Sự miêu tả
Mô tả sản phẩm
Bộ dụng cụ chuẩn bị thư viện RNA chế độ kép Hieff NGS™ Ultima là bộ dụng cụ xây dựng thư viện giải trình tự RNA toàn phần cho nền tảng giải trình tự Illumina® và MGI®, bao gồm thuốc thử phân mảnh RNA, thuốc thử phiên mã ngược, thuốc thử tổng hợp ds-cDNA thông thường và đặc hiệu từng sợi, và thuốc thử khuếch đại thư viện. Thư viện giải trình tự có thể được xây dựng sau bộ dụng cụ tinh chế mRNA hoặc bộ dụng cụ loại bỏ rRNA. Mô-đun tổng hợp hai sợi được trang bị hai bộ đệm để đáp ứng nhu cầu về thư viện thông thường hoặc thư viện đặc hiệu từng sợi. Trong số đó, dTTP được thay thế bằng dUTP trong Bộ đệm tổng hợp hai sợi đặc hiệu từng sợi, do đó có thể thêm dUTP vào sợi thứ hai của cDNA. DNA polymerase có độ trung thực cao được sử dụng trong bộ dụng cụ này không thể khuếch đại khuôn mẫu DNA chứa uracil, đạt được tính đặc hiệu của sợi. Tất cả các thuốc thử được cung cấp đều đã trải qua quá trình kiểm soát chất lượng và xác minh chức năng nghiêm ngặt, đảm bảo tính ổn định và khả năng tái tạo của quá trình xây dựng thư viện ở mức độ lớn nhất.
Luồng công việc
Thành phần sản phẩm
| Thành phần | 12308ES24 | 12308ES96 | |||
| 12308-A | 2× Bộ đệm Frag/Prime | 250 μL | 930 μL | ||
| 12308-B | Hỗn hợp enzyme sợi thứ nhất | 48 μL | 192 μL | ||
| 12308-C | Thuốc thử đặc hiệu sợi | 150 μL | 580 μL | ||
| 12308-D | Đệm sợi thứ 2 (dNTP) | 720 μL | 2×1440 μL | ||
| 12308-E | Bộ đệm sợi thứ 2 (dUTP) | 720 μL | 2×1440 μL | ||
| 12308-F | Hỗn hợp enzyme sợi thứ 2 | 120 μL | 480 μL | ||
| 12308-G | Tăng cường thắt chặt | 720 μL | 2×1440 μL | ||
| 12308-H | T4 DNA Ligase mới | 120 μL | 480 μL | ||
| 12308-Tôi | 2×Super Canace® II Hỗn hợp độ trung thực cao | 600 μL | 2×1200 μL | ||
| 12308-K | Nuclease không có H2O | 300 μL | 1000 μL | ||
Lưu ý: Bộ sản phẩm này tương thích với cả nền tảng Illumina và MGI, nhưng Illumina bổ sung hoặc MGI Hỗn hợp sơn lót (Mã số Cat# 13335 Hỗn hợp sơn lót cho Illumina và Cat# 13334 Primer Mix cho MGI ) là yêu cầu.
Vận chuyển và lưu trữ
Các thành phần của Bộ chuẩn bị thư viện mRNA chế độ kép Hieff NGS™ Ultima trong Hộp I được vận chuyển cùng với túi chườm đá và có thể bảo quản ở nhiệt độ 2-8°C trong một năm.
Các thành phần của Bộ chuẩn bị thư viện mRNA chế độ kép Hieff NGS™ Ultima trong Hộp II được vận chuyển cùng với đá khô và có thể bảo quản ở nhiệt độ -20°C trong một năm.
Thận trọng
1 Hoạt động
1.1 Vì sự an toàn và sức khỏe của bạn, vui lòng mặc thiết bị bảo vệ cá nhân (PPE), chẳng hạn như áo khoác phòng thí nghiệm và găng tay dùng một lần, khi sử dụng sản phẩm này. Sản phẩm này CHỈ dành cho mục đích nghiên cứu!
1.2 Rã đông các thành phần ở nhiệt độ phòng. Trộn đều bằng cách đảo ngược lên xuống nhiều lần, quay xuống một lúc và cho vào đá để sử dụng.
1.3 Nên thực hiện từng bước phản ứng trong máy luân nhiệt có nắp đậy được làm nóng. Máy luân nhiệt phải được làm nóng trước đến nhiệt độ đã đặt trước khi sử dụng.
1.4 Cần cung cấp vật tư không bị nhiễm RNase và vệ sinh khu vực thí nghiệm thường xuyên.
1.5 Các thao tác không đúng cách rất có thể gây ra ô nhiễm khí dung, ảnh hưởng đến độ chính xác của kết quả. Khuyến cáo nên cô lập vật lý bắt buộc các vùng trộn phản ứng PCR và vùng xét nghiệm tinh chế sản phẩm PCR. Được trang bị các thiết bị như pipet chuyên dụng để xây dựng thư viện.
2. Thắt ống nối
2.1 Bộ chuyển đổi dài Illumina hoặc MGI (Bộ chuyển đổi mã vạch) và bộ chuyển đổi ngắn có sẵn để khách hàng lựa chọn theo yêu cầu thử nghiệm của mình.
2.2 Nên chọn bộ chuyển đổi thương mại chất lượng cao. Nếu chọn bộ chuyển đổi tự chế, vui lòng giao phó cho một công ty có kinh nghiệm trong tổng hợp mồi NGS và lưu ý về nhu cầu kiểm soát ô nhiễm nghiêm ngặt. Ngoài ra, nên chuẩn bị dung dịch ủ DNA trong băng ghế sạch và chỉ vận hành một loại bộ chuyển đổi mỗi lần để tránh ô nhiễm chéo.
2.3 Vui lòng rã đông bộ chuyển đổi trên đá hoặc ở nhiệt độ 4°C; khi vận hành ở nhiệt độ phòng, nhiệt độ phòng thí nghiệm không được vượt quá 25°C để tránh bộ chuyển đổi bị biến tính.
2.4 Nồng độ của bộ chuyển đổi ảnh hưởng trực tiếp đến hiệu quả gắn kết và năng suất thư viện. Thể tích bộ chuyển đổi được thêm vào bộ dụng cụ được cố định ở mức 5 μl. Bộ chuyển đổi được khuyến nghị pha loãng với đệm TE 0,1× và bộ chuyển đổi đã pha loãng có thể được bảo quản ở 4°C trong 48 giờ. Bảng 1 liệt kê lượng bộ điều hợp được khuyến nghị cho các lượng RNA đầu vào khác nhau.
Bảng 1-1 Lượng bộ điều hợp Illumina được khuyến nghị cho các RNA đầu vào khác nhau
| Tổng RNA đầu vào | Ánh sáng Nồng độ kho bộ chuyển đổi |
| 10 ng | 1 μM |
| 100 ng | 1,5 μM |
| 500 ng | 3 μM |
| ≥1 μg | 5 μM |
Bảng 1-2 Lượng bộ điều hợp MGI® được khuyến nghị cho các RNA đầu vào khác nhau
| Tổng RNA đầu vào | MGI Nồng độ kho bộ chuyển đổi |
| 100-499 ng | 2 μM |
| 500-4000ng | 5 μM |
*Có thể điều chỉnh cách sử dụng Bộ chuyển đổi tùy theo các loại mẫu RNA tổng số và lượng đầu vào khác nhau.
3 Thư viện khuếch đại
3.1 Trên cơ sở DNA polymerase thế hệ đầu tiên, DNA polymerase có độ trung thực cao trong bộ dụng cụ đã cải thiện đáng kể tính đồng nhất khuếch đại và không có hiện tượng sai lệch khuếch đại.
3.2 Nếu Bộ chuyển đổi chỉ mục (còn gọi là bộ chuyển đổi dài hoặc bộ chuyển đổi Y lớn) được gắn vào DNA mục tiêu, hỗn hợp mồi được cung cấp trong bộ dụng cụ này có thể được sử dụng để khuếch đại; nếu sử dụng "bộ chuyển đổi ngắn" hoặc "bộ chuyển đổi Y nhỏ" để gắn DNA, cần có mồi chỉ mục để khuếch đại.
3.3 Số chu kỳ khuếch đại phải được kiểm soát chặt chẽ. Khuếch đại không đủ có thể dẫn đến năng suất thư viện thấp; Khuếch đại quá mức có thể dẫn đến tăng độ lệch, lỗi, đọc trùng lặp, sản phẩm ghép và tích tụ đột biến mở rộng. Bảng 2 liệt kê số chu kỳ được khuyến nghị cho khuếch đại PCR.
Bảng 2 Số chu kỳ được khuyến nghị để tạo thư viện RNA*
| Tổng RNA đầu vào | Số chu kỳ | |
| Không có sợi | Bị mắc kẹt | |
| 10 ng | 15 | 15 |
| 100 ng | 14 | 14 |
| 500 ng | 12 | 13 |
| 1 μg | 11 | 12 |
Lưu ý: *Sản lượng của thư viện không chỉ liên quan đến số lượng đầu vào và số chu kỳ khuếch đại nhưng cũng bị ảnh hưởng bởi chất lượng mẫu, điều kiện phân mảnh và điều kiện phân loại. Trong quá trình xây dựng thư viện, hãy lựa chọn điều kiện phù hợp nhất theo tình hình thực tế.
4 Làm sạch DNA dựa trên hạt và lựa chọn kích thước
4.1 Có nhiều bước trong quá trình xây dựng thư viện đòi hỏi phải có hạt từ tính tinh chế DNA. Chúng tôi khuyên dùng Hạt chọn lọc DNA Hieff NGS™ (
4.2 Các hạt từ tính phải được cân bằng ở nhiệt độ phòng trước khi sử dụng, nếu không năng suất sẽ giảm và hiệu quả lựa chọn kích thước sẽ bị ảnh hưởng.
4.3 Các hạt từ tính phải được trộn đều bằng cách dùng máy trộn xoáy hoặc hút bằng pipet trước khi sử dụng.
4.4 Không hút hạt khi chuyển dịch trong, ngay cả lượng hạt rất nhỏ cũng có thể ảnh hưởng đến các phản ứng sau.
4.5 Ethanol 80% phải được pha chế ngay, nếu không sẽ ảnh hưởng đến hiệu suất thu hồi.
4.6 Hạt từ tính phải được sấy khô ở nhiệt độ phòng trước khi rửa giải sản phẩm. Độ khô không đủ sẽ dễ khiến etanol còn lại ảnh hưởng đến các phản ứng tiếp theo; độ khô quá mức sẽ khiến hạt từ tính bị nứt và làm giảm hiệu suất tinh chế. Thông thường, sấy khô ở nhiệt độ phòng trong 3-5 phút là đủ để hạt khô hoàn toàn.
4.7 Nếu cần, các mẫu DNA đã được tinh chế hoặc chọn kích thước được rửa giải trong đệm TE có thể được bảo quản ở 4°C trong 1-2 tuần hoặc ở -20°C trong một tháng.
5 Phân tích chất lượng thư viện
5.1 Thông thường, chất lượng của thư viện được xây dựng có thể được đánh giá bằng cách phân bố độ dài và phát hiện nồng độ.
5.2 Phát hiện nồng độ thư viện: phương pháp dựa trên thuốc nhuộm huỳnh quang DNA sợi đôi, chẳng hạn như Qubit®, PicoGreen®, v.v.; định lượng tuyệt đối dựa trên qPCR.
5.3 Các phương pháp dựa trên phát hiện quang phổ, chẳng hạn như NanoDrop®, v.v., không áp dụng được để phát hiện nồng độ thư viện.
5.4 qPCR được khuyến nghị để phát hiện nồng độ thư viện: Thông qua Qubit®, PicoGreen® và các phương pháp khác dựa trên thuốc nhuộm huỳnh quang DNA sợi đôi, phương pháp này không thể phân biệt hiệu quả giữa các sản phẩm được gắn vào bộ điều hợp ở một đầu, các sản phẩm không được gắn vào bộ điều hợp ở cả hai đầu và các sản phẩm sợi đôi không hoàn chỉnh khác. Định lượng tuyệt đối của qPCR dựa trên nguyên tắc khuếch đại PCR, chỉ định lượng thư viện hoàn chỉnh của bộ điều hợp ở cả hai đầu của mẫu (thư viện có thể được giải trình tự), loại trừ sự can thiệp của các thư viện không giải trình tự không được gắn vào bộ điều hợp ở cả hai đầu một đầu hoặc hai đầu.
5.5 Việc phát hiện phân bố chiều dài thư viện có thể được thực hiện bằng Agilent Bioanalyzer 2100 và các thiết bị khác dựa trên nguyên tắc điện di mao quản hoặc vi lưu chất.
Tài liệu:
12308ES-Hieff NGS™ Ultima Bộ dụng cụ chuẩn bị thư viện RNA chế độ kép-Ver.EN20230327.pdf
Trích dẫn & Tài liệu tham khảo:
[1] Giải mã hệ vi sinh vật đường ruột của cá trắm cỏ thông qua phương pháp đa ô-míc
M Li, H Liang, H Yang, Q Ding, R Xia, J Chen, W Zhou… - Hệ vi sinh vật, 2024 IF:19.4
[2] Sàng lọc CRISPR gộp xác định P-Bodies là chất ức chế quá trình chuyển đổi biểu mô-trung mô ung thư
L Fang, L Zhang, M Wang, Y He, J Yang, Z Huang… - Nghiên cứu ung thư, 2024 IF:12.7
[3] Peptide 1 có nguồn gốc từ Klotho ức chế sự lão hóa tế bào ở thận bị xơ hóa bằng cách khôi phục biểu hiện Klotho thông qua điều hòa sau phiên mã
X Zhang, L Li, H Tan, X Hong, Q Yuan, FF Hou… - Theranostics, 2024 IF:12.4
[4] Tế bào gốc phủ một phần bộ xương ngoài để phục hồi cơ tim bị nhồi máu
H He, Y Yuan, Y Wu, J Lu, X Yang, K Lu… - Vật liệu tiên tiến, 2023 IF: 29,4
[5] Đổi mới bộ gen và sự điều chỉnh lại hệ thống dây điện trong quá trình tiến hóa của chi bông Gossypium
M Wang, J Li, Z Qi, Y Long, L Pei, X Huang… - Di truyền học tự nhiên, 2022 IF:41.379
[6] Các alen nguy cơ MTMR3 tăng cường khả năng miễn dịch IgA do thụ thể Toll Like 9 gây ra trong bệnh thận IgA
Y Wang, T Gan, S Qu, L Xu, Y Hu, L Liu, S Shi, J Lv… - Kidney International, 2023 IF:19.6
[7] Chia tách phần bổ sung của trình biên tập cơ sở để giảm thiểu các chỉnh sửa không đúng mục tiêu
X Xiong, K Liu, Z Li, FN Xia, XM Ruan, X He, JF Li - Thực vật tự nhiên, 2023 IF:18.6
[8] Các túi màng ngoài của vi khuẩn được thiết kế bao bọc các adenovirus gây ung thư giúp tăng cường hiệu quả của liệu pháp vi-rút ung thư bằng cách tăng cường quá trình tự thực của tế bào khối u
W Ban, M Sun, H Huang, W Huang, S Pan… - Nature Communications, 2023 IF:16.6
[9] Khả năng kháng IFNγ của tế bào ung thư có thể xảy ra thông qua hoạt động sửa chữa đứt gãy sợi đôi được tăng cường
T Han, X Wang, S Shi, W Zhang, J Wang, Q Wu… - Nghiên cứu miễn dịch học ung thư, 2023 IF: 12.0
[10] Liệu pháp kết hợp dựa trên hệ thống phân phối nano sinh học mục tiêu kép để khắc phục tình trạng kháng cisplatin ở ung thư biểu mô tế bào gan
Y Huang, Q Kou, Y Su, L Lu, X Li, H Jiang… - Tạp chí Công nghệ sinh học nano, 2023 IF: 10.9
[11] PIAS3 thúc đẩy quá trình ferroptosis bằng cách điều chỉnh TXNIP thông qua con đường truyền tín hiệu TGF-β trong ung thư biểu mô tế bào gan
W Bao, J Wang, K Fan, Y Gao, J Chen - Nghiên cứu dược lý, 2023 IF:9.3
[12] Xác định mục tiêu protein liên kết RNA với HyperTRIBE trong Saccharomyces cerevisiae
W Piao, C Li, P Sun, M Yang, Y Ding, W Song… - Tạp chí Quốc tế về Khoa học Phân tử, 2023 IF:5.6
[13] Hệ vi sinh vật điều chỉnh quá trình chuyển đổi vòng đời và động lực của tế bào giun tròn ở sứa
S Peng, L Ye, Y Li, F Wang, T Sun, L Wang, W Hao… - Iscience, 2023 IF: 5.08
[14] Hồ sơ bản sao và miRNA tiết lộ mạng lưới điều hòa và các chất điều hòa chính của sự hình thành mạch gỗ thứ cấp trong cây dương “84K”
H Wang, P Zhao, Y He, Y Su, X Zhou… - Tạp chí khoa học phân tử quốc tế, 2023 IF:5.6
Thanh toán & Bảo mật
Thông tin thanh toán của bạn được xử lý an toàn. Chúng tôi không lưu trữ chi tiết thẻ tín dụng cũng như không có quyền truy cập vào thông tin thẻ tín dụng của bạn.
Cuộc điều tra
Bạn cũng có thể thích
Câu hỏi thường gặp
Sản phẩm chỉ dành cho mục đích nghiên cứu và không dùng để điều trị hoặc chẩn đoán ở người hoặc động vật. Sản phẩm và nội dung được bảo vệ bởi các bằng sáng chế, nhãn hiệu và bản quyền thuộc sở hữu của
Một số ứng dụng có thể yêu cầu thêm quyền sở hữu trí tuệ của bên thứ ba.