Hifair™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix cho qPCR là phiên bản nâng cao của Hifair™ Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA Digester Plus). Sản phẩm được thiết kế để đáp ứng nhu cầu tiến hành cả phản ứng phiên mã ngược và loại bỏ bộ gen trong một ống duy nhất. Hơn nữa, sản phẩm này hợp lý hóa quá trình phản ứng, giảm đáng kể thời gian phản ứng và tăng sản lượng sản phẩm phiên mã ngược. 4×Hifair® AdvanceFast One-Step RT SuperMix bao gồm tất cả các thuốc thử cần thiết cho phản ứng phiên mã ngược. Trong quá trình phản ứng, bạn chỉ cần bổ sung gDNA Remover Mix, RNA khuôn mẫu và nước để tổng hợp hiệu quả sợi cDNA ban đầu đồng thời loại bỏ nhiễm bẩn DNA bộ gen. Sản phẩm này rất phù hợp cho quá trình phiên mã ngược các khuôn mẫu RNA phức tạp và tỏ ra rất hiệu quả đối với quá trình phiên mã ngược liên quan đến lượng khuôn mẫu ít và gen có ít bản sao.

Sản phẩm phiên mã ngược được tạo ra bởi sản phẩm cụ thể này hoàn toàn tương thích với cả phương pháp qPCR dựa trên đầu dò và dựa trên thuốc nhuộm. Đối với qPCR dựa trên đầu dò, chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (Cat#11211), trong khi đối với qPCR dựa trên thuốc nhuộm, Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix (Cat#11184) là lựa chọn được khuyến nghị cho phân tích biểu hiện gen hiệu suất cao.

Tuy nhiên, điều quan trọng cần lưu ý là sản phẩm phiên mã ngược do sản phẩm này tạo ra không phù hợp cho các ứng dụng tiếp theo như khuếch đại các đoạn dài. Nếu bạn cần phiên mã ngược hiệu quả cho các mục đích này, chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng Bộ tổng hợp cDNA Hifair® AdvanceFast 1st Strand (Cat#11149, Cat#11150).

Đặc trưng

• 5 phút RT

• Tiêu hóa RT và gDNA tích hợp trong một ống

Ứng dụng

• RT-qPCR
  
• Tổng hợp RNA antisense

Thông số kỹ thuật

Thành phần

Vận chuyển và lưu trữ

Sản phẩm được vận chuyển kèm đá khô và có thể bảo quản ở nhiệt độ -15℃ ~ -25℃ trong 12 tháng.

Hướng dẫn sử dụng

rã đông các thành phần 11151-A/B/C trên đá, khuấy nhẹ và trộn đều từng thành phần thuốc thử. Sau đó, lắp ráp các thành phần sau thành phần trong ống không có RNase:

Bảng 1: Chuẩn bị phản ứng

*Chúng tôi đề xuất không vượt quá 2 μg là tổng lượng RNA đầu vào. Trong trường hợp biểu hiện gen mục tiêu thấp, tổng lượng RNA đầu vào có thể tăng lên tối đa là 5 μg.

Bảng 2: Giao thức phản ứng

*Quá trình này bao gồm cả phiên mã ngược và tiêu hóa gDNA.

Sản phẩm phiên mã ngược phù hợp để sử dụng ngay trong phản ứng qPCR hoặc có thể được bảo quản ở -20°C trong thời gian ngắn. Để bảo quản lâu dài, chúng tôi khuyên bạn nên chia nhỏ và bảo quản ở -80°C để tránh nhiều chu kỳ đông lạnh-rã đông.

Các biện pháp phòng ngừa:

1. Mọi quy trình phải được thực hiện trên đá, hết sức cẩn thận để tránh nhiễm RNase.

2. Đảm bảo an toàn và sức khỏe của bạn bằng cách mặc áo khoác phòng thí nghiệm và găng tay dùng một lần.

3. Sản phẩm này chỉ dùng cho mục đích nghiên cứu khoa học và không được sử dụng cho mục đích khác.