Quick T4 DNA Ligase là sản phẩm enzyme đơn có thể được sử dụng để gắn các đoạn DNA và bộ điều hợp trong quá trình xây dựng thư viện NGS. Sản phẩm này đã được xác minh bằng giải trình tự thông lượng cao và có chất lượng tuyệt vời. Đối với những khách hàng không cần điều chỉnh hệ thống thử nghiệm, chúng tôi khuyên bạn nên mua Mô-đun gắn DNA tốc độ nhanh Hieff NGSTM (Mã số # 12607).

Thành phần sản phẩm

Vận chuyển và lưu trữ

Sản phẩm được vận chuyển kèm túi đá và có thể bảo quản ở nhiệt độ -20°C trong hai năm.

Định nghĩa đơn vị

Trong hệ thống phản ứng gắn kết 20 μL, khi 6 μg λDNA-Hind Ⅲ phản ứng ở 16℃ trong 30 phút, lượng enzyme cần thiết để gắn kết hơn 50% các đoạn DNA được xác định là một đơn vị (U).

Thận trọng

1. Nếu có một lượng nhỏ kết tủa xuất hiện khi dung dịch đệm tan chảy, vui lòng đảo ngược và trộn đều trước khi sử dụng;

2. Vì sự an toàn và sức khỏe của bạn, vui lòng mặc áo khoác phòng thí nghiệm và găng tay dùng một lần khi thực hiện thí nghiệm.

3. Sản phẩm này CHỈ dùng cho mục đích nghiên cứu!

Hướng dẫn

1. Các bộ dụng cụ xây dựng thư viện DNA chính thống hiện tại thường không được tinh chế sau khi sửa chữa đầu và xử lý A-Tailing, và thực hiện trực tiếp việc gắn bộ chuyển đổi. Vui lòng tham khảo phần chuẩn bị sau đây cho hệ thống phản ứng. Xoay kỹ, quay trong thời gian ngắn và ủ trong 15 phút ở 20°C.

[Lưu ý]: *Bộ sản phẩm không cung cấp 50% PEG 6000, bạn cần tự pha chế.

**Tham khảo bảng sau để biết số lượng bộ chuyển đổi.

***Lượng Quick T4 DNA Ligase sử dụng có thể thêm 1-5 μL tùy theo nhu cầu.

2. Chất lượng và nồng độ của bộ điều hợp được sử dụng ảnh hưởng trực tiếp đến hiệu quả gắn kết và năng suất thư viện. Sử dụng quá nhiều bộ điều hợp có thể tạo ra nhiều bộ điều hợp dimer hơn, trong khi sử dụng ít hơn có thể ảnh hưởng đến hiệu quả gắn kết và năng suất thư viện. Bảng sau đây liệt kê số lượng bộ điều hợp được khuyến nghị sử dụng trong các tình huống DNA đầu vào khác nhau khi sử dụng bộ dụng cụ này.

[Lưu ý]: Đầu vào mol DNA (pmol)≈ Đầu vào DNA(ng)/ [0,66 × Chiều dài trung bình DNA đầu vào(bp)].

Ví dụ tính toán gắn kết bộ chuyển đổi: Cần thêm bao nhiêu bộ chuyển đổi khi DNA đầu vào là 100 ng và chiều dài là 300 bp?

Bước 1: Tính số mol DNA đầu vào. Công thức: Mol DNA đầu vào (pmol)≈ DNA đầu vào(ng)/ [0,66 × Chiều dài trung bình DNA đầu vào(bp)]; Mol DNA đầu vào (pmol)=100 ÷ (0,66×300) = 0,5 pmol;

Bước 2: Theo bảng trên, tính số mol bộ điều hợp được thêm vào.; Khi DNA đầu vào là 100ng, tỷ lệ mol của bộ điều hợp: DNA đầu vào là 100:1 và số mol bộ điều hợp được thêm vào = 100×0,5 pmol = 50 pmol;

Bước 3: Tính thể tích bổ sung bộ chuyển đổi. Nồng độ bộ chuyển đổi = 15 μmol/L (nếu bạn sử dụng bộ chuyển đổi của công ty khác, bạn cần xác định nồng độ của nó theo hướng dẫn của nó); Thể tích bộ chuyển đổi được thêm vào = số mol bộ chuyển đổi được thêm vào (50 pmol) ÷ nồng độ bộ chuyển đổi (15 μmol/L) = 3,34 μL (Lưu ý: 15 μmol/L = 15 pmol/ μL);

Tóm lại, thể tích mà bộ chuyển đổi có thể thêm vào là 3,4 μL. (Lưu ý: Thể tích bổ sung tối đa của bộ chuyển đổi không vượt quá 5 μL).