Sự miêu tả
Hifair™ Bộ tổng hợp cDNA sợi 1 AdvanceFast (Không nhuộm) là bộ phiên mã ngược nhanh được phát triển dựa trên Hifair™ III Bộ tổng hợp cDNA sợi 1 (Không có thuốc nhuộm), phù hợp cho các thí nghiệm khuếch đại PCR và RT-qPCR. So với Hifair™ Bộ tổng hợp cDNA sợi thứ 1 III (Không cần thuốc nhuộm), có tỷ lệ phát hiện ổn định, độ đặc hiệu và đảm bảo năng suất, với tổng thời gian phiên mã ngược có khả năng giảm xuống dưới 6 phút, rút ngắn đáng kể thời gian thử nghiệm.
Bộ dụng cụ bao gồm gDNA Digester Mix, có thể loại bỏ sự nhiễm bẩn DNA bộ gen còn sót lại trong khuôn mẫu RNA, đảm bảo kết quả tiếp theo đáng tin cậy hơn. Bộ dụng cụ cung cấp hai loại mồi tổng hợp cDNA: Mồi ngẫu nhiên N6 và Oligo (dT)18. Người dùng có thể lựa chọn giữa Random Primers N6, Oligo (dT)18, hoặc các đoạn mồi Gene Specific như các đoạn mồi phiên mã ngược theo nhu cầu của chúng. Sản phẩm cDNA mạch đơn tổng hợp có thể được sử dụng trực tiếp cho các phản ứng PCR hoặc qPCR tiếp theo.
Thông số kỹ thuật
| Số mèo | 11150ES10 / 11150ES60 |
| Kích cỡ | 10 tấn/100 tấn |
Thành phần
| Số thành phần | Tên | 11150ES10 | 11150ES60 |
| 11150-A | 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (Không nhuộm) | 50 μL | 500 μL |
| 11150-B | Hỗn hợp tiêu hóa 5×gDNA | 20 μL | 200 μL |
| 11150-C | Mồi ngẫu nhiên (50 μmol/L) | 20 μL | 200 μL |
| 11150-D | Oligo d(T)18 Mồi (50 μmol/L) | 20 μL | 200 μL |
| 11150-E | Nước không có RNase | 200 μL | 2×1 mL |
Kho
Sản phẩm này nên được bảo quản ở nhiệt độ -25~-15℃ trong 1 năm.
Hướng dẫn
- Nếu thí nghiệm đòi hỏi phải loại bỏ DNA bộ gen còn sót lại
1）Tiêu hóa gDNA
Trong ống ly tâm không có RNase, chuẩn bị hỗn hợp sau và nhẹ nhàng dùng pipet để trộn đều. Ủ ở 42℃ trong 2 phút.
| Thành phần | Thể tích (μL) |
| Nước không có RNase | Đến 10 μL |
| Hỗn hợp tiêu hóa gDNA 5× | 2 μL |
| Tổng RNA* | 10 pg-5 μg |
| hoặc mRNA* | 10 pg-500 ng |
* Khuyến cáo lượng đầu vào của Tổng RNA không được vượt quá 2 μg. Nếu mức độ biểu hiện của gen mục tiêu thấp, lượng đầu vào có thể tăng lên tối đa là 5 μg Tổng RNA.
2）Chuẩn bị hệ thống phản ứng phiên mã ngược (Hệ thống 20 μL)
| Thành phần | Thể tích (μL) |
| dung dịch phản ứng từ bước trước | 10 μL |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (Không nhuộm) | 5 μL |
| Oligo d(T)18 Mồi (50 μmol/L)** | 2 μL |
| hoặc Mồi ngẫu nhiên (* cho qPCR) (50 μmol/L)** | hoặc 2 μL |
| Nước không có RNase | Đến 20 μL |
* Số lượng mồi có thể được điều chỉnh theo số lượng mẫu đầu vào. Nếu sản phẩm phiên mã ngược được sử dụng cho các thí nghiệm qPCR, có thể thêm mồi ngẫu nhiên vào hệ thống theo số lượng được khuyến nghị.
** Khuyến cáo trước tiên nên thêm 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (Không nhuộm), trộn đều, sau đó thêm đoạn mồi phiên mã ngược để đảm bảo đoạn mồi không bị ảnh hưởng bởi gDNA Digester.
3）Cài đặt quy trình phiên mã ngược
| Nhiệt độ. | Thời gian |
| 55℃* | 5 phút** |
| 85℃ | 5 giây |
* Đối với các mẫu có hàm lượng GC cao hoặc các mẫu phức tạp, nhiệt độ phiên mã ngược có thể tăng lên 60℃.
** Sản phẩm này có thể tổng hợp các chuỗi cDNA dưới 14 kb. Nếu bạn cần các sản phẩm cDNA dài hơn, bạn có thể kéo dài thời gian phiên mã ngược một cách thích hợp.
- Nếu thí nghiệm không yêu cầu loại bỏ DNA bộ gen
1）Chuẩn bị hệ thống phản ứng phiên mã ngược (Hệ thống 20 μL)
| Thành phần | Thể tích (μL) |
| 4×Hifair™AdvanceFast SuperMix (Không nhuộm) | 5 μL |
| Oligo d(T)18 Mồi (50 μmol/L)** | 2 μL |
| hoặc Mồi ngẫu nhiên (* cho qPCR) (50 μmol/L)** | hoặc 2 μL |
| Tổng RNA* | 10 pg -5 μg |
| hoặc mRNA | 10 trang - 500 ng |
| Nước không có RNase | Đến 20 μL |
* Khuyến cáo lượng đầu vào của Tổng RNA không được vượt quá 2 μg. Nếu mức độ biểu hiện của gen mục tiêu thấp, lượng đầu vào có thể tăng lên tối đa là 5 μg Tổng RNA.
** Lượng mồi có thể được điều chỉnh theo lượng mẫu đầu vào. Nếu sản phẩm phiên mã ngược được sử dụng cho các thí nghiệm qPCR, có thể thêm mồi ngẫu nhiên vào hệ thống theo lượng khuyến nghị.
2）Cài đặt quy trình phiên mã ngược
| Nhiệt độ. | Thời gian |
| 55℃* | 5 phút** |
| 85℃ | 5 giây |
* Đối với các mẫu có hàm lượng GC cao hoặc các mẫu phức tạp, nhiệt độ phiên mã ngược có thể tăng lên 60℃.
** Sản phẩm này có thể tổng hợp các chuỗi cDNA dưới 14 kb. Nếu bạn cần các sản phẩm cDNA dài hơn, bạn có thể kéo dài thời gian phiên mã ngược một cách thích hợp.
Ghi chú
- Mọi thao tác phải được thực hiện trên đá và phải được thực hiện theo cách tránh nhiễm RNase.
- Sản phẩm này chỉ dùng cho mục đích nghiên cứu.
- Vui lòng mặc áo khoác phòng thí nghiệm và găng tay dùng một lần để đảm bảo an toàn.
Tài liệu:
Thanh toán & Bảo mật
Thông tin thanh toán của bạn được xử lý an toàn. Chúng tôi không lưu trữ chi tiết thẻ tín dụng cũng như không có quyền truy cập vào thông tin thẻ tín dụng của bạn.
Cuộc điều tra
Bạn cũng có thể thích
Câu hỏi thường gặp
Sản phẩm chỉ dành cho mục đích nghiên cứu và không dùng để điều trị hoặc chẩn đoán ở người hoặc động vật. Sản phẩm và nội dung được bảo vệ bởi các bằng sáng chế, nhãn hiệu và bản quyền thuộc sở hữu của
Một số ứng dụng có thể yêu cầu thêm quyền sở hữu trí tuệ của bên thứ ba.