Hieff Canace^TM Uracil+ DNA polymerase độ trung thực cao, là thế hệ mới của DNA có độ trung thực cao Polymerase dựa trên DNA Polymerase Pfu. Hieff Canace^TM Uracil+ DNA Polymerase độ trung thực cao cho phép phản ứng PCR nhanh và chính xác đối với các khuôn mẫu phức tạp. Độ trung thực của nó được cải thiện đáng kể và hoàn toàn tránh được lỗi khuếch đại do sử dụng các đoạn mồi/khuôn mẫu/dNTP chứa dUTP. Sản phẩm được trang bị đệm enzyme được tối ưu hóa và bổ sung các thành phần tăng cường PCR, giúp enzyme có hiệu suất cao và thích ứng với nhiều loại khuôn mẫu, phù hợp để khuếch đại các khuôn mẫu phức tạp.

Thành phần sản phẩm

Vận chuyển và lưu trữ

Các thành phần được vận chuyển cùng với túi đá và có thể bảo quản ở nhiệt độ -20°C trong 1 năm.

Ứng dụng sản phẩm

Khuếch đại thư viện có độ trung thực cao bằng cách sử dụng các đoạn mồi/khuôn mẫu/dNTP chứa dUTP.

Thận trọng

1. Vì sự an toàn và sức khỏe của bạn, vui lòng mặc áo khoác phòng thí nghiệm và găng tay dùng một lần khi thực hiện thí nghiệm.

2. Chỉ sử dụng cho mục đích nghiên cứu!

Hướng dẫn

Hieff Canace^TM Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase được sử dụng theo cách hơi khác so với các enzyme high-fidelity thông thường. Vui lòng đọc kỹ hướng dẫn trước khi sử dụng.

1. Hệ thống phản ứng được đề xuất

Tất cả các hoạt động phải được thực hiện trên băng. 2×Canace^TM Đệm PCR Uracil+ phải được trộn đều sau khi rã đông. Trước khi cấu hình hệ thống, vui lòng làm nóng trước thiết bị PCR. Sau khi thêm các thành phần, trộn đều mẫu bằng pipet và quay xuống đáy ống, sau đó đặt vào thiết bị PCR đã được làm nóng trước để khuếch đại. Sau khi sử dụng, đưa tất cả các thành phần trở lại -20 °C để bảo quản.

Bảng 1. Phản ứng khuếch đại PCR

[Ghi chú]:

1) Thuốc thử: Rã đông từng thành phần trước khi sử dụng;

2) Khuôn mẫu: Việc sử dụng khuôn mẫu DNA tinh khiết chất lượng cao có thể cải thiện đáng kể hiệu quả và tỷ lệ thành công của quá trình khuếch đại;

3) dNTP: Nồng độ dNTP cuối cùng được khuyến nghị là 200 μM. Các dNTP được cung cấp trong bộ dụng cụ không chứa dUTP. Nếu trường hợp đặc biệt yêu cầu phải chuẩn bị các khuôn mẫu chứa dUTP, có thể thêm dUTP bổ sung vào nồng độ cuối cùng là 400 μM.

4) Nồng độ polymerase: khuyến nghị 1 U/50 μL. Có thể tối ưu hóa trong khoảng 0,5-2 U/50 μL, không vượt quá 2 U/50 μL. Để ngăn polymerase phân hủy mồi do hoạt động exonuclide 3 '→5', nên thêm polymerase vào hệ thống phản ứng ở bước cuối cùng.

5) Nồng độ cuối cùng của Mg2+: Nồng độ cuối cùng của hệ thống là 2 mM. Vui lòng yêu cầu công ty chúng tôi cung cấp dung dịch đệm có nồng độ Mg2+ thấp hoặc không có Mg2+ nếu bạn có nhu cầu đặc biệt.

2. Quy trình phản ứng được đề xuất

Bảng 2. Quy trình phản ứng khuếch đại PCR

[Ghi chú]：

1) Nhiệt độ và thời gian biến tính ban đầu: khuyến nghị là 98℃. Thời gian khuyến nghị là 30 giây đối với các khuôn mẫu đơn giản như DNA plasmid, 1 phút đối với các thư viện, 3 phút đối với các khuôn mẫu phức tạp như cDNA và DNA bộ gen và 5-10 phút đối với các khuôn mẫu có hàm lượng GC cao.

2) Nhiệt độ và thời gian ủ: khuyến nghị 60℃, hoặc có thể thiết lập gradient nhiệt độ để tìm nhiệt độ tối ưu cho quá trình ủ mồi theo nhu cầu. Thời gian ủ khuyến nghị là 20 giây và có thể điều chỉnh trong vòng 10-30 giây. Thời gian ủ quá dài có thể dẫn đến sự phân tán các sản phẩm khuếch đại trên gel.

3) Nhiệt độ và thời gian kéo dài: khuyến nghị 72℃. Thời gian kéo dài được điều chỉnh theo nhu cầu thực tế.