Để cung cấp nhiều lựa chọn điều trị hơn cho bệnh nhân tiểu đường, một số loại thuốc tiểu đường mới đã xuất hiện vào đầu thế kỷ 21, chẳng hạn như các chất tương tự peptide-1 giống glucagon (GLP-1). Semaglutide, là một trong những loại thuốc tiêu biểu của các chất tương tự GLP-1, đã được chứng minh trong nhiều nghiên cứu thử nghiệm lâm sàng là có hiệu quả kiểm soát lượng đường trong máu khi kết hợp với các loại thuốc hạ đường huyết dạng uống khác nhau và có thể giúp bệnh nhân giảm cân, giảm huyết áp tâm thu và cải thiện chức năng tế bào β tuyến tụy. Ba công thức của nó (thuốc tiêm hạ đường huyết Ozempic, thuốc hạ đường huyết dạng uống Rybelsus và thuốc tiêm giảm cân Wegovy) đã vượt quá 20 tỷ đô la doanh số vào năm 2023. Do hiệu suất vượt trội của nó trong giảm lượng đường trong máu và giảm cân, ngành công nghiệp này kỳ vọng Semaglutide sẽ duy trì đà bán hàng mạnh mẽ trong một thời gian, thu hút nhiều công ty cạnh tranh để phân phối!

Cấu trúc chuỗi chính của Semaglutide là một polypeptide trung gian gồm 29 axit amin Arg34GLP-1(9-37) hoặc một polypeptide trung gian gồm 27 axit amin Arg34GLP-1(11-37). Việc sản xuất và chế tạo polypeptide trung gian này chủ yếu bao gồm các phương pháp tổng hợp hóa học và chế phẩm sinh học. So với tổng hợp hóa học, chế phẩm sinh học đã phá vỡ được nút thắt về năng lực và phù hợp hơn với sản xuất liên tục quy mô lớn, có thể giảm thêm chi phí sản xuất và mang lại lợi ích kinh tế đáng kể hơn.

Bảng 1. Ví dụ về các phương pháp chuẩn bị sinh học cho các polypeptide trung gian semaglutide

	Phương pháp chế biến sinh học (Ví dụ 1)	Phương pháp chế biến sinh học (Ví dụ 2)
Tổng hợp gen	Tổng hợp một chuỗi protein tổng hợp, bao gồm một peptide tổng hợp, vị trí cắt enterokinase và chuỗi phân tử chính mục tiêu	Tổng hợp trình tự biểu hiện song song với trình tự gen GLP-1(9-37)
Kỹ thuật xây dựng vi khuẩn	Đưa vào E. coli để xây dựng vi khuẩn tái tổ hợp được thiết kế	Đưa vào E. coli để xây dựng vi khuẩn tái tổ hợp được thiết kế
Biểu hiện protein tổng hợp	Bằng cách tối ưu hóa trình tự peptide hợp nhất, thay đổi điểm đẳng điện và tính ưa nước của protein, v.v., biểu hiện của protein hợp nhất được tăng lên hiệu quả.	Sau khi cảm ứng lên men mật độ cao, một protein thể bao gồm biểu hiện song song biểu hiện GLP-1(9-37) được thu được và quá trình gấp lại tạo ra một protein hòa tan
Thu nhận Peptide trung gian	Sau khi protein tổng hợp trải qua quá trình phân cắt, tinh chế enterokinase và các bước khác, có thể thu được polypeptide trung gian semaglutide Arg34GLP-1(9-37)	Protein hòa tan có thể thu được sau khi trải qua quá trình cắt enzyme hai bước với enzyme Kex2 và carboxypeptidase B, và các bước tinh chế, để thu được polypeptide trung gian semaglutide GLP-1(9-37)

Enzym Enterokinase hay Kex2 kết hợp với carboxypeptidase B là một enzym chính cho chuỗi peptide chính của Semaglutide (phương pháp chế biến sinh học), hiệu quả cắt và chi phí của enzym rất quan trọng đối với sản xuất.Yisheng Biology cam kết cung cấp nguyên liệu enzyme ổn định cho các công ty dược phẩm, cung cấp enzyme chất lượng cao và tiêu chuẩn kiểm soát chất lượng hoàn chỉnh để giúp khách hàng nâng cao năng lực sản xuất và độ ổn định của lô, giảm chi phí và nhanh chóng nhập khẩu thị trường.

Yeasen giải pháp tổng thể cho Semaglutide

1.Enterokinase tái tổ hợp

Enterokinase tái tổ hợp (rEK) là một tiểu đơn vị chuỗi nhẹ enterokinase đường ruột bò có độ tinh khiết cao, có cùng hoạt tính enzyme cắt đặc hiệu như enterokinase được chiết xuất tự nhiên, với vị trí cắt là Asp-Asp-Asp-Asp-Lys, có khả năng loại bỏ protein hợp nhất nằm ở đầu N của protein để loại bỏ các thẻ hợp nhất không cần thiết và là một protease thường được chọn để hợp nhất đầu N. Nó có mức độ cắt không đều thấp trên các dư lượng khác.

Yisheng hiện cung cấp enterokinase tái tổ hợp từ nhiều nguồn, nhiều cấp độ khác nhau và có gắn nhãn His hay không để khách hàng lựa chọn.

Yeasen tái tổ hợp Bò Enterokinase, His, được thể hiện trong nấm men là một enterokinase bò có độ tinh khiết cao, hoạt động cao và có tính đặc hiệu cao được thể hiện bởi sự tiết ra của Pichia pastoris. Nó có thể cắt hiệu quả các protein tổng hợp trong phạm vi pH rộng (4,5-9,5) và phạm vi nhiệt độ rộng, và vẫn có hoạt động một phần dưới nhiều chất tẩy rửa và chất biến tính khác nhau. Sản phẩm này có nhãn His, có thể dễ dàng loại bỏ thông qua Ni²⁺ cột ái lực sau phản ứng cắt, giúp đơn giản hóa đáng kể quá trình tinh chế tiếp theo.

Đặc trưng

Độ đặc hiệu cao: Một loại protease đặc hiệu cắt ở đầu carboxyl của lysine chứa bốn axit aspartic: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys;

Độ tinh khiết cao: Không có protease nào khác, không có phương pháp cắt không đặc hiệu;

Không có nguồn gốc động vật: Sản xuất tái tổ hợp, không có sự nhiễm virus ngoại sinh, không sử dụng bất kỳ nguyên liệu thô nào có nguồn gốc từ động vật trong quá trình sản xuất;

Chất lượng ổn định: Sản xuất hàng loạt có thể đảm bảo sản xuất hàng loạt ổn định và liên tục; không có sự khác biệt giữa các lô, chất lượng ổn định;

Công suất đủ: Máy lên men 500L có thể thu được ~50 MU enterokinase, Yeasen có hệ thống lên men khác nhau từ 5L-1500L để đáp ứng các yêu cầu khác nhau của khách hàng ở các giai đoạn khác nhau cho các yêu cầu về lô sản phẩm;

Cung cấp sản phẩm chất lượng khác nhau: Sản phẩm đạt tiêu chuẩn R&D (20395ES), tiêu chuẩn GMP (20396ES), tiêu chuẩn GMP tuân thủ hệ thống quản lý chất lượng ISO 13485.

Dữ liệu thử nghiệm

Thử nghiệm hoạt động của Enterokinase:

Hình 1. Hiệu ứng cắt của enzyme Yeasen enterokinase (20395ES) là phù hợp với Đối thủ cạnh tranh N

Lưu ý: Chất nền dương tính (20391ES) là một protein hợp nhất bao gồm hai chuỗi protein cụ thể được kết nối bằng DDDDK (enterokinase nhận dạng và vị trí cắt), với tổng trọng lượng phân tử khoảng 64,6 kDa, có thể được cắt cụ thể thành hai đoạn protein độc lập bằng enterokinase, với trọng lượng phân tử lần lượt là khoảng 27,9 kDa và 36,6 kDa. Sản phẩm này, như một chất nền enterokinase, có thể được sử dụng để phát hiện hoạt động của enzyme bán định lượng hoặc định tính của enterokinase tái tổ hợp hoặc tự nhiên.

Kiểm tra độ tinh khiết của Enterokinase:

Lưu ý: Giá trị lý thuyết của enterokinase là 22,7 kDa. Do hiệu ứng glycosyl hóa sau khi biểu hiện trong Pichia pastoris, SDS-PAGE cho thấy trọng lượng phân tử của protein mục tiêu là khoảng 40 kDa. Nhìn chung, các dải glycosyl hóa sẽ có một dải hơi khuếch tán chạy lên trên (như thể hiện trong hình bên phải). Công ty chúng tôi cũng có thể cung cấp enzyme khử glycosyl hóa Endo H (Cat#20414) cho khách hàng để khử glycosyl hóa và chạy gel để đo độ tinh khiết (như thể hiện trong hình bên trái).

Thử nghiệm độ đặc hiệu cắt của Enterokinase:

Hình 3. Yeasen enterokinase (20395ES) có khả năng cắt không đặc hiệu ít hơn so với đối thủ cạnh tranh nhập khẩu N

Lưu ý: Trong cùng điều kiện, Yeasen enterokinase (20395ES) và enterokinase của đối thủ cạnh tranh nhập khẩu N đã được sử dụng cho các thử nghiệm cắt enzyme. Kết quả cho thấy sau khi tinh chế, các tạp chất cắt không đặc hiệu được tạo ra bởi Yeasen enterokinase (20395ES) thấp hơn đáng kể so với đối thủ cạnh tranh nhập khẩu N.

Thử nghiệm độ ổn định tăng tốc, đông lạnh-rã đông lặp lại của Enterokinase:

Hình 4. Yeasen enterokinase (20395ES) thử nghiệm độ ổn định tăng tốc, đông lạnh-rã đông nhiều lần cho thấy hoạt động của enzyme không thay đổi đáng kể.

Ghi chú: Yeasen enterokinase (20395ES) chọn ngẫu nhiên 2 lô, lặp lại đông-rã đông 10 lần, 20 lần, hoạt tính của enzym không thay đổi đáng kể so với hoạt tính ban đầu của enzym.

Bảo quản ở 25°C trong 7, 16, 32 ngày, 37°C trong 7, 14 ngày, hoạt động của enzyme không thay đổi đáng kể so với hoạt động ban đầu của enzyme.

2.Enzym Kex2 tái tổ hợp, Carboxypeptidase B

Bảng 2.  Yeasen Hướng dẫn lựa chọn sản phẩm Enzym Kex2 tái tổ hợp, Carboxypeptidase B

Số sản phẩm	20418ES	20417ES
Sản phẩm Tên	Protease Kex2 tái tổ hợp, được biểu hiện trong nấm men	CPB tái tổ hợp, được thể hiện trong E.coli
Cấp độ sản phẩm	Cấp độ GMP	Cấp độ GMP
Nguồn	Biểu hiện tái tổ hợp từ Pichia pastoris	Biểu hiện tái tổ hợp từ E. vi khuẩn
Hoạt động	≥10,0 đơn vị/mg pro	≥170 Đơn vị USP/mg pro
Vị trí phân cắt	Nhận biết và cắt cụ thể các liên kết peptit ở đầu axit cacboxylic của các axit amin dibasic như Arg-Arg, Lys-Arg	Thủy phân đặc hiệu các protein ở đầu amino của các axit amin cơ bản (lysine, arginine, histidine) ở đầu C
Ứng dụng sản phẩm	1. Quá trình cắt enzyme trong sản xuất thuốc peptide. 2. Tiêu hóa protein bằng enzyme và lập bản đồ peptide, giải trình tự, v.v.	1. Sản xuất insulin tái tổ hợp và các chất tương tự. 2.Xác định axit amin ở đầu C của protein. 3. Loại bỏ các thẻ histidine ở đầu C của protein. 4. Sản xuất các chất peptide tái tổ hợp khác. 5. Tổng hợp enzym một số hợp chất đặc biệt.

Enzym Kex2 kết hợp với carboxypeptidase B: Yêu cầu về quy trình biểu hiện song song, năng suất cao của semaglutide trung gian sau khi cắt enzyme

Cólàm dịu đi Cơ sở sản xuất Enzyme cấp GMP

Cơ sở sản xuất enzyme phân tử siêu sạch đạt chứng nhận ISO - UCF.ME, được trang bị thiết bị phân tích lý hóa và tinh chế AKTA cấp công nghiệp, các đơn vị lên men mật độ cao trăm lít, xưởng sạch tiêu chuẩn mười nghìn cấp và dây chuyền sản xuất tự động. Nó sở hữu các hệ thống lên men và tinh chế với nhiều thông số kỹ thuật khác nhau, bao gồm 5L, 10L, 30L, 100L, 500L và 1.500L, có khả năng mở rộng quy mô sản xuất từ ​​5L đến 1.500L trong lĩnh vực công nghiệp hóa enzyme phân tử, đáp ứng đầy đủ nhu cầu nguyên liệu enzyme cốt lõi của khách hàng hạ nguồn ở các giai đoạn khác nhau như nghiên cứu và phát triển, quy mô thí điểm và sản xuất quy mô lớn.

Yeasen có đội ngũ R&D mạnh và cơ sở sản xuất enzyme tiên tiến, liên tục cải thiện chất lượng và năng lực của các enzyme chính để sản xuất semaglutide (enterokinase tái tổ hợp) thông qua đổi mới công nghệ và tối ưu hóa liên tục, cung cấp mức giá theo từng thông số kỹ thuật khác nhau để đáp ứng nhu cầu khác nhau của khách hàng ở các giai đoạn sản xuất khác nhau.

Thông tin sản phẩm khuyến mại

Tên sản phẩm	Số sản phẩm	Đặc điểm kỹ thuật	Giá niêm yết ($）	Khuyến mại Giá ($）
Enterokinase bò tái tổ hợp, His, được biểu hiện trong nấm men	20395ES60/76/90/ 92/94	100 500 Đ/Đ 5000 Bạn/ 100 KU/ 1 MU (1000 KU)	45/115/ 825/ 12000/ 360000	45/115/ 585/ 5600/ 19600

Thông tin sản phẩm liên quan

Tên sản phẩm	Số sản phẩm	Đặc điểm kỹ thuật
Protein kiểm soát phân cắt (Enterokinase)	20391ES03/11	1mg/4 mg
Protease Kex2 tái tổ hợp, được biểu hiện trong nấm men	20418ES60	100 μg
CPB tái tổ hợp, được thể hiện trong E.coli	20417ES03/10	1mg/10mg
Nội tiết H	20414ES92/97	10000U/50000U