaccharides trong glycoprotein, có thể cắt các glycoprotein oligosaccharides phức hợp, lai và có hàm lượng mannose cao được kết nối bởi asparagine, đặc biệt loại bỏ các glycan liên kết N. Vị trí cắt là: liên kết amide giữa N-acetylglucosamine (GlcNAc) trong cùng và phần còn lại của asparagine, đồng thời chuyển đổi asparagine trên protein sau khi thủy phân bằng enzym thành axit aspartic.
Khi α1-6 fucose nằm ở lõi GlcNAc, PNGase F cũng có thể cắt; chỉ khi α1-3 fucose nằm ở lõi GlcNAc (thường gặp trong glycoprotein thực vật và côn trùng) thì PNGase F mới không thể cắt.
Công ty chúng tôi cung cấp thông thường PNGase F (Mã số #20407ES)，Tuy nhiên, phản ứng enzym PNGase F thông thường cần vài giờ để giải phóng kháng thể N-glycan và do ưu tiên giải phóng glycan, quá trình khử glycosyl hóa không hoàn toàn có thể dẫn đến kết quả sai lệch và phân bố glycan thu được có thể không biểu thị đúng thành phần của kháng thể điều trị. Do đó, việc thu được hồ sơ N-glycan chính xác càng nhanh càng tốt là rất quan trọng để theo dõi quá trình glycosyl hóa trong quá trình sản xuất kháng thể và protein hợp nhất kháng thể và các tác nhân sinh học điều trị khác.
PNGase F nhanh (Mã số: 20406ES) là thuốc thử tái tổ hợp được tối ưu hóa có thể nhanh chóng và hoàn toàn khử glycosyl hóa kháng thể, immunoglobulin, protein tổng hợp và các glycoprotein khác trong vài phút. Enzym này có thể nhanh chóng và không có sở thích loại bỏ tất cả N-glycan và có thể được sử dụng trực tiếp cho phân tích sắc ký hạ lưu hoặc khối phổ.
Tính năng sản phẩm:
Nhanh: Quá trình khử glycosyl hóa hoàn toàn và nhanh chóng trong vài phút.
Độ tinh khiết cao: Không nhiễm protease, glycosidase, độ tinh khiết ≥95%.
Không chọn lọc: Nhanh chóng và không cần ưu tiên loại bỏ tất cả N-glycan.
Khả năng tương thích tốt: Được sử dụng trực tiếp cho phân tích sắc ký hạ lưu hoặc phổ khối.
Nội tiết H là một glycosidase tái tổ hợp có thể cắt cấu trúc lõi chitobiose của mannose cao và một số oligosaccharide loại lai trong N-glycoprotein, loại bỏ mannose cao liên kết N khỏi glycoprotein.
Công ty chúng tôi hiện đang cung cấp Endo H tái tổ hợp được biểu hiện bằng nấm men (Cat#20414ES).
Endo S là một glycosidase có tính đặc hiệu cao có thể cắt các đường liên kết N giữa các cấu trúc lõi chitobiose của các chuỗi nặng IgG loại hoang dã. Hoạt động của glycosidase S không phụ thuộc chặt chẽ vào peptide, vì vậy X có thể là protein, peptide, asparagine hoặc oligosaccharide tự do. Glycosidase S hoạt động bất kể sự hiện diện của lõi alpha1-6 fucose hoặc N-acetylglucosamine phân đôi trên chất nền. Tuy nhiên, nó không hoạt động đối với các oligosaccharide được sialylat hóa và desialylat hóa tri- hoặc tetra-antennary.
Công ty chúng tôi hiện đang cung cấp E.coli tái tổ hợp biểu hiện Endo S (Cat#20413ES).
Hướng dẫn mua hàng
| Sản phẩm màu nâu | 20406ES | 20407ES | 20414ES | 20413ES |
| Tên sản phẩm | ||||
| Nguồn | Biểu hiện tái tổ hợp của nấm men | Biểu hiện tái tổ hợp của nấm men | Biểu hiện tái tổ hợp của nấm men | E.vi khuẩn biểu hiện tái tổ hợp |
| Hoạt động cụ thể | Không áp dụng | 100000U/mL | 1000000U/mL | 8000 U/mg |
| Vị trí phân cắt | Hầu như tất cả các glycan liên kết N | Hầu như tất cả các glycan liên kết N | Glycan mannose cao liên kết N | Tách trong cấu trúc disaccharide cốt lõi của chuỗi nặng IgG |
| Thời gian tiêu hóa | 10 phút | 1-3 giờ | 1-3 giờ | 1 giờ |
| Glycosyl hóa | Thích hợp | Thích hợp | Thích hợp | Thích hợp |
| Cấu trúc protein | Thích hợp | Thích hợp | Thích hợp | Thích hợp |
Dữ liệu thử nghiệm
1. PNGase F nhanh Bài kiểm tra
1: Protein MarkerCat#20350ES) 2: Đối thủ cạnh tranh + chất nền hoặc kháng thể 3: Đối thủ cạnh tranh + chất nền hoặc kháng thể
4:
2.Kiểm tra Endo H
Hình 2. Endo H hiệu ứng cắt của enzim (chất nền)
3.Kiểm tra Endo S
Thông tin sản phẩm
| Tên sản phẩm | Số sản phẩm | Đặc điểm kỹ thuật |
| 20406ES20/50 | 20 tấn/50 tấn | |
| 20407ES01/02 | 15000U/75000U | |
| 20414ES92/97 | 10000U/50000U | |
| 20413ES80/90 | 1000U/5 x 1000U |