Mô tả bối cảnh

Tinh chế protein là quá trình cô lập protein mục tiêu khỏi tổng số protein trong mẫu thử nghiệm trong khi vẫn giữ nguyên hoạt tính sinh học và tính toàn vẹn hóa học của protein mục tiêu. Trong quá trình xây dựng các vectơ, ngoài một số yếu tố biểu hiện cần thiết, cũng cần phải xem xét tối ưu hóa codon và lựa chọn thẻ. Việc lựa chọn thẻ phù hợp không chỉ có lợi cho quá trình tinh chế protein và thúc đẩy khả năng hòa tan của protein mà còn không ảnh hưởng đến cấu trúc và chức năng của protein và các ứng dụng hạ nguồn. Phần này tập trung vào việc giới thiệu thẻ His và GST.

Bảng 1. Giới thiệu về thẻ His và GST

Nhãn	Kích thước kDa	Sự liên tiếp	Độ tinh khiết	Độ hòa tan	Xóa thẻ	Enzym phân cắt thẻ
Của anh ấy	~0,84	HHHHHH	+	+	Không bắt buộc	Protease TEV
Thuế hàng hóa và dịch vụ	26	Gồm 211 axit amin	++	++	Yêu cầu	3C Protease/PSP

Thẻ của anh ấy Protein Affinity Purification

Nhựa Agarose HisSep Ni-NTA có thành phần chính là gel agarose liên kết chéo cao làm chất nền, kết hợp hóa học với axit nitrilotriacetic (NTA) có phối hợp tetra làm chất phối tử và sau khi tạo phức với các ion niken (Ni²⁺), nó tạo thành một cấu trúc bát diện rất ổn định với các ion niken ở tâm của bát diện. Cấu trúc này có thể bảo vệ các ion niken khỏi các cuộc tấn công của các phân tử nhỏ. So với nhựa Ni-IDA, nó ổn định hơn và có thể chịu được một số nồng độ chất khử, chất biến tính hoặc chất ghép nối trong điều kiện khắc nghiệt. So với nhựa Ni-TED, nó có khả năng hấp phụ lớn hơn đối với các protein mục tiêu. Nó đã trở thành một trong những loại nhựa không thể thiếu để tinh chế các protein gắn thẻ His trong phòng thí nghiệm.

Hình 1. Sơ đồ nguyên lý sản phẩm nhựa His.

Bảng 2. Yeasen Hướng dẫn lựa chọn sản phẩm thanh lọc của anh ấy

Số sản phẩm	20502ES	20503ES	20504ES/20505ES	20561ES
Tên sản phẩm	Nhựa Agarose HisSep Ni-NTA	HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF	Cột sắc ký HisSep Ni-NTA 6FF, 5 mL/1 mL	Hạt MagBeads HisSep Ni-NTA
Ma trận	Gel Agarose liên kết chéo 6%	Gel Agarose 6% liên kết chéo cao	Gel Agarose 6% liên kết chéo cao	Vi cầu Agarose từ tính
Sức chịu áp suất	0,1 MPa, 1 thanh	0,3 MPa, 3 thanh	0.3 MPa, 3 thanh	Không có
Dung tích	＞40 mg 6×protein gắn thẻ His/mL ma trận	＞40 mg 6×protein gắn thẻ His/mL ma trận		> 40 mg 6×His-gắn protein/mL hạt từ tính
Đề xuất thanh lọc	Ma trận có khả năng chịu áp suất trung bình, thích hợp cho phương pháp ủ, cột trọng lực tinh chế quy mô nhỏ	Ma trận có khả năng chịu áp suất cao, có thể được sử dụng để tinh chế protein quy mô lớn trong công nghiệp với thiết bị tinh chế protein		Làm sạch protein nhanh chóng và tiện lợi thông qua tách từ
Sức chịu đựng	Urê 8 M, axit clohydric 6 M, DTT 0,5-1 mM, EDTA 1 mM, v.v.
Ứng dụng	Tinh chế protein gắn thẻ His là lựa chọn đầu tiên, tải trọng cao, dung sai trung bình, đặc biệt phù hợp với hệ thống tinh chế biểu hiện prokaryote

Phụ lục: HisSep Ni-NTA MagBeads (Cat#20561ES) Tính năng sản phẩm

1. So với các cột và nhựa truyền thống được đóng gói sẵn, không cần phải ly tâm mẫu nhiều lần và kiểm soát tốc độ dòng mẫu, giúp giảm đáng kể thời gian tinh chế.
2. Quá trình tinh chế một bước có thể đạt được độ tinh khiết hơn 95% của protein mục tiêu.
3. Năng suất protein mục tiêu cao: năng suất có thể đạt 70-80%.
4. Có thể tái sử dụng tới 5 lần.
5. Dễ dàng điều chỉnh nồng độ và thể tích của protein mục tiêu.
6. Mất ít protein và không có nguy cơ biến tính hoặc kết tủa protein.

Phương tiện tinh chế ái lực protein thẻ GST

Sắc ký ái lực protein gắn thẻ GST sử dụng ái lực cộng hóa trị giữa protein hợp nhất GST và glutathione cố định (GSH) thông qua liên kết lưu huỳnh và tinh chế dựa trên nguyên tắc rửa giải trao đổi GSH. Trong quá trình tinh chế này, một glutathione được kết hợp với cánh tay của gel thông qua liên kết lưu huỳnh, sau đó lực tác động riêng giữa glutathione và glutathione S-transferase (tức là, GST-tag) được sử dụng để làm cho protein hợp nhất gắn thẻ GST kết hợp với glutathione cánh tay trên gel, do đó tách protein được gắn nhãn khỏi các protein khác. Glutathione thường có dạng oxy hóa GSSG và dạng khử GSH. Khi chúng ta sử dụng rửa giải GSH, GSH sẽ cạnh tranh với glutathione của gel để kết hợp với protein hợp nhất, do đó rửa giải protein mục tiêu.

Nhựa GSTSep Glutathione Agarose là nhựa tinh chế protein thẻ GST, được tạo ra về mặt cấu trúc bằng cách kết hợp cộng hóa trị glutathione khử với gel agarose 6% làm ma trận thông qua một nhánh 12 nguyên tử. Thiết kế này đã cải thiện đáng kể hiệu quả tinh chế của nhựa, cho phép nó mang hơn 20 mg protein tổng hợp GST trên một mililit môi trường. Sản phẩm có tính đặc hiệu và hiệu suất chi phí tốt, và có thể được sử dụng để tinh chế nhiều loại glutathione S-transferase, protein phụ thuộc glutathione và các dẫn xuất tái tổ hợp glutathione trong một bước.

Bảng 3. Yeasen Hướng dẫn lựa chọn sản phẩm thanh lọc GST

Số sản phẩm	20507ES	20508ES	20509ES/20510ES	20562ES
Tên sản phẩm	Nhựa Agarose Glutathione GSTSep	Nhựa GSTSep Glutathione Agarose 4FF	Cột sắc ký GSTSep Glutathione 4FF, 1 mL / 5 mL	Glutathione GSTSep Hạt MagBeads
Ma trận	Gel Agarose liên kết chéo 6%	Gel Agarose 4% liên kết chéo cao	Gel Agarose 4% liên kết chéo cao	Vi cầu Agarose từ tính
Sức chịu áp suất	0,1 MPa, 1 thanh	0,3 MPa, 3 thanh	0,3 MPa, 3 thanh	Không có
Dung tích	>20 mg protein GST (40 kDa)/mL ma trận	>10 mg protein GST (40 kDa)/mL ma trận		5-10 mg GST tag fusion protein/mL hạt từ tính
Ứng dụng	Tải trọng cao, Ma trận với khả năng chịu áp suất trung bình, phù hợp với phương pháp ủ, cột trọng lực làm sạch quy mô nhỏ, được khuyến nghị cho khách hàng quy mô phòng thí nghiệm	Ứng dụng Tải trọng thấp, khả năng chịu áp suất ma trận cao, có thể sử dụng để tinh chế protein quy mô lớn trong công nghiệp bằng thiết bị tinh chế protein, dễ dàng mở rộng quy mô hơn		Tải trọng thấp nhất, tinh chế protein nhanh chóng và tiện lợi thông qua tách từ

Phụ lục: GSTSep Glutathione MagBeads (Mã số sản phẩm: 20562ES) Tính năng sản phẩm

1. Làm sạch trực tiếp các protein mục tiêu có độ tinh khiết cao từ các mẫu sinh học thông qua quá trình tách từ tính trong một bước, giúp đơn giản hóa đáng kể quá trình làm sạch và cải thiện hiệu quả làm sạch, phù hợp để làm sạch protein tổng hợp GST thuận tiện trong nghiên cứu khoa học và lĩnh vực công nghiệp.
2. Sử dụng hạt từ tính này cho các thí nghiệm kéo xuống GST, vì quá trình tách từ tính không yêu cầu phải ly tâm nhiều lần và thời gian ủ dài nên thao tác này đơn giản hơn, nhanh hơn và tự động hơn so với các phương pháp sắc ký truyền thống.

Thông tin sản phẩm

Định vị sản phẩm	Tên sản phẩm	Số sản phẩm	Đặc điểm kỹ thuật
Thẻ của anh ấy Protein Purification	HisSep Ni-NTA Agarose Nhựa	20502ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	HisSep Ni-NTA Agarose Nhựa 6FF	20503ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	Cột sắc ký HisSep Ni-NTA 6FF, 5 mL	20504ES08/25	5mL/5x5mL
	Cột sắc ký HisSep Ni-NTA 6FF, 1 mL	20505ES03/08	1mL/5x1mL
	Hạt MagBeads HisSep Ni-NTA	20561ES08/25	5mL/25mL
Thanh lọc protein thẻ GST	Nhựa Agarose Glutathione GSTSep	20507ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	Nhựa GSTSep Glutathione Agarose 4FF	20508ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	Cột sắc ký GSTSep Glutathione 4FF, 1 mL	20509ES03/08	1mL/5x1mL
	Cột sắc ký GSTSep Glutathione 4FF, 5 mL	20510ES08/25	5mL/5x5mL
	Hạt MagBeads Glutathione GSTSep	20561ES08/25	5mL/25mL