Bộ dụng cụ Hieff Superfast DNA Methylation Bisulfite (dạng cột) chuyển đổi nhanh chóng các cytosine chưa methyl hóa trong các mẫu DNA thành uracil, trong khi vẫn giữ nguyên các cytosine đã methyl hóa. Trong quá trình xử lý bisulfite ở nhiệt độ cao, DNA sợi đôi bị biến tính thành các sợi đơn. Với sự hiện diện của HSO3-, các gốc cytosine trải qua quá trình khử amin và được chuyển đổi thành uracil, trong khi các cytosine đã methyl hóa vẫn không thay đổi. Trong quá trình khuếch đại PCR tiếp theo, uracil được thay thế bằng thymine (T). Quá trình chuyển đổi chỉ mất 5 phút, chứa đầu vào DNA trong khoảng từ 100 pg đến 2 μg và đạt hiệu suất chuyển đổi ≥99% đối với các cytosine chưa methyl hóa. DNA đã chuyển đổi phù hợp cho các ứng dụng hạ nguồn như khuếch đại PCR và giải trình tự NGS.

Tính năng

Đầu vào thấp: Thích hợp để chuyển đổi các mẫu có khối lượng từ 100 pg đến 2 μg

Thời gian chuyển đổi ngắn: khoảng 5 phút.

Thiệt hại mẫu tối thiểu: Duy trì tính toàn vẹn của mẫu sau khi chuyển đổi.

Hiệu suất chuyển đổi cao: Tỷ lệ chuyển đổi ≥99%, tỷ lệ chuyển đổi cao ở vùng có GC cao với tỷ lệ dương tính giả thấp.

Thích hợp cho các mẫu hiếm, chẳng hạn như chuyển đổi metyl hóa DNA tế bào đơn.

Có khả năng chuyển đổi metyl hóa các mẫu RNA.

Sản phẩm Thành phần

Ghi chú:

Đối với 10 lần thử nghiệm trên mỗi hộp: Thêm 4,4 mL ethanol khan vào dung dịch rửa.

Đối với 50 xét nghiệm trên một hộp: Thêm 22 mL etanol khan vào dung dịch rửa.

Sau khi thêm etanol khan, đảo ngược và trộn đều, sau đó cất giữ để sử dụng sau. Đảm bảo nắp chai được đóng chặt để tránh etanol bay hơi, có thể ảnh hưởng đến hiệu suất thuốc thử.

Nhân vật

Hình 4. Chuyển đổi bisulfit trên các mẫu DNA bộ gen người được thực hiện bằng cả bộ chuyển đổi 12225 và bộ chuyển đổi Q của đối thủ cạnh tranh. Sau đó, bộ chuẩn bị thư viện DNA sợi đơn đặc hiệu metyl hóa được sử dụng để tạo ra các thư viện. Dữ liệu kiểm soát chất lượng và năng suất thư viện được trình bày ở trên. Kết quả chứng minh rằng khi giải trình tự các thư viện gộp từ cả bộ 12225 và bộ Q của đối thủ cạnh tranh, bộ 12225 tạo ra dữ liệu đầu ra cao hơn, đạt tỷ lệ đúng mục tiêu (%) cao hơn và thể hiện tỷ lệ trùng lặp thấp hơn (%).

Vận chuyển và lưu trữ

Bảo quản dung dịch chuyển đổi 12225-A ở nhiệt độ phòng, tránh ánh sáng. Bảo quản các thành phần khác ở nhiệt độ phòng. Thời hạn sử dụng là 12 tháng.

Ghi chú:

1. Để đảm bảo thành công của các thí nghiệm hạ lưu, hãy định lượng chính xác tổng lượng DNA đầu vào trong bước chuyển đổi. Nên sử dụng Qubit 3.0/4.0 để định lượng DNA, với tỷ lệ A260/A280 từ 1,7 đến 1,9. Phạm vi DNA đầu vào phải nằm trong khoảng từ 100 pg đến 2 μg, với phạm vi tối ưu là từ 100 ng đến 1 μg. Lượng DNA đầu vào không đủ có thể cản trở quá trình phát hiện hạ lưu, trong khi lượng đầu vào quá nhiều có thể làm giảm hiệu quả phục hồi và chuyển đổi.

2. Dung dịch chuyển đổi, dung dịch khử lưu huỳnh và dung dịch rửa có chứa thành phần dễ bay hơi. Sau khi sử dụng, vặn chặt nắp ngay và bảo quản ở nhiệt độ phòng.

3. Đối với các mẫu sau khi chuyển đổi, hãy tiến hành các thí nghiệm hạ lưu ngay lập tức. Đối với việc lưu trữ ngắn hạn, hãy giữ ở -20°C và đối với việc lưu trữ dài hạn, hãy giữ ở -80°C.

4. Để đảm bảo an toàn và sức khỏe, hãy mặc áo khoác phòng thí nghiệm và găng tay dùng một lần trong quá trình thực hiện.

5. Sản phẩm này chỉ dùng cho mục đích nghiên cứu!

Hướng dẫn

Chuẩn bị thuốc thử và vật tư tiêu hao: Ống ly tâm vô trùng 1,5 mL, nước không có enzyme, ethanol tuyệt đối, ống PCR;

tôi Chuyển đổi bisulfit:

1) Chuẩn bị ống PCR vô trùng tương ứng theo số lượng mẫu cần thử nghiệm và chuẩn bị hệ thống phản ứng theo bảng sau:

2) Hệ thống chuyển đổi

Dùng pipet thổi và trộn hệ thống trên hoặc dùng máy vortex trộn trong 5 giây, sau đó ly tâm trong thời gian ngắn và ly tâm dung dịch phản ứng xuống đáy ống PCR.

v Lưu ý: 1. Lúc này, tổng thể tích dung dịch phản ứng trong ống PCR là 200 μL. Để quá trình chuyển đổi hoàn thiện hơn, dung dịch phản ứng nên được chia thành các phần bằng nhau và chuyển sang ống PCR vô trùng mới sau khi thổi và trộn ở bước 2), và tiến hành quy trình chuyển đổi. Sau khi chuyển đổi, các dung dịch phản ứng trong hai ống PCR được kết hợp vào cùng một cột tinh chế để tinh chế.

2. Nếu thể tích mẫu nằm trong khoảng từ 20 đến 40 μL, hãy giảm thể tích dung dịch chuyển đổi để duy trì tổng thể tích là 200 μL.

3. Nếu thể tích mẫu là 50 μL, thêm 150 μL dung dịch chuyển hóa, tổng thể tích được duy trì ở mức 200 μL và thời gian chuyển hóa được kéo dài đến 6-10 phút.

3) Thiết lập chương trình chuyển đổi CT

Ống PCR được đặt trên thiết bị PCR có chương trình cài đặt sẵn để thực hiện phản ứng.

tôi Thanh lọc

1) Tchuyển 200 μL sự chuyển đổi giải pháp cho Pcột nước tiểuS, máy ly tâm trong 30-60 giây 13000 g, loại bỏ phần lọc và đưa cột lọc vào Cống thu thậpS lại;

2) Thêm 100 μL Đệm rửa vào trong Cột thanh lọc (xác nhận rằng etanol tuyệt đối đã được thêm vào), ly tâm trong 30-60 giây 13000 g, loại bỏ phần lọc và đưa cột lọc vào Cống thu thậpS lại;

3) Thêm 200 μL Đệm khử lưu huỳnh vào Cột thanh lọc và để phản ứng đứng ở nhiệt độ phòng trong 20 phút. Sau phản ứng, ly tâm trong 30-60 giây 13000 g, loại bỏ phần lọc và đặt Cột thanh lọc trong Cống thu thậpS lại;

4) Thêm 200 μL Đệm rửa đến Cột thanh lọc, máy ly tâm trong 30-60 giây 13000 g loại bỏ phần lọc và đặt Pcột nước tiểuS trong Cống thu thậpS lại;

5) Lặp lại bước 4) một lần;

6) Chuyển giao Cột thanh lọc vào ống ly tâm 1,5 mL đã chuẩn bị, thêm 10-30 μL Đệm rửa giải vào giữa màng lọc sau khi mở nắp và sấy khô, và thu thập ADN sau khi để yên trong 1 phút ở nhiệt độ phòng và ly tâm trong 1 phút ở 13000 g;

7) Lưu trữ ADN tạm thời ở -20 ℃. Để lưu trữ lâu dài, vui lòng lưu trữ ADN ở nhiệt độ -80 ℃ và tránh việc đông lạnh và rã đông nhiều lần không cần thiết.

Lưu ý: Sản phẩm chuyển đổi tinh khiết có thể được sử dụng trực tiếp trong phản ứng PCR hoặc quá trình giải trình tự tiếp theo.

Thủ công